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《重庆大学》 2004年
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声波刺激对拟南芥生长影响的分子生物学初步研究

张进  
【摘要】:环境应力与植物生长发育的关系已成为许多科学家关注的重要课题之一。研究表明,环境应力对植物能够起到促进和抑制的双向作用[79]。相对于在个体、组织、细胞层次的研究,有关声波刺激对植物生长发育在分子生物学层次的影响上还很少有报道。本文运用银染mRNA逆转录差异显示(DDRT-PCR)技术,初步研究了声波刺激对拟南芥基因表达差异的影响。 本文以模式植物拟南芥组培幼苗为实验材料,对其进行声波加载。加载实验完毕后,提取材料总RNA。然后以总RNA为模板,通过mRNA逆转录差异显示技术筛选出受声波诱导的差异片段,并用Northern点杂交验证真假阳性,得到以下主要结果: 1.本文参照文献[28]的研究,对模式植物拟南芥刺激组以1000Hz、100dB的声波作用9天,每天刺激60分钟。使用试剂盒提取到刺激组和对照组的总RNA,其质量能够满足后续实验的需要(见表3.2,图3.2),并且发现刺激组总RNA得率比对照组有较大提高(见表3.1)。 2.经凝胶电泳分离,得到6个差异cDNA 片段,SA3、CA2、SG2-1、SG2-2、SG7-1、SG7-2,片段分子量大小在200-600bp左右(见图4.1)。对以上的差异片段进行二次扩增后在琼脂糖凝胶上显示的结果表明,SG2-2片段在重扩增后没有出现条带,表明SG2-2片段为假阳性。其他片段均为单一扩增带,分子量和在变性聚丙烯酰胺凝胶上显示的分子量基本一致(见图5.1),是需要进一步分析的差异片段。 3.为了识别差异片段的真假阳性,采用Northern点杂交检测鉴定,发现片段SG2-1和片段SG7-2属于假阳性。获得3个声波刺激相关的基因差异阳性片段,SA3、CA2和SG7-1,分子量为270bp、580bp和370bp。SA3是声波刺激特异表达基因片段, SG7-1是声波刺激增强表达基因片段,CA2属于声波刺激抑制表达基因片段(见图5.2),可在后续研究中对其克隆,分析序列和进行功能描述。特异表达基因和优势表达基因与抑制表达基因同时存在的情况,表明模式植物拟南芥在本文采用的声波刺激方式下,一些响应应力的基因的表达被开启的同时应力也抑制了某些基因的表达。 4.SA3和文献[65]获得的特异表达条带SA5-2,分子量相近,分别为270bp和290 bp,并且扩增引物组合相似。故推测这两条带可能具有相同的碱基序列,在后续研究中将作深入分析。
【学位授予单位】:重庆大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:Q947.8

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【参考文献】
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