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《重庆大学》 2005年
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黄瓜体内酚性抗病物质合成和诱导信号转导相关机制的实验研究

王晶波  
【摘要】:本实验采用两种类型的诱导子外源处理黄瓜幼苗叶片,探讨了诱导子对提高黄瓜对黑星病菌抗病性的作用,并探讨了外源诱导子对植物次生代谢物的诱导生成的效果和机理。结果表明:诱导子外源处理植物生体能够诱导新的活性物质产生或诱导原有活性成分增加。这一研究成果对相关植物次生产物(如农药活性物质和医药活性物质)的代谢机理及其应用研究具有重要的参考价值。 1.诱导子诱导黄瓜幼苗的抗病性:以二真叶龄的黄瓜幼苗为实验材料,首先筛选出最佳诱导作用的力学参数,然后采用水杨酸和压应力外源处理,接种后考查抗性表达,发现水杨酸和压应力都可以诱导提高黄瓜幼苗对黑星病菌的抗性。对黄瓜幼苗的第二片真叶的成份进行分析,并与对照(未经诱导的黄瓜幼苗的第二真叶)相比较发现,经诱导后,黄瓜幼苗的第二真叶中木质素含量增加,且生成多种植保素。因此,用诱导子处理黄瓜幼苗的第一片真叶后,在第二片真叶中可以产生木质素沉积现象,且两种诱导子都可以诱导产生植保素。研究结果可以作为黄瓜黑星病害生物防治的理论依据。压应力的诱导活性也进一步得到验证,为其在生物防治上的应用提供了理论依据。 2. 诱导子在黄瓜幼苗中抗病信号的转导:在诱导之前,处理组植株用一定浓度的RGD(Arg-gly-Asp)序列的多肽和与前者序列相反的DGR 多肽处理,空白对照组用对应量的水处理。再将每处理组分为接受挑战接种和非挑战接种两部分,之后考查处理组的发病情况,并考查各组的木质素沉积和植保素积累和H_2O_2含量情况。发现经RGD 处理再诱导后各指标情况均与空白的非诱导组相似,而经DGR处理再经诱导后所产生的诱导效果与经压应力和水杨酸直接刺激的诱导效果极其相似。因此,压应力和水杨酸两种诱导子对黄瓜抗黑星病的诱导作用依赖于植物细胞膜和细胞壁之间的RGD 特异介导的粘附,信号传导途径推测和哺乳动物中类似,即“ECM-整合素-细胞骨架”的信号传导系统。 3.本实验还分析了诱导子的作用效果及影响因素,并阐述了诱导子作用的机理及应用前景。诱导子的作用效果与诱导子的种类、诱导处理时间长短等多种因素密切相关。诱导子引起植物代谢过程的一系列变化,最终使植物产生防卫反应,是一个连续的、信号逐级传导的过程,其作用机理十分复杂,其理论研究和应用研究均对生物学和医学具有重要意义。
【关键词】:诱导子 植保素 诱导抗病性 木质素 信号转导
【学位授予单位】:重庆大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:S436.421
【目录】:
  • 中文摘要4-5
  • 英文摘要5-10
  • 1 绪论10-19
  • 1.1 植物活性次生代谢物之应用于农业10-12
  • 1.1.1 植物次生代谢物应用于农药的意义10
  • 1.1.2 植物源农药的特点及作用方式10-11
  • 1.1.3 植物提取物抑菌活性的研究11-12
  • 1.2 诱导子对植物体内活性次生代谢产物积累的影响(详见附录B)12
  • 1.2.1 诱导子的分类及研究进展12
  • 1.2.2 诱导子所引发的植物的防卫机制12
  • 1.3 诱导子诱导产生活性次生代谢物积累的机制(详见附录C)12-13
  • 1.3.1 植物类整合素蛋白发现和在力信号传导中的作用12-13
  • 1.3.2 RGD 相关的粘附介导植物细胞防卫反应13
  • 1.3.3 活性氧在植物系统获得抗性建立中的信号转导13
  • 1.4 木质素的研究进展13-15
  • 1.5 黄瓜植保素的研究进展(详见附录D)15
  • 1.5.1 诱导植保素形成的因素及其研究进展15
  • 1.5.2 提取、分离与检测15
  • 1.5.3 植保素的合成与代谢15
  • 1.6 小结15-16
  • 1.7 本课题介绍16-19
  • 1.7.1 存在问题及本研究的目的意义16-17
  • 1.7.2 本课题主要工作17
  • 1.7.3 本课题研究思路与技术路线17-18
  • 1.7.4 本课题创新点18-19
  • 2 材料与方法19-25
  • 2.1 两种诱导子对黄瓜抗病性的影响19-22
  • 2.1.1 寄主选取19
  • 2.1.2 病原菌19
  • 2.1.3 所用试剂19
  • 2.1.4 水杨酸诱导处理19
  • 2.1.5 压应力诱导处理19-20
  • 2.1.6 致病菌处理20
  • 2.1.7 挑战接种20
  • 2.1.8 发病情况调查20-21
  • 2.1.9 压力参数的筛选21-22
  • 2.2 压应力和水杨酸诱导黄瓜幼苗中木质素的积累22-23
  • 2.2.1 致病菌处理22
  • 2.2.2 样品处理22
  • 2.2.3 取样22
  • 2.2.4 样品的固定及透明22-23
  • 2.2.5 木质素染色-间苯三酚-盐酸(Wiesner 反应)23
  • 2.3 压应力和水杨酸诱导黄瓜幼苗中植保素的积累23-24
  • 2.3.1 样品处理23
  • 2.3.2 取样23
  • 2.3.3 植保素的提取23
  • 2.3.4 植保素的性质测定23-24
  • 2.4 RGD 介导的和H_2O_2 相关的诱导信号转导机制24-25
  • 2.4.1 RGD 阻断处理24
  • 2.4.2 诱导抗病性的考察24
  • 2.4.3 水杨酸诱导,压应力诱导24
  • 2.4.4 木质素染色24
  • 2.4.5 植保素的提取及性质鉴定24
  • 2.4.6 H_2O_2 含量测定24-25
  • 3 结果与分析25-43
  • 3.1 两种诱导子对黄瓜抗病性的影响25-27
  • 3.1.1 经黑星病菌侵染的诱导和非诱导植株的症状表现25-26
  • 3.1.2 初筛发病情况的调查26
  • 3.1.3 复筛发病情况的调查26-27
  • 3.2 压应力和水杨酸诱导黄瓜幼苗中木质素的沉积27-31
  • 3.3 压应力和水杨酸诱导黄瓜幼苗中植保素的积累31-35
  • 3.3.1 植保素的提取物抑菌效果31-32
  • 3.3.2 植保素的薄层层析32-34
  • 3.3.3 植保素的液相色谱分析34-35
  • 3.4 RGD 介导的和H_2O_2 相关的诱导信号转导机制35-43
  • 3.4.1 RGD 阻断对植物抗病性的影响35-36
  • 3.4.2 黄瓜幼苗中木质素的积累36-38
  • 3.4.3 植保素的抑菌效果及色谱性质38-41
  • 3.4.4 处理后H_2O_2 含量的变化41-43
  • 4 讨论43-49
  • 4.1 无公害抗病方法将成为发展生态农业的一个重要趋势43
  • 4.2 诱导子诱导黄瓜幼苗产生抗病性的效果43-44
  • 4.3 压应力和水杨酸诱导黄瓜幼苗中木质素的沉积44
  • 4.4 压应力和水杨酸诱导黄瓜幼苗中植保素的积累44-45
  • 4.5 细胞质和细胞壁间的粘附在诱导植物抗性中的作用45-46
  • 4.6 RGD 介导的粘附在植物抗病信号的转导中的作用46-47
  • 4.7 诱导子的应用前景47-49
  • 4.7.1 理论研究47
  • 4.7.2 农药研究与生产47
  • 4.7.3 医药研究与生产47-49
  • 5 结论及后续工作建议49-51
  • 5.1 本课题结论49
  • 5.2 后续工作建议49-51
  • 致谢51-52
  • 参考文献52-56
  • 附录 A 作者在攻读硕士学位期间参与的研究项目56-57
  • 附录 B 诱导子对植物体内活性次生代谢产物积累的影响57-65
  • 附录 C 诱导子诱导产生活性次生代谢物积累的机制65-72
  • 附录 D 黄瓜植保素的研究进展72-80
  • 独创性声明80
  • 学位论文版权使用授权书80

【参考文献】
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