林麝（Moschus berezovskii）细胞遗传学及分子标记微卫星的研究

【摘要】：麝是我国极其重要的资源动物,资源量和麝香产量约占全世界70%以上。由于野外乱捕滥猎和栖息地的不断破坏,我国麝类数量急剧减少、现存麝类已面临濒危。2002年11月,麝科所有种都调整为国家一级保护野生动物。麝的珍贵引起了许多生物学工作者的浓厚兴趣,但已有的研究工作主要集中于麝的生态学、分类学、组织学、生理学以及麝香的药理学与临床应用等方面,对麝的遗传学研究很少。本研究对林麝(Moschus berezovskii)的核型、染色体G-带带型、林麝微卫星DNA的分离和多态性进行了研究,并对野生和圈养林麝群体的遗传多样性进行了分析。 本研究以林麝(M. berezovskii)外周血淋巴细胞为实验材料,首先建立了适合林麝淋巴细胞增殖的培养体系,即在RPMI 1640综合培养基中加入等量的植物血球凝集素PHA和伴刀豆球蛋白ConA,38℃培养。利用此法培养的细胞用于制备染色体,确定林麝核型是2N=58,且全都是端着丝粒染色体。本研究还首次应用染色体G-带技术,对林麝染色体的G-带带型进行了研究。结果表明,林麝核型中,最长的一条染色体是X染色体,最短的是Y染色体。 由于微卫星标记方法的可靠性和特异性,本研究首先构建了3个林麝(M.berezovskii)基因组微卫星富集文库,即(AC)_n文库、(AAG)_n文库和(GATA)_n文库,每个文库含有上万个转化子。(AC)_n文库中的阳性克隆率约为75%。测序结果表明,阳性克隆含有(AC)_n重复序列的比例高达98%,约有10%的阳性克隆重复