收藏本站
《重庆大学》 2004年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

紫花苜蓿液泡膜Na~+/H~+逆向转运蛋白基因的克隆、表达分析及转化

吴明生  
【摘要】:通过液泡膜上的Na~+/H~+逆向转运蛋白将Na~+区隔到液泡中是植物抵御盐分胁迫、提高耐盐性的一种重要机制。Na~+在液泡中累积一方面可以使过多的Na~+离开代谢位点,减轻Na~+对酶类和膜系统的伤害;另一方面,植物可以利用累积在液泡内的Na~+作为渗透调节剂,降低细胞水势,抵抗盐分造成的渗透胁迫,变害为利。同时盐分在液泡中累积还是维持细胞质中较高的K~+/Na~+比的最有效的机制之一。 本文比较了GenBank中已登录的多种植物液泡膜Na~+/H~+逆向转运蛋白的氨基酸序列和核甘酸序列,根据保守序列设计一对简并引物,通过RT-PCR从紫花苜蓿(Medicago sativa L.)中扩增出一288bp cDNA片段,根据此片段序列设计3′端特异引物,利用3′RACE得到1536bp的3′端cDNA片段。根据3′端片段序列设计5′端特异引物,利用5′RACE得到1082bp的5′端cDNA片段。通过序列拼接获得该基因的全长cDNA,序列分析其含有一个完整的开放阅读框,编码的蛋白质含有541个氨基酸。将该氨基酸序列进行Blast比较,结果显示其与已知植物液泡膜Na~+/H~+逆转蛋白具有高度的同源性,其中与InNHX1同源性高达78%。说明克隆的基因为紫花苜蓿液泡膜Na~+/H~+逆向转运蛋白基因,命名为MsNHX1,并在Genbank中登陆(AY456096)。 通过半定量RT-PCR方法分析了MsNHX1基因在转录水平上的表达情况。结果显示,MsNHX1基因在叶中表达量最高,而在根中表达最弱;在高盐胁迫下(200mM NaCl),MsNHX1基因表达明显上调,在胁迫6个小时后达到最大值,但低温和干旱胁迫没有这种作用。 利用PBI121载体,将MsNHX1基因构建植物表达载体PBINHX,转入到农杆菌LBA4404中,通过叶片共培养法转化紫花苜蓿,期望得到MsNHX1基因超量表达的转基因植物。经抗生素筛选,得到转化的再生苗。提取再生植株的叶中DNA,进行PCR检测,结果均呈阳性,初步证实所得再生植株是转基因植株。
【学位授予单位】:重庆大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:Q785

【引证文献】
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 胡晓艳;野牛草的有性繁殖特性研究及其抗旱转录因子DREB的克隆[D];西北农林科技大学;2007年
中国硕士学位论文全文数据库 前6条
1 王宝枝;花生耐盐基因的克隆与表达谱分析[D];山东师范大学;2010年
2 王帅;高粱中一个DREB类转录因子基因的克隆[D];河北农业大学;2011年
3 韩明鹏;高温胁迫条件下紫花苜蓿抑制消减cDNA文库的构建与初步分析[D];河南农业大学;2011年
4 许仕珍;紫花苜蓿不同再生体系的比较及农杆菌介导的AtNHX1基因转化研究[D];甘肃农业大学;2006年
5 刘小琳;农杆菌介导的MsNHX1基因转化中苜1号的初步研究[D];中国农业科学院;2007年
6 王翠霞;野生西瓜PI296341 cDNA文库的构建及ClWRKY1转录因子的克隆[D];河北农业大学;2010年
【参考文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 韩利芳;烟草MnSOD基因在保定苜蓿中的转化[D];中国农业科学院;2003年
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 李妍;;液泡膜Na~+/H~+逆向转运蛋白研究进展[J];安徽农学通报;2007年05期
2 赵祥强;;植物耐盐性分子机理研究进展[J];安徽农业科学;2009年17期
3 赵祥强;;玉米Na~+/H~+逆向转运蛋白基因ZmSOS1的克隆与鉴定[J];安徽农业科学;2009年35期
4 赵祥强;汤薇;张燕;李鑫;;互花米草中NHX基因片段的克隆与序列分析[J];安徽农业科学;2009年36期
5 ;Osmoregulation Mechanism of Drought Stress and Genetic Engineering Strategies for Improving Drought Resistance in Plants[J];Forestry Studies in China;2004年02期
6 杨青川,孙彦,康俊梅;紫花苜蓿耐盐相关基因克隆研究进展[J];草地学报;2005年03期
7 张俊莲,张金文,陈正华,王蒂;植物Na~+/H~+逆向转运蛋白与植物耐盐性的研究进展[J];草原与草坪;2005年04期
8 沈国新;楼程富;裘晓云;潘刚;陆小平;沈飞英;;桑树中拟南芥同源基因mNHX1的克隆及其功能研究[J];蚕业科学;2005年04期
9 赵瑞雪;朱慧森;程钰宏;董宽虎;;植物脯氨酸及其合成酶系研究进展[J];草业科学;2008年02期
10 张俊莲;张金文;陈正华;王蒂;;NaCl胁迫下拟南芥Na~+/H~+逆向转运蛋白基因(AtNHX1)的克隆及序列分析[J];草业学报;2005年06期
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 田娜;农杆菌介导的猕猴桃遗传转化及AtNHX1转化植株抗盐性分析;拟南芥At4G12490基因对逆境的抗性功能研究[D];西北大学;2010年
2 李望丰;SsNHX1基因在紫花苜蓿中的表达及其耐盐性研究[D];东北师范大学;2010年
3 张桦;新牧1号杂花苜蓿抗逆相关基因的克隆和功能分析[D];新疆农业大学;2011年
4 程彦伟;盐胁迫诱导水稻根尖细胞质膜蛋白差异表达及LRR型受体蛋白激酶的功能研究[D];南京农业大学;2008年
5 贾庚祥;BADH基因转化番茄提高耐盐性的研究[D];中国科学院研究生院(植物研究所);2002年
6 吕慧颖;盐生植物盐角草、番杏Na~+/H~+逆向转运蛋白基因克隆及特性研究[D];东北农业大学;2003年
7 俞嘉宁;小麦耐旱、耐盐相关基因的克隆、分析与功能研究[D];西北农林科技大学;2003年
8 马秀灵;盐地碱蓬SsNHX1基因的克隆及转基因拟南芥的培育[D];山东师范大学;2003年
9 余舜武;荧光原位杂交和分子标记在水稻和小麦种质资源研究中的应用[D];华中农业大学;2002年
10 杜金友;胡枝子干旱胁迫下渗透物质变化以及外源基因Sac B对美丽胡枝子的遗传转化研究[D];北京林业大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 彭英;水稻脯氨酸累积相关基因多样性及与苗期耐盐性关系[D];华中农业大学;2010年
2 朱莹;分析耐盐基因与启动子功能的CRE/loxP重组激活系统的构建与检验[D];哈尔滨师范大学;2010年
3 王华;外源精胺对海滨锦葵耐盐性及其脯氨酸合成途径基因表达影响[D];郑州大学;2010年
4 王宝枝;花生耐盐基因的克隆与表达谱分析[D];山东师范大学;2010年
5 曾光;苜蓿抗逆基因的cDNA克隆和转基因烟草功能的初步验证[D];新疆农业大学;2010年
6 杨洋;毛竹Na~+转运功能相关基因克隆与表达分析及BIBAC基因组文库的构建[D];新疆农业大学;2010年
7 罗园园;农杆菌介导无标记耐盐基因水稻高效转化系统的建立[D];浙江工商大学;2011年
8 孙永媛;小麦耐盐生理及耐盐相关基因TaNHX3功能的初步研究[D];河北农业大学;2011年
9 黑倩;过量表达改组后AtNHX1基因显著提高了水稻、烟草的耐盐性[D];华东师范大学;2011年
10 王燕雯;共表达霸王ZxNHX及ZxVP1-1基因提高百脉根的耐盐性和抗旱性研究[D];兰州大学;2011年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 王艳青,陈雪梅,李悦,蒋湘宁,刘群录,李素艳;植物抗逆中的渗透调节物质及其转基因工程进展[J];北京林业大学学报;2001年04期
2 杨起简,周禾,孙彦,路苹;紫花苜蓿的愈伤组织诱导及组织培养[J];北京农学院学报;2004年02期
3 肖尊安,武菊英,孙振元;低能碳离子注入野牛草种子的变异分析[J];北京师范大学学报(自然科学版);2004年04期
4 李青丰,房丽宁,李阿迪亚,蔺福生,耿志君,张恩厚;麻黄繁殖生物学及种子生产特性研究[J];草地学报;2000年01期
5 贺俊英,王六英,易津,阿拉塔,于冰;驼绒藜属3种植物开花习性及雌花柱头微形态研究[J];草地学报;2003年02期
6 刘艳芝,王玉民,刘莉,隋松兵,李望丰,董英山*;Bar基因转化草原1号苜蓿的研究[J];草地学报;2004年04期
7 莫亿伟;郭振飞;;温度胁迫对苜蓿和柱花草光合作用及N还原的影响[J];草地学报;2008年01期
8 杨茁萌,李林,陈颖,何光明,王东江,木合塔尔,梁永亮;农杆菌介导的苜蓿细胞基因转化[J];草食家畜;1996年S1期
9 游明鸿,毛凯,刘金平,干友民;草坪植物与温度[J];草原与草坪;2003年01期
10 李会彬,边秀举,赵炳祥;坪用野牛草研究进展[J];草原与草坪;2005年03期
中国博士学位论文全文数据库 前3条
1 李雪平;大豆DREB类转录因子基因的克隆及功能研究[D];中国农业大学;2004年
2 田秀红;水稻DREB转录因子基因的克隆及相关研究[D];中国农业大学;2004年
3 胡晓艳;野牛草的有性繁殖特性研究及其抗旱转录因子DREB的克隆[D];西北农林科技大学;2007年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 卢德赵;水稻BADH和SAMDC基因的遗传转化及其耐盐性研究[D];浙江大学;2002年
2 黄剑;紫花苜蓿高频再生体系的建立及农杆菌介导的甜菜碱醛脱氢酶基因转化的研究[D];甘肃农业大学;2002年
3 曹丽霞;调控小麦抗逆相关基因的转录因子的克隆[D];内蒙古农业大学;2003年
4 齐小强;野大麦盐胁迫诱导基因的克隆及功能分析[D];中国农业科学院;2003年
5 杨梅周;农杆菌介导酿酒酵母3-磷酸甘油脱氢酶基因转化紫花苜蓿的研究[D];甘肃农业大学;2003年
6 卢广;农杆菌浸泡种苗获得转gna基因苜蓿的研究[D];中国农业大学;2004年
7 葛军;紫花苜蓿组织培养再生体系的研究[D];北京林业大学;2004年
8 高世庆;抗逆相关DREB基因转化小麦及功能鉴定[D];新疆农业大学;2004年
9 张静妮;苜蓿植株再生体系的建立及sacB基因转化的影响因素研究[D];甘肃农业大学;2005年
10 王艳;根癌农杆菌介导NHX基因转化新疆甘蓝型油菜的研究[D];新疆大学;2005年
【二级引证文献】
中国期刊全文数据库 前2条
1 王舟;刘建秀;;DREB/CBF类转录因子研究进展及其在草坪草和牧草抗逆基因工程中的应用[J];草业学报;2011年01期
2 李会文;麻冬梅;许兴;;苜蓿耐盐碱转基因研究进展与展望[J];北方园艺;2012年19期
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 王舟;结缕草(Zoysia japonica)抗寒相关转录因子ZjDREB1基因的克隆、表达模式及功能分析[D];南京农业大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前6条
1 王帅;高粱中一个DREB类转录因子基因的克隆[D];河北农业大学;2011年
2 周莹洁;野牛草性别差异相关分子标记的研究[D];四川农业大学;2011年
3 施莉娟;紫花苜蓿再生体系的建立及根癌农杆菌介导聚磷基因ppk的遗传转化[D];甘肃农业大学;2010年
4 王珺;紫花苜蓿BADH基因导入与耐盐变异系的生理鉴定[D];甘肃农业大学;2010年
5 罗娟;CpTI和ChiA基因的克隆,双价表达载体构建及其农杆菌介导的紫花苜蓿遗传转化的研究[D];西北农林科技大学;2008年
6 马伶俐;紫花苜蓿再生体系的建立及农杆菌介导的BADH基因转化研究[D];甘肃农业大学;2008年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前5条
1 陆晓春,薛庆中;转基因植物中标记基因的消除[J];生命科学;2001年02期
2 卜友泉,罗绪刚,李素芬,鲁成,李英文,邝霞,刘彬,李建凡,余顺祥;鸡含锰超氧化物歧化酶cDNA克隆及序列分析[J];中国生物化学与分子生物学报;2001年04期
3 吕德扬,范云六,俞梅敏,唐顺学,侯宁,汪清;苜蓿高含硫氨基酸蛋白转基因植株再生[J];遗传学报;2000年04期
4 柯玉琴,潘廷国;NaCl 胁迫对甘薯叶片叶绿体超微结构及一些酶活性的影响[J];植物生理学报;1999年03期
5 郭泽建,李德葆;活性氧与植物抗病性[J];植物学报;2000年09期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 王欢,祝雄伟,王延枝;液泡膜H~+-ATPase质子泵活性的荧光测定[J];生物化学与生物物理进展;1999年02期
2 余和芬,陈珈,王学臣;盐胁迫对豌豆根液泡膜H~+-ATPase活性及含量的影响(英文)[J];植物学报;2001年06期
3 李妍;;液泡膜Na~+/H~+逆向转运蛋白研究进展[J];安徽农学通报;2007年05期
4 胡军瑜;王俊刚;吴转娣;张树珍;唐建平;;液泡膜苹果酸转运蛋白研究进展[J];基因组学与应用生物学;2009年02期
5 高新起;任秋萍;王转斌;;保卫细胞液泡活体标记方法的比较[J];细胞生物学杂志;2008年03期
6 邹宁;赵可夫;;液泡分离技术及液泡在植物抗盐中的作用[J];山东师范大学学报(自然科学版);1989年04期
7 章文华,刘友良,於丙军,贺平清;大麦根液泡膜微囊依赖ATP质子泵测定技术的改进[J];植物生理学通讯;1997年04期
8 陈晨,乔代蓉,白林含,马梵辛,贺顺姬,曹毅;农杆菌介导的杜氏盐藻Dscbr基因转化紫花苜蓿的初步研究[J];四川大学学报(自然科学版);2005年03期
9 庞晓斌;李彦舫;;紫花苜蓿胚状体形成中的二次诱导[J];植物生理学通讯;2006年01期
10 黄彩变;王朝辉;李生秀;;植物液泡硝态氮累积的营养和生理学意义[J];土壤;2006年06期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 刘瑞峰;张新全;严欢;张斌;王利宝;刘卫东;;12个紫花苜蓿引进品种产量及持久性评价[A];第三届中国苜蓿发展大会论文集[C];2010年
2 赵金梅;周禾;王育青;孙启忠;;灌溉对北京地区紫花苜蓿生产性能的影响[A];第三届中国苜蓿发展大会论文集[C];2010年
3 杨茁萌;;紫花苜蓿营养与质量评价[A];第四届(2011)中国苜蓿发展大会论文集[C];2011年
4 荆刚;朱玉春;刘伯方;宁志霞;;紫花苜蓿在城市绿化中的作用[A];辽宁省昆虫学会2006年年会论文集[C];2006年
5 高婷;张晓刚;纪立东;Orson Boyce;Stanford A.Young;朱建宁;彭文栋;;美国优质紫花苜蓿在宁夏中部干旱区适应性研究[A];第三届中国苜蓿发展大会论文集[C];2010年
6 戚志强;玉永雄;;重庆地区紫花苜蓿生产性状间相关性研究[A];第三届中国苜蓿发展大会论文集[C];2010年
7 王晓娜;卢欣石;;紫花苜蓿抗寒高产性能比较研究[A];第三届中国苜蓿发展大会论文集[C];2010年
8 郭正刚;包爱科;刘慧霞;;紫花苜蓿人工草地水肥管理研究进展[A];第三届中国苜蓿发展大会论文集[C];2010年
9 陈艳;乔璟;沈益新;;紫花苜蓿根系性状与春季地上部生长的相关性分析[A];第四届(2011)中国苜蓿发展大会论文集[C];2011年
10 李扬;孙洪仁;丁宁;刘治波;邵光武;沈月;;紫花苜蓿根系生物量[A];第四届(2011)中国苜蓿发展大会论文集[C];2011年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 和静县农业技术推广站 屈涛 顾健 楼爱玲;紫花苜蓿夏季主要管理技术措施[N];新疆科技报(汉);2006年
2 杨莉 韩万勇;紫花苜蓿高产栽培技术[N];新疆科技报(汉);2005年
3 ;金皇后[N];中国畜牧报;2004年
4 曹闻;紫花苜蓿播种前种子如何处理[N];中国畜牧报;2004年
5 张郎;紫花苜蓿的收获制度[N];中国畜牧报;2004年
6 吕海英;林西绿色产业撑起农区“畜牧天”[N];中国畜牧兽医报;2005年
7 李纲陵 郝丽娟;宁县1.5万亩紫花苜蓿引领农民增收[N];陇东报;2008年
8 本报记者 霍雪梅通讯员 戴燕山 旋若飞;山里人的“幸运草”[N];河北经济日报;2008年
9 文/李文选;进口紫花苜蓿[N];山西科技报;2001年
10 ;紫花苜蓿栽培中氮肥的使用[N];中国畜牧兽医报;2007年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 李望丰;SsNHX1基因在紫花苜蓿中的表达及其耐盐性研究[D];东北师范大学;2010年
2 胡华锋;硒在土壤—苜蓿—饲料—蛋鸡系统中的迁移效应及其机理研究[D];华中农业大学;2011年
3 何树斌;不同氮素和水分供应下紫花苜蓿碳同化和C/N响应机制研究[D];兰州大学;2012年
4 徐博;朝鲜碱茅P5CS基因的克隆及其转化紫花苜蓿的研究[D];中国农业科学院;2012年
5 魏国强;硅提高黄瓜白粉病抗性和耐盐性的生理机制研究[D];浙江大学;2004年
6 曾昭海;紫花苜蓿高效根瘤菌筛选及田间鉴定方法研究[D];中国农业大学;2003年
7 金太成;大豆DREB基因GmDREB1改良紫花苜蓿耐盐性的研究[D];东北师范大学;2010年
8 刘慧英;嫁接影响西瓜果实品质和幼苗耐冷性的生理机制研究[D];浙江大学;2003年
9 李平华;盐胁迫下盐地碱蓬液泡膜质子泵表达分析及过量表达SsNHX1-AVP1对拟南芥耐盐性的影响[D];山东师范大学;2003年
10 许海霞;小麦Na~+/H~+逆转运蛋白的功能分析[D];河南农业大学;2009年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 吴明生;紫花苜蓿液泡膜Na~+/H~+逆向转运蛋白基因的克隆、表达分析及转化[D];重庆大学;2004年
2 谢勇;坝上地区紫花苜蓿施肥研究及其土壤养分丰缺指标体系的初步建立[D];四川农业大学;2010年
3 张彩峡;低温弱光对紫花苜蓿根颈生理生化指标影响研究[D];西北农林科技大学;2010年
4 丁旺;紫花苜蓿3个开花相关基因的克隆与初步鉴定[D];中国农业科学院;2011年
5 姜义宝;钙对紫花苜蓿抗旱性影响的研究[D];东北农业大学;2003年
6 邱勤;根际微生态水平上酸铝胁迫对紫花苜蓿-根瘤菌体系的影响[D];西南大学;2011年
7 刘志鹏;不同耐盐性状紫花苜蓿的SSR分子标记研究[D];西北农林科技大学;2004年
8 陈丽;紫花苜蓿雄性不育突变体的筛选及其细胞学观察[D];兰州大学;2010年
9 王楠;盐碱胁迫对紫花苜蓿生长及磷素吸收的影响[D];兰州大学;2011年
10 纳钦;紫花苜蓿和缘毛雀麦高光谱与营养成分的相关性研究[D];内蒙古农业大学;2010年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026