收藏本站
《四川大学》 2005年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

第一鳃弓外胚间充质细胞牙向分化差异基因的初步筛选

闫征斌  
【摘要】:最新的发育生物学研究证实,在颅神经嵴细胞分化形成牙颌骨器官的过程中,先后经历了颅神经嵴→第一鳃弓外胚间充质→牙颌骨外胚间充质两次关键性级联分化。本研究旨在建立Balb/c胎小鼠第一鳃弓外胚间充质细胞体外培养模型,在此基础上,进行多向诱导分化研究,鉴定其干细胞生物学特性。同时,构建第一鳃弓外胚间充质细胞牙向分化双向抑制消减文库,初步筛选、验证、分析差异表达基因,为全面揭示牙发生、发育的分子调控机制提供理论依据。 首先,精确解剖分离孕9.5天(E9.5)Balb/c胎鼠第一鳃弓,采用组织块法和改良酶消化法对其进行原代培养,利用反复贴壁和多次差异消化法对其进行纯化,通过细胞形态观察、细胞生长曲线描记、计算细胞倍增时间和特异性标记物检测对其细胞生物学特性进行研究。其次,利用端粒酶原位杂交荧光探针和Brdu摄取实验,检测第一鳃弓外胚间充质细胞的增殖和自我更新能力;取第3代细胞,更换不同的条件培养液,观察其在成脂、成内皮和矿化诱导液的刺激下,细胞形态学变化,并检测鉴定相应的特异性细胞表型标记,对细胞的可塑性进行研究。然后,在相同的培养条件下,收取第3代第一鳃弓外胚间充质细胞和E16.5下颌第一磨牙牙乳头细胞,采用抑制消减杂交技术,构建双向抑制消减文库,并对细胞的总RNA质量、双链cDNA酶切效果、接头连接率、抑制消减效率、差异基因的富集程度和载体连接效率进行全面质控分析。最后,在双向抑制消减文库中随机挑
【学位授予单位】:四川大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:R78

手机知网App
【相似文献】
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 闫征斌;刘磊;田卫东;林云锋;李志勇;;第一鳃弓外胚间充质细胞牙向分化上调基因组抑制消减文库的建立[A];2007年第七次全国牙体牙髓病学学术会议论文集[C];2007年
2 邓蔓菁;刘鲁川;安建平;;牙源性上皮在外胚间充质细胞向牙齿样结构形成中的作用[A];全国第三次牙体牙髓病学临床技术研讨会论文汇编[C];2009年
3 金岩;邓蔓菁;史俊南;;外胚间充质干细胞的多向分化及应用前景[A];加入WTO和中国科技与可持续发展——挑战与机遇、责任和对策(下册)[C];2002年
4 江宏兵;田卫东;陈希哲;汤炜;刘磊;李晓东;;诱导颅神经嵴向第一鳃弓外胚间充质细胞分化的实验研究[A];2004年中国口腔颌面修复重建外科学术会议论文汇编[C];2004年
5 张建平;金岩;邓蔓菁;张光东;周泽渊;赵文明;;外胚间充质干细胞的可塑性与应用研究[A];全面建设小康社会:中国科技工作者的历史责任——中国科协2003年学术年会论文集(上)[C];2003年
6 焦鹏;张彦定;;人类乳牙牙髓干细胞的体外快速扩增及其成牙潜能的研究[A];中国细胞生物学学会2005年学术大会、青年学术研讨会论文摘要集[C];2005年
7 金岩;;组织工程研究[A];第一届《组织工程在口腔医学中的应用》研习班讲义[C];2002年
8 谢家敏;田卫东;陈希哲;郑晓辉;汤炜;刘磊;;体外诱导人牙乳头间充质细胞向成牙本质细胞样细胞分化[A];2004年中国口腔颌面修复重建外科学术会议论文汇编[C];2004年
9 吕红兵;金岩;;骨形成蛋白异常表达及凋亡在腭裂形成中的基因调控[A];生命科学与生物技术:中国科协第三届青年学术年会论文集[C];1998年
10 谢家敏;田卫东;汤炜;郑晓辉;陈希哲;刘磊;;人牙乳头间充质细胞向神经细胞样细胞诱导分化的实验研究[A];2004年中国口腔颌面修复重建外科学术会议论文汇编[C];2004年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 闫征斌;第一鳃弓外胚间充质细胞牙向分化差异基因的初步筛选[D];四川大学;2005年
2 王小竞;尼古丁对鼠牙胚发育影响的研究[D];第四军医大学;2002年
3 赵征;牙胚发育中ADAM28基因的克隆、表达和功能研究[D];第四军医大学;2006年
4 陆怀秀;D1x1和D1x2基因在牙胚发育中调控作用的研究[D];第四军医大学;2001年
5 朱锋;小鼠牙本质涎磷蛋白基因转染诱导成体间充质干细胞牙向分化的实验研究[D];四川大学;2006年
6 肖文林;叶酸拮抗亚甲基四氢叶酸还原酶基因沉默对腭突间充质细胞增殖与凋亡影响的机制研究[D];四川大学;2006年
7 林云锋;脂肪基质细胞多向分化能力及其在组织工程中应用的研究[D];四川大学;2006年
8 江宏兵;颅神经嵴干细胞的体外分离培养及其成牙分化诱导研究[D];四川大学;2004年
9 武俊杰;利用牙囊细胞和脂肪间充质干细胞构建组织工程牙周样结构的研究[D];第四军医大学;2008年
10 陈磊;人牙囊细胞克隆分选及其分化功能的相关研究[D];第四军医大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前5条
1 孙吏聪;胰岛素样生长因子诱导外胚间充质细胞向成骨细胞分化的实验研究[D];昆明医学院;2008年
2 屈铁军;Dlx5基因在小鼠牙胚发育过程中的功能研究[D];第四军医大学;2005年
3 朱轶萍;人牙髓细胞在体外增殖和分化潜能的实验研究[D];南京医科大学;2008年
4 段晓燕;小鼠腭裂相关基因mcprl的分布及真核转染的初步研究[D];第四军医大学;2004年
5 庞楠;PVA作为构建组织工程牙髓牙本质复合体支架材料的体外实验研究[D];第四军医大学;2010年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026