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水稻花粉及精细胞优势表达基因遗传转化

陈兴春  
【摘要】:本实验室从水稻精细胞中克隆得到了3个在精细胞中优势表达的基因:RSG6、RSSG58和RSSG8,并对他们开展了很多研究。本论文进一步展开对RSG6基因的研究工作,在遗传转化方面进行试验,为揭示其生物学功能奠定基础。另外,分离得到了水稻单核、二核与三核花粉,提取RNA用于基因芯片研究。以下为本论文主要研究内容: 1.以水稻中花11号成熟胚为材料,诱导愈伤组织分化成苗,建立了一个较高效率的水稻愈伤组织再生系统,愈伤组织出苗率为89.6%,明显高于已报道的愈伤组织出苗率为81.7%的结果。同时对愈伤组织与再生苗的G-418耐受性做了试验,50mg/L的G-418即可抑制愈伤组织与小苗的生长,可使用此浓度筛选转基因植株。用农杆菌介导法将包含有RSG6反义基因的pBin19-fan质粒转入水稻愈伤组织中,诱导分化,得到了抗性小苗。 2.以水稻花穗为原材料,采用过滤结合蔗糖密度梯度离心的方法,分离得到纯度较高的单核、二核和三核花粉。所得单核、二核及三核花粉纯度分别为95.2%、90.3%和97.6%,高活力花粉的所占的比率依次为60.3%、86.7%和92.3%。分离到的花粉用Rneasy Plant Mini Kit提取得到了高质量的RNA,已用于基因芯片分析水稻花粉优势表达基因;分离得的花粉还可以继续培养,作为细胞生物学研究的材料,来对水稻花粉进行研究。 3.本实验室已经对水稻精细胞优势表达基因RSG6开展了很多研究。为了进一步了解RSG6在体外的表达情况,将其阅读框连入双元载体pBI121中,由35S启动子调控基因。用农杆菌浸染法将重组质粒转入拟南芥中。卡那霉素筛选抗性植株,得到抗性植株并培养收取第二代种子,以用于进一步的实验。为


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