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《四川大学》 2007年
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BED-CEIA方法用于四川省2006年吸毒哨点HIV新近感染率的研究

梁姝  
【摘要】: 本文使用的“针对HIV病毒BED三个亚群的酶免疫捕获方法(BED-CEIA)”是一种定量酶联免疫法。该实验固相载体包被羊抗人Ig-G,捕获血浆或血清中的抗HIV-1抗体和非抗HIV-1抗体。通过捕获的抗HIV-1抗体和非抗HIV-1抗体的相对数量可间接检测样品中抗HIV-1特异性Ig-G抗体占总Ig-G抗体的比例。在HIV感染者体内,根据HIV特异性lgG占总IgG抗体的比例随着感染时间的延长而增高,可计算感染者大致的感染时间,从而确定是否新近感染。 主要检测步骤: 1、按1:100稀释样本和对照,对照包括高滴度HIV-1抗体人血清的强阳性对照、低滴度HIV-1抗体人血清的弱阳性对照、不含HIV-1抗体人血清的阴性对照和低滴度HIV-1抗体人血清的校准品对照。 2、稀释样本加入包被羊抗人Ig-G的微孔板中,37℃孵育1h,洗板。 3、将包含gp41的B,E和D表位的合成HIV生物素-抗原肽加入微孔板,37℃孵育1h,洗板。 4、将稀释好的链亲和素—过氧化物酶结合物(为磷酸盐缓冲液与丙三醇的混合液内含酶结合物)加入微孔板,37℃孵育90min,洗板。 5、加入TMB底物,37℃,严格孵育15min进行显色。 6、加入1mol/L H_2SO_4中止反应,酶标仪450nm(参考波长630nm)测定OD值。 HIV-1 BED发病率检测的酶联免疫实验(ELISA),通过试剂盒自带的标准品OD值来标化样本OD值以及阴性对照、弱阳性对照和强阳性对照OD值,以达到标化定量的目的。另外,初检的对照和复核检测的样本及对照均设置3个平行孔,并在计算结果时取中位数值,可有效控制操作误差。BED检测分两个步骤,原理完全相同,重复检测的目的是为了提高试验的准确性,避免操作误差和偶然误差。该试验具有以下特征: 1、血清稀释100倍来检测早期或既往感染。只要抗HIV-1抗体和非抗HIV-1抗体的比例保持稳定,则该实验受稀释变化的影响小。 2、实验程序简单,易于稀释,精确性较高。 3、应用多种亚型的gp41抗原可等效的检测到HIV-1多种亚型的抗体,有相似的血清阳转持续期。 4、HIV-1 BED发病率检测的EIA实验应用统一的标准,如阳性判断值cutoff,血清阳转持续时间或窗口期等,可应用于HIV-1多种亚型的人群。 由于该方法在个体水平上可能产生相当数量的假阳性和假阴性,而在人群水平上假阳性和假阴性数量接近,几乎可以相互抵消,所以只能用于人群流行病学研究调查,不能用于个体诊断。 本文通过收集四川省2006年吸毒哨点人群初筛阳性样本,进行蛋白印迹法(WB)检测,并对WB检测确认阳性样本进行新近感染检测,对我省2006年吸毒哨点人群进行了新近感染率的初步调查。检测结果显示HIV-1抗体确认阳性率为12.04%,新近感染率(发病率)为1.36%,年新近感染率(年发病率)为3.19%,其95%可信区间(CI)为(4.12%~2.26%)。结合流行病学资料,结果显示我省吸毒人群新近感染率尚处于一个较高水平,该人群的干预、宣传措施仍需加强。本文率先在我省使用了用BED-CEIA方法测定HIV感染人群中的新近感染率,弥补四川省在HIV发病率研究方面的空白。
【学位授予单位】:四川大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:R749.64;R512.91

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