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《四川大学》 2007年
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丹参总酚酸长循环脂质体的研究

张丽红  
【摘要】: 本文选择丹参总酚酸为模型药物,进行长循环脂质体的制备,以期解决其稳定性差、在血液循环中滞留时间短、体内作用时间短等问题,为开发疗效更好、生物利用度更高、服用更方便的丹参新制剂奠定基础,也为中药新型给药系统的制备和评价提供研究基础和科学依据。 首先建立了丹参总酚酸和丹酚酸B的体外分析方法。采用高效液相色谱法测定丹酚酸B的含量,用紫外分光光度法测定丹参总酚酸以丹酚酸B计的含量。采用建立的分析方法考察了丹参总酚酸的稳定性及油水分配系数,实验结果表明温度、光照、pH、超声对丹参总酚酸含量影响较小,温度、光照、超声对丹酚酸B含的含量影响也较小,但pH对丹酚酸B影响较大,碱性条件下丹酚酸B的含量很快降低,pH小于4也会降低,但降低幅度不及碱性条件。油水分配系数测定结果显示水溶性的丹酚酸B酸性条件下的表观油水分配系数会增大,pH为4.0的表观油水分配系数为pH5.3的19.8倍,而pH为2.5的油水分配系数增至pH5.3的583倍。 第二部分以mPEG和DSPE为原料合成了PEG-DSPE,并通红外扫描对其进行鉴定,在此基础上制备长循环脂质体。包封率的测定方法筛选了超速离心法、凝胶柱层析法和超滤法,最后选择可以较快分离脂质体和游离药物的超滤法。建立了脂质体中丹参总酚酸和丹酚酸B的分析方法,选择乙醇溶解脂质体紫外分光光度法测定脂质体中总的丹参总酚酸的含量,TritonX-100溶解脂质体后HPLC测定脂质体中总的丹酚酸B的含量,用超滤法分离脂质体和游离药物后再测定游离药物的含量,计算包封率。 筛选了薄膜法、逆相蒸发法、复乳法和注入法,选用逆相蒸发法作为长循环脂质体的制备方法。单因素考察确定以氯仿为有机溶剂,生理盐水溶解丹参总酚酸,另外确定成乳用超声时间。考察水合介质时发现酸性缓冲液水合包封率会提高,在此基础上筛选了水合介质,甘氨酸-盐酸缓冲液效果最好,考察了水合介质的pH、甘氨酸的浓度对包封率的影响。在单因素考察的基础上选取对脂质体包封率影响较为显著的3个因素:胆固醇-磷脂摩尔比,丹参总酚酸-大豆卵磷脂质量比和外水相pH为考察对象,运用星点设计—效应面优化法优化长循环脂质体处方,优化得到了高包封率、高载药量、粒径小的处方,并推广到普通脂质体。 考察了脂质体和长循环脂质体室温放置的稳定性,脂质体和长循环脂质体室温放置10天后包封率略有降低,故有必要制备其冻干制剂,考察了不同冻干保护剂不同浓度对长循环脂质体的保护作用,最后选择以10%蔗糖为冻干保护剂。将脂质体和长循环脂质体采用冷冻干燥法制备成冻干品后考察其稳定性,于4℃放置3个月包封率、含量和粒径无明显变化。另外测定了脂质体的粒径,透射电镜观察了脂质体的形态,冻干前后无变化。运用巨噬细胞吞噬实验考察PEG-DSPE占磷脂2%,5%和10%摩尔比例的长循环脂质体减少巨噬细胞吞噬的效果,结果显示占磷脂5%摩尔比例的长循环脂质体减少巨噬细胞吞噬的效果最好。透析法考察了脂质体及长循环脂质体的体外释放情况,脂质体和长循环脂质体有延缓药物释放的作用,加入血浆后脂质体释放加快,而长循环脂质体释放受血浆影响较小。 通过对丹参总酚酸脂质体、长循环脂质体和溶液静脉注射后大鼠体内药动学和小鼠体内组织分布的研究,以考察丹参总酚酸长循环脂质体的体内药动学特性。建立了大鼠血浆中丹酚酸B的含量测定方法,方法学考察结果满足测定要求。3p87软件拟合结果表明溶液组、脂质体组和长循环脂质体组均符合二室模型,脂质体的t_(1/2β)为溶液组的5.7倍,长循环脂质体的t_(1/2β)为溶液组的17.5倍,脂质体的AUC(0~T)和AUC(0~∞)分别为溶液组的6.7,6.8倍,长循环脂质体的AUC(0~T)和AUC(0~∞)分别为溶液组的13,14.5倍,脂质体和长循环的优势也体现在MRT参数上,脂质体的MRT(0~∞)为溶液的8.2倍,长循环的MRT(0~∞)为溶液的35.6倍。药动学实验结果充分表明脂质体和长循环脂质体可以显著延长SalB的体内循环时间,提高丹参酚酸的生物利用度,长循环脂质体的效果优于脂质体。小鼠体内组织分布的研究结果显示脂质体和长循环脂质体均可以增强丹参总酚酸在各个脏器中的分布,注射短期内脂质体在各个脏器中分布较长循环脂质体多,随着时间延长,长循环脂质体的分布开始高于脂质体。 进一步考察了脂质体和长循环脂质体在大动物体内的代谢消除情况,选用Beagle犬为受试对象,进行药动学的研究,同时进行全血粘度的测量,初步考察将丹参总酚酸载入脂质体和长循环脂质体后药效学的改善。首先建立并评价了测定丹参酚酸B在Beagle犬血浆中的高效液相色谱方法,方法学考察结果满足测定要求。3p87软件拟合结果表明脂质体和长循环脂质体也可以显著延长丹参酚酸B的在Beagle犬体内的半衰期,提高血浆中药物浓度,长循环脂质体效果优于脂质体。以全血粘度作为药效学指标,结果表明丹参总酚酸降低血液粘度的效果较明显。三种剂型注射后Beagle犬血液粘度降低趋势不同,溶液组的血液粘度降低较迅速,降低幅度较大,但2小时后粘度又有升高,之后又再次降低。脂质体组和长循环脂质体组降低血液粘度的时间较长,给药后10小时脂质体组和长循环脂质体组的血液粘度仍处于降低状态。2—6小时内脂质体组的粘度降低幅度比长循环更大,但长循环的优势在8小时后显示出来。 本文研究结果充分表明,将丹参总酚酸制备成长循环脂质体,其在血液循环中滞留时间变长、生物利用度提高、体内药效作用时间延长。本文研究结果为开发疗效更好、生物利用度更高、服用更方便的丹参新制剂奠定了基础,也为中药新型给药系统的开发提供了研究依据。
【学位授予单位】:四川大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:R283

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【参考文献】
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