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《四川大学》 2004年
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大鼠骨髓间充质干细胞的组织工程学研究

陈润良  
【摘要】:由于各种原因导致的骨缺损和坏死的治疗是需要多学科协作的临床难题。本实验改进取材方法,体外分离、培养、扩增大鼠骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs);体外矿化诱导MSCs,为骨组织工程提供种子细胞。利用自体骨髓间充质干细胞和珊瑚羟基磷灰石(Coral Hydroxyapatite,CHA)、羟基磷灰石磷酸三钙(Hydroxyapatite/Tricalcium Phosphate,HA/TCP)、聚乳酸聚乙醇酸共聚物(Polylacticcoglycollic Acid,PLGA)和藻酸盐凝胶四种支架材料复合制成组织工程化骨,并采用组织工程化骨修复大鼠颅骨极量缺损以观察并比较此四种组织工程化骨的骨修复效果。以藻酸盐凝胶为支架材料,以经体外软骨向诱导的大鼠骨髓间充质干细胞为种子细胞,构建组织工程化软骨,植入大鼠体内异位成软骨。利用聚乳酸聚乙醇酸(PLGA)和藻酸盐凝胶作为支架材料,与大鼠骨髓间充质干细胞复合制成组织工程化骨,并探讨和比较其在裸鼠体内异位成骨的能力。 采用改进取材法取大鼠胫骨,冲取骨髓,密度梯度离心结合贴壁培养法分离纯化大鼠骨髓MSCs,传代扩增并进行常规矿化诱导。检测方法:细胞形态学观察;MTT法测定生长曲线;定性和定量的碱性磷酸酶检测;Von Kossa's矿化结节染色;Ⅰ、Ⅲ胶原免疫组化检测。取大鼠自体骨髓间充质干细胞,经体外扩增及矿化诱导14天后与CHA、HA/TCP、PLGA和藻酸盐凝胶复合,制成组织工程化骨,并植入修复大鼠颅骨极量缺损。术后4周、8周半数处死动物取材进行以下检测:X光片检测;组织学检测(常规HE染色,改良Masson三色染色);Ⅰ型胶原免疫组织化学染色。分离培养大鼠自体骨髓间充质干细胞,传至第3代后经TGF-β等生长因子软骨向诱导十天后与藻酸钠混合,并滴加氯化钙使其成凝胶后注入大鼠背部皮下。术后4周、8周分别半数处死动物取材进行组织学、Ⅱ型胶原免疫组化、原位杂交、特殊染色及透射电镜观察。取大鼠骨髓间充质干细胞,体外扩增、骨向矿化诱导,与PLGA和藻酸盐凝胶复合培养,制成组织工程化骨。将组织工程化骨植入裸鼠的项背部皮下。分别于术后4周和8周取材检测。切片经组织学(HE染色和改良Masson三色染色)和Ⅰ、Ⅲ胶原免疫组织化学染色以鉴定有无骨组织形成。 采用改进取材法与密度梯度离心及贴壁培养法相结合的分离培养方法能大幅度降低污细胞污染率及实验动物的死亡率、有效分离纯化大鼠骨髓
【学位授予单位】:四川大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:R318.0

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【参考文献】
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