收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

昆虫病原真菌金龟子绿僵菌中性海藻糖酶在孢子储藏稳定性中的作用

胡宗利  
【摘要】:蝗虫是世界性的害虫,给农业生产带来了严重的经济损失。金龟子绿僵菌是一种蝗虫病原真菌,在蝗虫生物防治中起着重要作用。目前,世界上已经有十多个金龟子绿僵菌菌株登记注册,并实现了商品化,但这些产品常常不稳定。阻碍绿僵菌杀虫剂大规模应用的主要原因之一是孢子的储藏和环境稳定性问题。本实验室从我国蝗虫病原菌中分离、选育出一株高毒力、高产孢、强专化性的杀蝗新菌株金龟子绿僵菌CQMa102,用该绿僵菌生产的孢子粉及其油悬浮剂已在国内登记注册,正逐步实现商品化,却也同样存在进一步延长储藏期,增强环境稳定性的问题。 大量研究报道,海藻糖是广泛存在于各种生物体内的抗逆境剂,具有增强生物体对高温、脱水、干旱、冷冻、高渗透性、重金属及有毒试剂等逆境的抵抗能力。胞内海藻糖积累与丝状真菌孢子的储藏期延长密切相关。将酿酒酵母细胞内中性海藻糖酶基因敲除后,中性海藻糖酶活性丧失,海藻糖含量提高3 倍。由此我们可以推测,通过基因工程技术改变绿僵菌体内海藻糖代谢途径,可以提高孢子内海藻糖含量,延长绿僵菌孢子的储藏期,增强其环境稳定性,促进其商品化生产和应用。 要通过改变海藻糖代谢途径来改良绿僵菌菌种,就必须了解绿僵菌体内海藻糖的代谢和调控,但是人们对绿僵菌体内海藻糖的代谢研究得较少,夏玉先等首先克隆了金龟子绿僵菌中性海藻糖酶基因,但其生物学功能还未见报道。本研究拟通过增加金龟子绿僵菌中性海藻糖酶基因的拷贝数以减少孢子形成过程中海藻糖的合成,采用基因破坏技术去除或降低金龟子绿僵菌中性海藻糖酶活性以增加孢子中海藻糖含量,并进一步分析孢子中海藻糖的含量及其与孢子抗逆能力和耐储藏能力的关系,从而阐明中性海藻糖酶在孢子耐热力和储藏稳定性中的作用。 本研究利用PCR、RT-PCR、RACE、panhandle PCR 等方法成功地克隆了金龟子绿僵菌CQMa102 中性海藻糖酶基因,并登录NCBI 的GenBank, 登录号为:AY557613(基因组序列), AY557612(cDNA 序列)。根据该基因序列构建了金龟子绿僵菌中性海藻糖酶超表达载体、同源置换载体和RNA 干扰载体,分别利用PEG-CaCl_2 介导法、电转化法和基因枪法,转化金龟子绿僵菌CQMa102,经过PCR 筛选和Southern blot 验证,获得3 个中性海藻糖酶超表达转化菌和3 个RNAi 转化菌。利用Northern blot 分析这几个突变菌株中性海藻糖酶基因mRNA 的含量,选择中性海藻糖酶基因超表达2 倍和中性海藻糖酶基因被抑制到42%的两个转化菌:Ma113 和Ma688,将其与出发菌株进行分生孢子内海藻糖含量的测定,孢子储藏


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 宋漳,黄钦周;2种杀菌剂对金龟子绿僵菌产孢的影响[J];福建林学院学报;2002年01期
2 叶斌,江英成,林文清,宋漳;金龟子绿僵菌对马尾松林节肢动物群落多样性的影响[J];福建农林大学学报(自然科学版);2005年02期
3 ;以毒助毒:生物农药开发新思路——科学家发现能够提高金龟子绿僵菌毒性的毒素[J];山东农药信息;2007年12期
4 刘刚;;中科院完成杀虫绿僵菌比较基因组研究[J];农药市场信息;2011年03期
5 吴振强;金龟子绿僵菌固态培养生物变量优化研究[J];中国植保导刊;2004年08期
6 宋 漳;金龟子绿僵菌液体深层培养研究[J];热带作物学报;2002年02期
7 李有志;;绿僵菌与化学农药对草坪地下害虫控制效果的比较[J];农化新世纪;2005年10期
8 宋漳,卢凤美,陈辉;金龟子绿僵菌室内侵染刚竹毒蛾试验[J];福建林学院学报;2002年02期
9 宋漳;化学杀虫剂对绿僵菌的影响及菌药混用研究[J];福建林学院学报;2001年04期
10 ;新农药介绍[J];农药科学与管理;2005年09期
11 杜开书;柴立英;徐艳聆;郎剑锋;;一株绿僵菌的分离研究[J];微生物学杂志;2008年06期
12 顾丽嫱;李春香;刘凤娇;;金龟子绿僵菌对小菜蛾的室内毒力测定[J];安徽农业科学;2009年26期
13 贾春生;绿僵菌对东北大黑鳃金龟的时间—剂量—死亡率模型分析[J];中国植保导刊;2005年10期
14 施宠,付建红,王纯利;绿僵菌高毒力菌株的选育[J];新疆农业科学;2004年05期
15 任文彬;张世清;黄俊生;;金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae HN1)几丁质酶基因的克隆及高效表达[J];中国生物工程杂志;2006年07期
16 李锡杰;周灵芝;张伟;郭卫华;杨鸣琦;赵元;;金龟子绿僵菌中苦马豆素的分离与鉴定[J];西北农业学报;2010年02期
17 樊学珍,李增智;绿僵菌在土壤中的延续及控制桃小食心虫的潜力[J];应用生态学报;1996年01期
18 ;江西四大生物农药新品通过鉴定[J];山东农药信息;2009年03期
19 王振宇;;美国重审生物农药[J];农药研究与应用;2010年01期
20 刘爱英,梁宗琦,陈月碧,周健;绿僵菌高致病性菌株的筛选[J];中国生物防治;1987年01期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 高强;商艳芳;黄威;王成树;;金龟子绿僵菌甘油吸收和甘油三酯合成途径对寄主致病能力的影响[A];中国菌物学会第五届会员代表大会暨2011年学术年会论文摘要集[C];2011年
2 李向英;李文华;彭国雄;王中康;夏玉先;;两株侵染东亚飞蝗的金龟子绿僵菌菌株的生物学特性比较[A];《中国虫生真菌研究与应用》(第五卷)[C];2003年
3 李向英;彭国雄;王中康;曾德玉;殷幼平;夏玉先;;金龟子绿僵菌在不同制剂中的耐热性测定[A];《中国虫生真菌研究与应用》(第五卷)[C];2003年
4 蔡守平;何学友;曾丽琼;黄金水;钟景辉;林传凤;;感染星天牛幼虫高毒力金龟子绿僵菌菌株筛选[A];海峡两岸第十届菌物学暨第三届食药用菌学术研讨会论文摘要集[C];2011年
5 方卫国;张永军;肖月华;杨星勇;罗明;范艳华;裴炎;;金龟子绿僵菌羧基转运蛋白基因JEN1的克隆与分析[A];首届中国青年学者微生物遗传学学术研讨会论文摘要集[C];2002年
6 郭素萍;徐一强;祁学忠;赵俊生;;绿僵菌研究的新进展[A];走向21世纪的中国昆虫学——中国昆虫学会2000年学术年会论文集[C];2000年
7 任文彬;张世清;黄俊生;;金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae HN1)几丁质酶基因的克隆及高效表达[A];第十届全国杀虫微生物学术研讨会暨全国生物农药与化学生物学研究与产业化会议论文摘要集[C];2006年
8 谢宁;殷幼平;张建伟;申剑飞;王中康;;金龟子绿僵菌CQMa128的鉴定及其对鳞翅昆虫的毒力测评[A];中国菌物学会2009学术年会论文摘要集[C];2009年
9 李锡杰;杨鸣琦;张伟;郭伟华;戴卉敏;;金龟子绿僵菌菌丝体及发酵液中苦马豆素的提取与分离[A];中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十六次学术研讨会、中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十五次学术研讨会论文集[C];2009年
10 陈斌;李正跃;桂富荣;孙跃先;严乃胜;;金龟子绿僵菌对马铃薯田小云斑鳃金龟子的生物防治潜力评价[A];加速发展云南马铃薯优势产业研讨会论文集[C];2003年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 张蕾;转基因金龟子绿僵菌获得的口服毒力评价与自噬基因ATG5对球孢白僵菌生防潜能的贡献[D];浙江大学;2013年
2 胡宗利;昆虫病原真菌金龟子绿僵菌中性海藻糖酶在孢子储藏稳定性中的作用[D];重庆大学;2005年
3 齐永霞;白僵菌和绿僵菌在植物根际的定殖及对几种土传植物病原真菌的抑制作用研究[D];安徽农业大学;2011年
4 赵华;昆虫病原真菌金龟子绿僵菌酸性海藻糖酶分离纯化、特性及其基因克隆的研究[D];重庆大学;2006年
5 童应华;感染萧氏松茎象绿僵菌菌株筛选及其致病机理研究[D];福建农林大学;2009年
6 金少锋;基于金龟子绿僵菌和低剂量扑虱灵协同作用的稻飞虱防治替代策略研究[D];浙江大学;2010年
7 刘迎春;昆虫病原真菌金龟子绿僵菌酸性海藻糖酶的功能研究[D];重庆大学;2007年
8 刘迎春;金龟子绿僵菌酸性海藻糖酶的功能研究[D];重庆大学;2007年
9 詹儒林;芒果炭疽病菌抗药性基因tub2的克隆及其转化金龟子绿僵菌的初步研究[D];华南热带农业大学;2007年
10 张传博;金龟子绿僵菌侵染东亚飞蝗特异表达基因筛选与体内定殖阶段cDNA文库构建[D];重庆大学;2009年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 叶小真;金龟子绿僵菌与化学农药相容性的初步研究[D];福建农林大学;2009年
2 李兴佳;金龟子绿僵菌在花生根系环境中的种群适应性及防治效果[D];中国农业科学院;2013年
3 臧欢;桃小食心虫优良金龟子绿僵菌菌株的筛选及应用性研究[D];河北农业大学;2013年
4 陈青林;球孢白僵菌和金龟子绿僵菌及其代谢产物的抑菌活性研究[D];安徽农业大学;2013年
5 刘颖;金龟子绿僵菌CQMa102致病相关基因CuAO的功能分析[D];重庆大学;2010年
6 钟伟;美洲大蠊对金龟子绿僵菌CQMa102菌株的免疫反应[D];西南农业大学;2003年
7 应月青;绿僵菌固体培养基的微波灭菌研究[D];中国农业科学院;2006年
8 金玉荣;青海血蜱高致病性绿僵菌菌株的筛选及生物学特性[D];甘肃农业大学;2009年
9 李春梅;从寄主昆虫血淋巴中获取病原真菌菌体的方法研究[D];重庆大学;2005年
10 路宏朝;金龟子绿僵菌代谢产物中有效成分的初步研究[D];西北农林科技大学;2006年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978