收藏本站
《重庆大学》 2006年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

昆虫病原真菌金龟子绿僵菌酸性海藻糖酶分离纯化、特性及其基因克隆的研究

赵华  
【摘要】: 金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae)是一类应用广泛的昆虫病原真菌,在昆虫防治中起着重要作用。与化学农药相比,真菌杀虫剂尽管安全,无环境污染,但存在着杀虫速率缓慢的弱点,这在很大程度上阻碍了真菌杀虫剂的应用。对昆虫病原真菌致病机制进行研究可为发展新型高效真菌杀虫剂提供依据。海藻糖是一种非还原性二糖,存在于所有已知种类的昆虫中,是昆虫血淋巴中主要的糖类(大约占80-90%);海藻糖在昆虫血液生理中起着重要的作用,其耗竭可能对昆虫起着致命性的作用。虫生真菌侵染进入昆虫血腔后,昆虫血淋巴中的海藻糖成为真菌生长潜在和必需的营养物质。但海藻糖对许多真菌来说是非渗透性二糖,必须在相应的二糖水解酶作用下分解为葡萄糖才能被真菌利用。金龟子绿僵菌侵染进入昆虫血淋巴后,能分泌酸性海藻糖酶,有效地降解昆虫血淋巴中的海藻糖。酸性海藻糖酶在真菌对昆虫的致病过程中起着重要的作用。 目前对真菌酸性海藻糖酶的研究较少,只有少数几个物种中酸性海藻糖酶基因被克隆并测定序列。研究发现酸性海藻糖酶与中性海藻糖酶之间不具同源性,并且不同酸性海藻糖酶基因之间序列同源性很差。这为酸性海藻糖酶的研究增加了难度。在虫生真菌中,还未见酸性海藻糖酶基因克隆方面的报道。本研究以金龟子绿僵菌(M. anisopliae)菌株CQMa102和东亚飞蝗为研究材料,对绿僵菌酸性海藻糖酶培养条件和同工酶进行了系统的研究,并在此基础上采用离子交换、分子筛层析等技术手段分离纯化出绿僵菌酸性海藻糖酶蛋白,对其分子量、等电点以及其它酶学特性进行了详细的研究。在纯化的蛋白氨基酸测序的基础上,通过设计寡核苷酸探针,对构建的绿僵菌基因组文库和随后的亚克隆进行了放射性同位素筛选,结合RACE等技术手段,成功分离出绿僵菌酸性海藻糖酶基因并登录NCBI的GenBank,登录号为:DQ237957 (基因组序列), DQ237958 (cDNA序列)。同时对绿僵菌酸性海藻糖酶在真菌侵染过程中的作用进行了较为详细的研究。研究的结果为进一步利用基因工程手段改造病原真菌、提高生物防治效果奠定了基础。主要研究结果如下: 1.利用产物(葡萄糖)测定法,以酶活和同工酶为指标,筛选出适合CQMa102酸性海藻糖酶产酶的培养基和产酶条件如下: 培养基:1.0g/L KH_2PO_4,0.5g/L MgSO_4,1.0g/L KCl,10g/L可溶性淀粉,5g/L蛋白胨,5g/L酵母浸膏,pH值调至6.0。把1.0ml 1.0-3.0×10~7个/ml CQMa102孢子悬液接种到100ml上述培养基中,在26℃、150rpm的条件下振荡培养3天,海藻糖水解酶总活性可达到14.125U/L,比活可达到0.4344U/mg。在该培养条件下,绿僵菌产生两种海藻糖降解酶同工酶,其中一个等电点为8.4,而另一个为4.7。
【学位授予单位】:

知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 李亚;;金龟子绿僵菌甘露糖6-磷酸异构酶基因cDNA序列的克隆及分析[J];广东海洋大学学报;2011年04期
2 何学友;蔡守平;黄金水;钟景辉;潘惠忠;周远谋;黄远清;;应用绿僵菌和白僵菌林间防治木麻黄毒蛾的初步研究[J];福建林业科技;2011年02期
3 吴延磊;杨鸣琦;商育锦;施珊珊;吴小胜;;苦马豆素对新城疫疫苗免疫效果的影响[J];西北农业学报;2011年08期
4 宋文婧;刘振邦;朱虹;黄勃;李增智;;十种虫生真菌液体培养芽生孢子的形态发生[J];菌物学报;2011年04期
5 张龙渊;张旭晓;;我国松墨天牛生物防治研究进展[J];陕西林业科技;2011年03期
6 管俊娇;虞泓;解云峰;左世梅;马荣锋;曾文波;;虫草属EST-SSR标记系统的建立研究[J];中国中药杂志;2011年13期
7 孟祥云;谢翎;黄勃;;玫烟色棒束孢几丁质酶(Ifuchit2)结构基因及上游序列的克隆与分析[J];安徽农业大学学报;2011年04期
8 廖素环;张民秀;施李鸣;黄伟坚;韦英益;;类枯草杆菌蛋白酶的生物学功能及其在农牧业疾病控制中的应用[J];安徽农业科学;2011年23期
9 ;[J];;年期
10 ;[J];;年期
11 ;[J];;年期
12 ;[J];;年期
13 ;[J];;年期
14 ;[J];;年期
15 ;[J];;年期
16 ;[J];;年期
17 ;[J];;年期
18 ;[J];;年期
19 ;[J];;年期
20 ;[J];;年期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 高强;商艳芳;黄威;王成树;;金龟子绿僵菌甘油吸收和甘油三酯合成途径对寄主致病能力的影响[A];中国菌物学会第五届会员代表大会暨2011年学术年会论文摘要集[C];2011年
2 李向英;李文华;彭国雄;王中康;夏玉先;;两株侵染东亚飞蝗的金龟子绿僵菌菌株的生物学特性比较[A];《中国虫生真菌研究与应用》(第五卷)[C];2003年
3 李向英;彭国雄;王中康;曾德玉;殷幼平;夏玉先;;金龟子绿僵菌在不同制剂中的耐热性测定[A];《中国虫生真菌研究与应用》(第五卷)[C];2003年
4 蔡守平;何学友;曾丽琼;黄金水;钟景辉;林传凤;;感染星天牛幼虫高毒力金龟子绿僵菌菌株筛选[A];海峡两岸第十届菌物学暨第三届食药用菌学术研讨会论文摘要集[C];2011年
5 方卫国;张永军;肖月华;杨星勇;罗明;范艳华;裴炎;;金龟子绿僵菌羧基转运蛋白基因JEN1的克隆与分析[A];首届中国青年学者微生物遗传学学术研讨会论文摘要集[C];2002年
6 郭素萍;徐一强;祁学忠;赵俊生;;绿僵菌研究的新进展[A];走向21世纪的中国昆虫学——中国昆虫学会2000年学术年会论文集[C];2000年
7 任文彬;张世清;黄俊生;;金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae HN1)几丁质酶基因的克隆及高效表达[A];第十届全国杀虫微生物学术研讨会暨全国生物农药与化学生物学研究与产业化会议论文摘要集[C];2006年
8 谢宁;殷幼平;张建伟;申剑飞;王中康;;金龟子绿僵菌CQMa128的鉴定及其对鳞翅昆虫的毒力测评[A];中国菌物学会2009学术年会论文摘要集[C];2009年
9 李锡杰;杨鸣琦;张伟;郭伟华;戴卉敏;;金龟子绿僵菌菌丝体及发酵液中苦马豆素的提取与分离[A];中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十六次学术研讨会、中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十五次学术研讨会论文集[C];2009年
10 陈斌;李正跃;桂富荣;孙跃先;严乃胜;;金龟子绿僵菌对马铃薯田小云斑鳃金龟子的生物防治潜力评价[A];加速发展云南马铃薯优势产业研讨会论文集[C];2003年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 赵华;昆虫病原真菌金龟子绿僵菌酸性海藻糖酶分离纯化、特性及其基因克隆的研究[D];重庆大学;2006年
2 刘迎春;昆虫病原真菌金龟子绿僵菌酸性海藻糖酶的功能研究[D];重庆大学;2007年
3 刘迎春;金龟子绿僵菌酸性海藻糖酶的功能研究[D];重庆大学;2007年
4 胡宗利;昆虫病原真菌金龟子绿僵菌中性海藻糖酶在孢子储藏稳定性中的作用[D];重庆大学;2005年
5 童应华;感染萧氏松茎象绿僵菌菌株筛选及其致病机理研究[D];福建农林大学;2009年
6 金少锋;基于金龟子绿僵菌和低剂量扑虱灵协同作用的稻飞虱防治替代策略研究[D];浙江大学;2010年
7 詹儒林;芒果炭疽病菌抗药性基因tub2的克隆及其转化金龟子绿僵菌的初步研究[D];华南热带农业大学;2007年
8 张传博;金龟子绿僵菌侵染东亚飞蝗特异表达基因筛选与体内定殖阶段cDNA文库构建[D];重庆大学;2009年
9 张沧桑;一种从感病昆虫血腔内获取金龟子绿僵菌(M. anisopliae)并构建其cDNA文库的新方法研究[D];重庆大学;2006年
10 何学友;金龟子绿僵菌松墨天牛优良菌株筛选及其林间宿存研究[D];福建农林大学;2007年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 叶小真;金龟子绿僵菌与化学农药相容性的初步研究[D];福建农林大学;2009年
2 刘颖;金龟子绿僵菌CQMa102致病相关基因CuAO的功能分析[D];重庆大学;2010年
3 钟伟;美洲大蠊对金龟子绿僵菌CQMa102菌株的免疫反应[D];西南农业大学;2003年
4 李春梅;从寄主昆虫血淋巴中获取病原真菌菌体的方法研究[D];重庆大学;2005年
5 应月青;绿僵菌固体培养基的微波灭菌研究[D];中国农业科学院;2006年
6 金玉荣;青海血蜱高致病性绿僵菌菌株的筛选及生物学特性[D];甘肃农业大学;2009年
7 李文华;金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae)和球孢白僵菌(Beauveria bassiana)附着胞形成的理化因子研究[D];西南农业大学;2003年
8 路宏朝;金龟子绿僵菌代谢产物中有效成分的初步研究[D];西北农林科技大学;2006年
9 蓝天敏;金龟子绿僵菌MaECM33基因的克隆及分析[D];重庆大学;2009年
10 李宝玉;金龟子绿僵菌孢子制备、贮存及检测标准化研究[D];中国农业科学院;2005年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978