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林麝IL-2细胞因子的克隆、分析和表达

赖彬  
【摘要】:麝被列入国家Ⅰ类濒危动物,同时又是重要的经济动物,其所产麝香是我国和东亚地区重要的中药成份。我国具有多年的麝驯化和人工养殖历史,但是在麝得种群数和重大疾病防治上一直没有取得大得突破,而这两者都与细菌性感染疾病相关。林麝(Moschus berezovskii)作为目前麝的驯化和人工养殖中相对最成功、养殖规模最大、管理经验最成熟、研究最多的一种动物,其养殖和保护工作也就具有重要的代表意义和经济价值。白介素-2(Inerleukin-2,IL-2)是体内重要的免疫细胞因子之一,具有促进免疫细胞存活和增殖、增强细胞应答和体液应答水平,调节机体自身免疫等作用,临床上被积极应用于包括重建免疫体系、增强免疫应答水平、预防或治疗细菌和病毒感染、辅助其他物理或化学治疗等领域。因此,为了应用细胞因子对麝进行免疫治疗,提高麝对外界环境的自身免疫水平,我们克隆、分析并表达了林麝IL-2基因。 以偶蹄目水牛(Bubalus bubalis,GenBank登录号F363786)、绵羊(Ovis aries,GenBank登录号X55641)、马鹿(Cervus elaphus,GenBank登录号AY52368)3个物种的IL-2开放阅读框(open reading frame,ORF)为参考,在ORF上下游保守区域设计了克隆引物,并以从体外培养的林麝外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中提取的总RNA做为模板,采用RT-PCR技术扩增林麝IL-2的ORF,经T-A克隆转化到大肠杆菌并测序。结果林麝IL-2的ORF全长468bp,编码155氨基酸,与水牛和绵羊的IL-2高度相似。根据IL-2序列,对偶蹄目物种建立进化树,结果支持了麝独立分科的观点。


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