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猪源致病性沙门氏菌耐药基因PCR和基因芯片检测技术研究

马孟根  
【摘要】:本研以30株猪源致病性沙门氏菌为检测菌株,进行了各菌株的血清型鉴定,测定了该30株细菌对四大类抗生素的最低抑菌浓度,建立了其耐药基因的PCR检测技术,构建了耐药基因的基因检测芯片,建立了基因芯片检测技术,对30株沙门氏菌的耐药基因进行了检测,主要内容包括以下4个方面: 1、以猪源致病性沙门氏菌为被检菌株,采用玻片凝集试验进行了菌株的血清型鉴定,结果30株菌分属猪伤寒沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、肠炎沙门氏菌和德尔俾沙门氏菌5个血清型。根据GenBank上注册的耐药基因序列,采用DNAStar Primerselect软件设计了24对引物,对沙门氏菌氨基糖苷类、四环素类、磺胺类和氯霉素类四大类抗生素的24种耐药基因进行了扩增,建立了耐药基因的PCR检测方法。对扩增到的11种DNA产物进行了序列测定,采用DNAStar MegAlign软件,将扩增到的DNA产物同GenBank上注册的相应耐药基因进行了比较分析,发现它们之间有很高的同源率(≥95.9%)。BLAST分析结果也发现,各DNA产物与相应耐药基因序列的一致性在90%以上。以上结果表明,11种扩增产物为11种耐药基因,氨基糖苷类耐药基因有aph(3')-Ⅱa、aadA1、aadA2、aadB;四环素类耐药基因有tetA和tetC;磺胺类耐药基因有sulⅠ和sulⅡ;氯霉素类耐药基因有Catl、CmlA和floR基因。将获得的耐约基因在GenBank上进行了注册,注册号分别为:DQ205468、DQ205469、DQ205470、DQ205471、DQ205472、DQ205473、DQ205474、DQ205475、DQ205476、DQ205477、DQ205478。对猪源致病性沙门氏菌四大类抗生素的耐药基因进行全面扩增、测序分析、建立PCR检测方法,在国内还未见报道。


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