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《四川大学》 2003年
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血管内皮生长因子(VEGF)基因转染促进骨折愈合的实验研究

钟刚  
【摘要】:【目的】血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)能促进新生血管形成,在骨生成和骨折愈合过程中起着十分重要的作用。细胞因子在体内易被很快降解,全身持续用药极不方便。应用转基因技术将目的基因DNA 片段整合入宿主细胞,使其产生稳定有效的表达,具有积极意义。本实验研究的目的是:(1)了解外源性VEGF 基因表达在成骨细胞增殖、分化和成熟中的作用。(2)寻找外源性VEGF 体内转染的有效途径。(3)了解外源性VEGF 基因表达对于骨折愈合的促进作用,为下一步的实验做准备。 【方法】(1)通过大肠杆菌和RPM?4G 质粒纯化试剂盒进行pBLAST49-mVEGF 质粒的扩增、提取、纯化和鉴定。(2)利用阳离子脂质体Lipofectamine 转染将pBLAST49-mVEGF 基因导入体外培养的成骨细胞,观察外源性VEGF 在成骨细胞内的表达,及其对成骨细胞生长曲线、细胞周期、合成分泌骨钙素、I 型胶原的影响。(3)建立大鼠股骨干骨折模型,将Lipofectamine、pBLAST49-mVEGF 质粒混合物局部注射于骨折断端的骨膜下,在术后不同时间点观察大体标本,X-光摄片和HE 染色比较,观察外源性VEGF 基因在体内表达对于骨折愈合的影响。 【结果】(1)扩增、提取、纯化、鉴定后的pBLAST49-mVEGF 质粒OD260/OD280=1.81,浓度为7.4μg/μl。(2)同步培养后第1、2 天,pBLAST49-mVEGF 基因转染组细胞数大于对照组(无基因转染组),但二者间差异不具有显著性(P0.05);从第3 天开始,二者间差异具有显
【学位授予单位】:四川大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2003
【分类号】:R683

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