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《四川大学》 2006年
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粘质沙雷氏菌杀虫蛋白的分离纯化及其基因的克隆与表达研究

陶科  
【摘要】:蝗虫是一种主要的草地害虫,对我国农牧业的造成了极大的损失,我国目前控制蝗虫危害的手段主要是采用化学药剂来降低虫口密度,但是过度的使用化学农药对环境造成了相当的危害,迫切需要采用一些生物防治手段来作为替代。因此,蝗虫的生物防治技术应运而生,并日益受到重视。 本实验从蝗虫自然病死虫尸中分离纯化得到一较高毒性的病原菌HR-3,通过形态学观察、生理生化特征分析和分子鉴定将其鉴定为为粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens),为细菌杀虫剂的研究开发提供了新的菌株来源。微生物杀虫剂由于所使用的病原微生物不同,其杀虫原理和机制有所不同,粘质沙雷氏菌HR-3的杀虫活性实验表明,其杀虫活性物质是存在于细菌上清液中的杀虫蛋白。将细菌发酵上清液进行Milipore超滤,除去40kDa以下和80kDa以上的蛋白,获得40-80kDa的杀虫粗蛋白。进一步经过硫酸铵分级沉淀,DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析,Sephacryl S-200凝胶过滤,获得电泳纯的杀虫蛋白。每升发酵液中可获得约10ml杀虫蛋白溶液,冻干可获得4.5mg活性蛋白,SDS-PAGE电泳和凝胶过滤实验表明该杀虫蛋白为单体,分子量约为60kDa。 粘质沙雷氏菌分泌的许多著名的胞外蛋白,分别为核酸酶、磷脂酶、溶血素、含铁细胞、几丁质酶、含铁细胞、蛋白酶、脂肪酶,其中的一种或几种蛋白有可能是杀虫活力因子。通过酶活检测结果表明,纯化的杀虫蛋白仅具备蛋白酶活性,杀虫蛋白应是一种蛋白酶。用EDTA和1-10-phenanthrolin可以抑制杀
【学位授予单位】:四川大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2006
【分类号】:S482.3

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【引证文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 孙蕊芬;赵益;朱麟;;椰心叶甲病原细菌生物学初步研究[J];福建林业科技;2011年01期
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 唐建国,茹炳根,徐长法,胡美浩,朱圣庚;蛋白质工程的研究[J];北京大学学报(自然科学版);1998年Z1期
2 陈秀兰,张玉忠,王运涛,高培基,栾裼武;深海适冷菌SM9913产生的低温蛋白酶[J];海洋科学;2001年01期
3 郑洲,缪锦来,李光友;南极微生物中特殊酶类的研究进展[J];中国海洋药物;2005年04期
4 王瑞丽,欧家鸣,尚鹤龄,杨卫平,周汝敏,许坤一,余尊祥;激光辐照在优良根霉菌株选育中的应用研究[J];激光杂志;1998年04期
5 储卫华,陆承平;嗜水气单胞菌胞外蛋白酶对鲫鱼的致病性[J];南京农业大学学报;2000年02期
6 李焕荣,陈怀青,陆承平;嗜水气单胞菌胞外蛋白酶ECPase54的纯化及特性分析[J];南京农业大学学报;1996年03期
7 钱卫平,汪俭;生物技术与化妆品开发[J];日用化学品科学;1996年06期
8 王海英,薛长湖,孙谧,王跃军,王清印;大菱鲆肠道蛋白酶的分离纯化及性质的初步研究[J];水产学报;2005年05期
9 杨信怡;游雪甫;蒋建东;;溶葡球菌酶研究进展[J];中国生化药物杂志;2005年06期
10 刘高强,王晓玲,周国英,魏美才;微生物农药研究与应用的新进展[J];食品科技;2004年09期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 胡秀彩;吕爱军;陈宏;;产色素温和气单胞菌的特性及其外膜蛋白型研究[J];安徽农业科学;2008年08期
2 陈荣昌;杜泓璇;马尧;羊芹;唐云明;;青鱼胰蛋白酶的分离纯化及部分性质研究[J];安徽农业科学;2008年11期
3 郭永军;魏东;白东清;闫珊珊;吴旋;宁博;陆建权;;金属离子对红白锦鲤肠及肝胰脏蛋白酶活性的影响[J];安徽农业科学;2010年10期
4 葛晨霞;李月红;张培军;吴东明;付云红;;致病性嗜水气单胞菌气溶素基因PCR检测方法的建立[J];安徽农业科学;2010年34期
5 胡王;蒋启欢;范腾飞;江河;叶应旺;;鳊鱼出血病嗜水气单胞菌的分离·鉴定与ERIC-PCR指纹图谱研究[J];安徽农业科学;2012年04期
6 蒋启欢;叶应旺;胡王;江河;陆剑锋;;嗜水气单胞菌毒力因子及病害控制技术研究进展[J];现代农业科技;2012年06期
7 陆海,吴薇,曾庆银,李义,蒋湘宁,王沙生;大肠杆菌BL21(DE3)中表达重组蛋白的研究[J];北京林业大学学报;2001年06期
8 郭庆东;林春滢;刘大伟;陈华;蔡俊鹏;;海南西岛九孔鲍养殖水体中细菌胞外产物的分析[J];水产科学;2008年06期
9 周末;李艳茹;曹世诺;王开艳;李太元;;嗜水气单胞菌灭活苗对林蛙免疫效果的初步研究[J];水产科学;2009年03期
10 齐野;孙向军;梁拥军;乔秀亭;;4种金属离子对宝石鲈蛋白酶活性的影响[J];水产科学;2010年09期
中国重要会议论文全文数据库 前3条
1 王贻莲;李国田;高雯;杨合同;张广志;;活体类微生物杀虫剂的研究与应用[A];山东农业微生物技术学术研讨会论文集[C];2006年
2 李文凭;张健娜;朱西儒;;我国微生物杀虫剂研究与应用的初步分析[A];第三届全国绿色环保农药新技术、新产品交流会暨第二届全国生物农药研讨会论文集[C];2004年
3 陈杰;;生物技术在化妆品研究开发中的应用[A];2004年中国化妆品学术研讨会论文集[C];2004年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 苑博华;伯克霍尔德菌的筛选、鉴定及其发酵产低温脂肪酶的研究[D];江南大学;2010年
2 钟蕾;三角帆蚌细菌性瘟病病原学研究与LasB基因的克隆及表达[D];湖南农业大学;2011年
3 李桂英;Serratia sp.SYBC H发酵产蛋白酶,酶学性质,应用及其基因克隆研究[D];江南大学;2011年
4 储卫华;嗜水气单胞菌侵袭机制及其胞外蛋白酶的研究[D];南京农业大学;2002年
5 黄庆;脱毛蛋白酶的纯化及其基因的克隆与表达研究[D];四川大学;2003年
6 戴小枫;中国植物保护科学技术发展战略研究[D];中国农业科学院;2003年
7 郑爱萍;微生物来源的防病、杀虫相关因子的分离与功能解析研究[D];四川农业大学;2004年
8 杨秀霞;南极细菌Moritella sp.低温脂肪酶基因的克隆与表达[D];中国海洋大学;2004年
9 赵华;UVB照射对酵母菌生理性能的影响与应用研究[D];天津科技大学;2005年
10 刘晓军;刺茄金属蛋白酶基因及病程相关基因的克隆和分析[D];复旦大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 孙国祥;流速、温度对封闭循环水养殖大菱鲆摄食效应和动态投喂模型的研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2011年
2 王亮;灿烂弧菌的鉴定及溶血素检测[D];山东农业大学;2011年
3 周冠月;清开灵注射液中多肽含量的快速测定及杂质蛋白的限量检查[D];北京中医药大学;2011年
4 耿梅;丙戊酸钠对人外周血淋巴细胞功能的影响及人白细胞介素7重组蛋白原核表达载体在大肠杆菌中的表达和鉴定[D];暨南大学;2011年
5 宗志友;海洋放线菌Y12-26次级代谢产物中活性组分的分离纯化、结构鉴定和生物活性的研究[D];上海师范大学;2011年
6 徐辉;深海菌株Bacillus sp. EPPRO6蛋白酶基因多样性、克隆表达及酶学性质分析[D];国家海洋局第三海洋研究所;2011年
7 高峰;幽门螺杆菌重组Bb-vacA-hpaA候选疫苗的构建[D];大理学院;2011年
8 张敏;蛭弧菌YT1的生物学特性分析及其在食品安全领域的初步研究[D];华南理工大学;2011年
9 毛秀秀;嗜水气单胞菌成膜相关基因鉴定及其功能研究[D];集美大学;2011年
10 杨淑君;普城沙雷氏菌Z10发酵工艺、防病效果及种衣剂研究[D];甘肃农业大学;2010年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前6条
1 覃伟权;陈思婷;黄山春;李和帅;;椰心叶甲在海南的危害及其防治研究[J];中国南方果树;2006年01期
2 陆永跃,曾玲,王琳,周荣;棕榈科植物有害生物椰心叶甲的风险性分析[J];华东昆虫学报;2004年02期
3 周荣,曾玲,陆永跃,梁广文,崔志新;椰心叶甲取食行为及取食为害量研究[J];华南农业大学学报;2004年04期
4 张志祥,程东美,江定心,徐汉虹;椰心叶甲的传播、危害及防治方法[J];昆虫知识;2004年06期
5 丁福章;张泽华;张礼生;丁伟;;绿僵菌对椰心叶甲的控制作用研究[J];西南农业大学学报(自然科学版);2006年03期
6 方剑锋,云昌均,金扬,黄伟,李时斌;椰心叶甲生物学特性及其防治研究进展[J];植物保护;2004年06期
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 邓彩萍;光肩星天牛刻槽微生物及其对幼虫致病性的研究[D];北京林业大学;2009年
中国硕士学位论文全文数据库 前2条
1 肖广江;椰心叶甲种群动态及控制措施研究[D];四川农业大学;2005年
2 谢鹏辉;利用绿僵菌对椰心叶甲防治的研究[D];南昌大学;2006年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 胡美浩;人尿激酶原全长cDNA基因的分离与鉴定[J];北京大学学报(自然科学版);1993年02期
2 张丽萍,张贵云;微生物农药研究进展[J];北京农业科学;2000年04期
3 李勇,杨慧敏,李铭刚,文孟良;微生物农药的研究和应用进展[J];贵州农业科学;2003年02期
4 杜蕙;我国生物农药的研究与开发进展[J];甘肃农业科技;2003年06期
5 刘志俊,冯文萍;生物农药新概念新发展[J];化工科技市场;2003年06期
6 杨赞威,张建业,茹炳根,杜锦珠,张龙翔;猪胰蛋白酶自溶后活性产物的亲和层析分离和动力学性质[J];中国科学(B辑 化学 生物学 农学 医学 地学);1986年08期
7 张文珍,蒲继雄,张渭滨,林星,陈元霖,王继勾;激光辐照蓖麻蚕的效应探讨[J];激光生物学;1994年04期
8 万贤国;我国植物激光诱变育种的概况[J];激光生物学;1996年03期
9 王立秋,杨国忠,陈风德;激光诱变的生物学效应及其在动植物遗传育种上的应用[J];激光生物学报;1997年02期
10 周凌云,张玲琪,陈有为,魏蓉城;激光对酶热作用效应的分形及孤子理论分析[J];中国激光;1996年05期
【相似文献】
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1 汪世华,胡开辉,林文雄;植酸酶产生菌的选育及固态产酶条件研究[J];应用生态学报;2005年11期
2 陈荣昌;杜泓璇;马尧;羊芹;唐云明;;青鱼胰蛋白酶的分离纯化及部分性质研究[J];安徽农业科学;2008年11期
3 金汝城;贾超;杨晓华;谭玉玲;侯楠楠;;蓖麻毒蛋白的分离纯化及其对南方根结线虫杀灭效果的研究[J];中国医药生物技术;2008年04期
4 陈丽珍;林毅;张杰;;苏云金芽胞杆菌杀虫蛋白增效物质与增效机理[J];植物保护;2009年01期
5 马赛箭;安超;;乳链菌肽的发酵及分离纯化工艺研究进展[J];保鲜与加工;2011年02期
6 孙燕飞;王翀;程模香;雷勇辉;熊杰;;一种快速筛选产聚羟基烷酸细菌方法的建立[J];河南农业科学;2011年04期
7 冯珊珊;王勤英;宋萍;崔龙;杨君;;嗜线虫致病杆菌HB310菌株对家蚕的毒力及安全性评价[J];蚕业科学;2008年02期
8 汪江波;黄金明;张晶;;透明质酸的发酵及提取工艺[J];华中农业大学学报;2010年05期
9 吴信明;汪洋;苗立中;李振伟;沈志强;;鸭大肠杆菌制苗用基础种子的建立及高密度发酵培养试验研究[J];中国畜牧兽医;2011年06期
10 孙爱飞;杨文鸽;潘云娣;楼乔明;童丽娟;;XS904菌株发酵条件的优化及其杀虫活性物质的理化特性[J];浙江农业学报;2006年06期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 彭素萍;王一明;林先贵;朱泓;;产高温蛋白酶菌株BY25的产酶特性及酶学研究[A];第五次全国土壤生物和生物化学学术研讨会论文集[C];2009年
2 王登峰;王治才;玛利亚木;李建军;杨学云;段新华;;金黄色葡萄球菌毒力及其免疫原性评价方法研究[A];中国畜牧兽医学会2009学术年会论文集(下册)[C];2009年
3 陈建华;黄少烈;朱宝璋;游鹏程;;分子蒸馏技术在天然产物分离纯化上的应用进展[A];全国中药标准研究学术研讨会论文集[C];2005年
4 高占林;党志红;李耀发;王艳;潘文亮;;丙溴磷等3种杀虫剂对华北大黑鳃金龟的室内毒力测定[A];科技创新与绿色植保——中国植物保护学会2006学术年会论文集[C];2006年
5 王念跃;赵伟;端木浩;李勇;黄宇峰;;人肝癌组织特异性γ-谷氨酰转移酶分离纯化[A];第五届全国肝脏疾病临床暨中华肝脏病杂志成立十周年学术会议论文汇编[C];2006年
6 王彩梅;蔡少丽;吴义真;林俊涵;章文贤;施巧琴;林琳;;Cryptococcus laurentii B40胞外脂肪酶的分离纯化及特性分析[A];华东六省一市生物化学与分子生物学学会2006年学术交流会论文集[C];2006年
7 刘卫平;;马铃薯病毒PVX的分离与纯化的研究[A];中国作物学会马铃薯专业委员会2000年年会论文集[C];2000年
8 姚育翠;李向荣;;大孔吸附树脂分离纯化玫瑰花中原花青素[A];第九届全国中药和天然药物学术研讨会大会报告及论文集[C];2007年
9 李君珂;姜子涛;李荣;;树脂吸附法分离纯化首乌叶总黄酮[A];管产学研助推食品安全重庆高峰论坛——2011年中国农业工程学会农产品加工及贮藏工程分会学术年会暨全国食品科学与工程博士生学术论坛论文集[C];2011年
10 石闻华;陈贵林;;HSCCC法分离纯化锁阳乙酸乙酯萃取部分中的化合物[A];第八届全国药用植物及植物药学术研讨会论文集[C];2009年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 陈侠仁 吴平平;加大禁毒力度让人们远离毒品[N];人民政协报;2003年
2 晓艳;金属蛋白酶促使细胞凋亡[N];医药经济报;2002年
3 马浩剑李昕;王柯:五年做到国内第一[N];常州日报;2007年
4 林诚;卡那霉素分离纯化新技术通过鉴定[N];医药经济报;2002年
5 郑灵巧;四川2005年“猪链”疫情元凶确认[N];健康报;2006年
6 ;PCC分离纯化工艺进展速览[N];中国医药报;2006年
7 王自然 记者 刘灿 邓志辉 李勇 张光卿;铲毒苗 打毒贩 戒毒瘾[N];人民公安报;2003年
8 郑成已;伯赛优化人ω干扰素基因工程菌发酵条件[N];中国医药报;2006年
9 记者 王华锋;多数刺梨多糖组分具神经营养活性[N];中国医药报;2006年
10 王宏磊;中药苷类有效成分提取 辅料、工艺各不同[N];中国医药报;2006年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 陶科;粘质沙雷氏菌杀虫蛋白的分离纯化及其基因的克隆与表达研究[D];四川大学;2006年
2 马春玲;海洋酵母普鲁兰类酵母碱性蛋白酶发酵生产、特性研究及基因克隆[D];中国海洋大学;2007年
3 陆志科;竹叶生物活性成分提取分离及其抗菌活性研究[D];中南林学院;2004年
4 徐金瑞;黑大豆种皮花色苷抗动脉粥样硬化及其抗氧化机制研究[D];西北农林科技大学;2006年
5 韩俊友;牛蛙皮肤抗菌肽分离纯化、基因克隆表达及生物学特性的研究[D];吉林大学;2007年
6 陈杰;高密度培养盘基网柄菌及重组可溶性人Fas配体表达的研究[D];浙江大学;2008年
7 华颖;纤维蛋白溶解酶的发酵制备、分离纯化及酶学性质研究[D];江南大学;2008年
8 赵萍;家蚕丝氨酸蛋白酶抑制剂研究[D];西南大学;2008年
9 王元凤;茶多糖的分离纯化、结构及构效关系研究[D];江南大学;2005年
10 段冷昕;梅花鹿茸多肽的化学结构及其抗肝纤维化作用[D];吉林大学;2007年
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1 游清徽;壳聚糖酶的研制及酶法生产壳寡糖[D];江西师范大学;2006年
2 董桂清;产葡甘聚糖酶菌株的筛选及酶的分离纯化[D];广西大学;2007年
3 刘霞;木霉菌的选育及活性成分的分离纯化[D];山东轻工业学院;2009年
4 申丽;重组Pichia pastoris的发酵条件研究及SAM的初步分离纯化[D];扬州大学;2003年
5 王瑞霞;枯草芽孢杆菌B-903菌株的发酵条件及所产抗生素的研究[D];河南农业大学;2005年
6 项炯华;2-氯丙酸脱卤酶的分离纯化[D];浙江大学;2005年
7 蔡扬鹏;织纹螺肌肉中肌原纤维结合型蛋白酶的分离纯化和性质分析[D];集美大学;2007年
8 王青;菌株TR-20对三七中人参皂苷转化的研究及转化产物的分离纯化[D];上海师范大学;2009年
9 张明丽;乳糖酶产生菌筛选、优化培养及在低乳糖奶中的应用[D];南昌大学;2007年
10 雷佳红;耐受有机溶剂的脂肪酶产生菌的筛选及其酶的分离纯化的研究[D];四川师范大学;2008年
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