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《四川大学》 2006年
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以壳聚糖为载体亲和层析胰蛋白酶

章杰  
【摘要】: 胰蛋白酶属于内切酶,专一水解精氨酸、赖氨酸羧基参与形成的肽键、酰胺键和酯键,应用广泛,经济价值高。本研究的目的是制备一种廉价的亲和吸附剂用于胰蛋白酶纯化,研究亲和吸附剂制备工艺及纯化胰蛋白酶的操作条件,并研究纯化后胰蛋白酶的性质。 提出一种亲和吸附剂的制备工艺,这种亲和吸附剂以壳聚糖为载体,鸡卵类粘蛋白为配基。用盐析的方法从鸡蛋清中提取鸡卵类粘蛋白,用离子交换层析进行纯化。将壳聚糖以简单易行的凝结法制备壳聚糖微球,然后与鸡卵类粘蛋白交联制备亲和吸附剂。以壳聚糖为载体的亲和吸附剂制备过程,与常用的以琼脂糖为载体的制备过程相比较,更加简单,安全。 对亲和吸附剂的制备工艺条件进行了研究。结果表明:在4℃、pH3.5条件下盐析鸡卵类粘蛋白,收率最高,约为16.8%;使用4%NaOH、30%乙醇的水溶液作为凝结液,可有效制备大量壳聚糖微球;配基与活化后的载体交联1h,达到饱和,交联结果为1g壳聚糖对鸡卵类粘蛋白的偶联量为60mg,相应地,对胰蛋白酶的吸附能力为118U,交联后鸡卵类粘蛋白的活性回收率为70%。 对所制备的亲和吸附剂的性质进行了研究。结果表明:固定化后,配基的最适温度大大提高,从游离时的30℃升高到55℃;固定化配基的最适pH上升了0.8,从5.4升到6.2。固定化配基在70℃下保温2.5h,活性稳定,略有升高。制得的亲和吸附剂可重复使用,有较好的机械强度。 以粗胰酶为原料,采用硫酸铵分级沉淀和亲和层析两步操作,分离胰蛋白
【学位授予单位】:四川大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2006
【分类号】:TS201.25

【引证文献】
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【参考文献】
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【共引文献】
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【同被引文献】
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