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《重庆大学》 2008年
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缺失型α-地中海贫血基因诊断芯片及在分子流行病学研究中的应用

李泽松  
【摘要】: α-地中海贫血是世界上最常见的单基因遗传病,也是我国南方各省最常见、危害最大的遗传病。本病是由于第16号染色体短臂末端α-珠蛋白基因缺陷所致,有缺失型和非缺失型两种,缺失型是主要类型。在广东人中,超过96%的α-地中海贫血是由东南亚缺失(--SEA)、左侧缺失(-α4.2)和右侧缺失(-α3.7)引起。本病尚无有效治疗方法,携带者筛查及产前基因诊断是唯一防止新的患儿出生、提高人口素质的有效措施。实施该措施的前提是对人群中α-地中海贫血的流行病学的了解和相应的诊断技术的建立。 目前,多种分子诊断技术已用于α-地中海贫血的诊断检测。其中多重Gap-PCR已广泛用于α-地中海贫血的分子筛查和临床诊断,但其在检测陈旧DNA时尚有一定局限性。基因芯片技术已用于多种遗传性疾病的诊断和研究。该技术可为α-地中海贫血的分子诊断提供进一步发展完善的可能。因此,本课题将研制一种可用于临床的、具有稳定性好、重复性高的快速检测中国人中常见的三种缺失型α-地中海贫血的基因芯片。 在参照国内外文献的基础上,我们首先设计了特异性的PCR引物,建立并优化了PCR反应体系和条件。我们也设计了一系列长短不同的特异性的探针。在对醛基片的质量、探针的合成、点样液成分、探针浓度、杂交和洗涤等条件进行了研究比较后,我们获得了最适合的制备工艺和条件,并制备了含有70个寡核苷酸的探针的芯片。通过对临床标本的检测,设定了检测信号的判定标准:仅信噪比大于10,并且信号强度大于1000的探针才被认为是阳性的;如果-α3.7探针检测为阳性,那么α2的信号值必须大于-α3.7的一半时才能被判定为阳性。 在上世纪八十年代使用血液学方法对全国范围的地中海贫血的流行病学研究结果对地中海贫血的预防起了巨大的作用。但是伴随我国经济高速发展的大规模的人口移动以及几十年来对地中海贫血的有效防治,我国人群中地中海贫血的流行病学可能发生变化。同时,血液学研究的结果与实际情况可能有偏差,需要从基因水平进一步验证和核实。因此,新一轮的基于分子分析的全国范围的地中海贫血流行病学的调查研究势在必行。这将是一个浩大的工程。一个小规模具有代表性的人群中地中海贫血流行病学的调查研究,将具有积极意义。深圳作为一座移民城市,其人口来源于全国各地,深圳市人群中地中海贫血的流行病学对于全中国人群有一定的代表性。因此,我们也进行了深圳市人群中地中海贫血流行病学的研究。 使用自制的芯片我们对广东省深圳市人群地中海贫血的分子流行病学进行了调查。在检测过程中,我们检测到了一例特殊的病例,病人--SEA、?α3.7和α2均为阳性。血液血表型表现为典型的α-地中海贫血特点。通过分子分析鉴定其为HKαα和--SEA的复合杂合子。病人母亲基因型也为HKαα/--SEA,其父亲基因型为αα/--SEA。据我们所知,这是首次报道HKαα和--SEA的复合杂合子。由于HKαα/--SEA有典型的α-地中海贫血特点,与αα/--SEA的临床表型一致,因此在HKαα和αα之间并无明显的血液学和临床差异。这也反映了HKαα与αα基因序列的一致性。 通过对到深圳几家大的医院就诊和寻求产前咨询的3713个人进行了表型筛查和基因分析,我们获得了深圳市人群中地中海贫血的流行病学和突变谱带。深圳人口地中海贫血基因携带率为6.49%,其中α-地中海贫血为4.34%,β-地中海贫血为1.99%;α-地中海贫血和β-地中海贫血双重杂合子0.16%。较广东省其他地区的低。这可能与深圳市人口多为外来移民有关。我们共检测到3种缺失型α-地中海贫血突变、1种非缺失型α-地中海贫血点突变和9种β-地中海贫血。与广东省其他地区相比,深圳人口中地中海贫血基因的突变谱带并无明显差异。 综上所述,我们通过设计特异性的探针,与使用单管多重PCR扩增产物直接杂交,从而建立了一种新的检测缺失型α-地中海贫血的方法。该方法不仅方便快速,而且灵敏度高、特异性好,有利于在临床中推广应用。通过对深圳市人口地中海贫血流行病学的研究显示,该方法可应用于大规模人口地中海贫血流行病学调查,为地中海贫血的预防、诊断和基因治疗提供科学的理论根据。
【学位授予单位】:重庆大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2008
【分类号】:R556

【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 肖维威,徐湘民,徐钤;中国人缺失型α-地中海贫血的分子基础及产前基因诊断[J];第一军医大学学报;1998年01期
2 马骄,谢渊,齐晓岚,修瑾,何燕,李毅,赵艳,吴昌学,陈淼鑫,褚迅,张小蕾,吴晓黎,任锡麟,单可人;贵州黔西部分少数民族β-地中海贫血血液学筛查[J];贵阳医学院学报;2004年01期
3 区采莹,蒙晶,许蕴碧,王传文,黄尚志;海南343名黎族小学生α-地中海贫血基因型调查[J];海南医学;1999年02期
4 周代锋;王政;蔡兰洁;王小英;蔡望伟;;海南省汉、黎族人群缺失型α-地中海贫血的研究[J];中国热带医学;2006年09期
5 李明,聂李平,陶小梅,李玉珠,陈秀珍,郑桂琴,罗肇敏,汪明春;深圳地区地中海贫血患病率调查及其基因分型[J];热带医学杂志;2005年03期
6 张松;邹汉良;谭萍;李芳芳;甘志彪;;深圳东部地区地中海贫血发病率的调查研究[J];热带医学杂志;2006年02期
7 王升启;基因芯片技术及应用研究进展[J];生物工程进展;1999年04期
8 吴晓黎,谢渊,单可人,何燕,禄永汉,任锡麟;贵州西江苗族β地中海贫血筛查及基因分析[J];中国地方病学杂志;2001年06期
9 谢渊,单可人,齐晓岚,何燕,赵艳,李毅,张小蕾,吴晓黎,任锡麟;贵州省三都水族人群β-地中海贫血发病情况调查[J];中国地方病学杂志;2004年01期
10 郑桂琴,李明,聂李平,黄健,巫世娟,方光光,高萍;深圳市孕妇地中海贫血产前筛查及产前诊断[J];中国实用妇科与产科杂志;2003年06期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 沈春修;;分子生物学技术在百合病毒病害检测中的应用[J];安徽农学通报(上半月刊);2010年11期
2 龚成珍;胡永浩;王东升;张世栋;严作廷;;基因芯片技术及其在兽医学中的应用[J];安徽农业科学;2011年08期
3 黄霜;朱文彪;甘钊杏;陈秋霞;黄志成;;广州市番禺区城镇人群α和β地中海贫血的基因型分析[J];北方药学;2012年07期
4 周一炎,孔令魁,罗肇敏,陈悦康,刘怡,王飞,叶小演;深圳地区无偿献血人群地中海贫血调查[J];中国输血杂志;2003年02期
5 洪萍;朱培元;;微阵列技术在输血医学中的应用及其研究进展[J];中国输血杂志;2006年05期
6 贾慧,王进忠,陈忠斌,王升启,董金皋,赵祥云,张民照;百合病毒检测技术研究进展[J];北京农学院学报;2004年04期
7 张润锋,陈宏;基因芯片及应用[J];黄牛杂志;2002年03期
8 黄庆梅;张天郎;;广西横县育龄人群地中海贫血筛查结果分析[J];承德医学院学报;2009年03期
9 仇义华,唐治贵,刘涌,刘容海,焦春堂;重庆西部地区血红蛋白H病的研究[J];重庆医学;2001年01期
10 田鸾英,高武红,谢雨芳,易烈致,孙彦香;应用血液学指标诊断新生儿地中海贫血[J];中国当代儿科杂志;2005年01期
中国重要会议论文全文数据库 前5条
1 余玲玲;王慧燕;余坚;郑晓群;田可港;吕建新;冯晶晶;郑美琴;;HRM技术检测β地中海贫血基因突变方法的建立及初步临床应用[A];2011年浙江省检验医学学术年会论文汇编[C];2011年
2 蔡稔;梁昕;杨芳华;黄丽华;黄芬;;婚检人群地中海贫血筛查与产前诊断[A];中国优生科学协会2004年优生科学学术交流大会论文集[C];2004年
3 陈秋;夏永鹏;邱宗荫;;分子生物学在中药新药开发中的应用进展[A];2004年全国生物技术学术研讨会论文集[C];2004年
4 余伍忠;仇东辉;宋方;刘丽;金煜炜;何江;桂俊豪;王瑞;雷权;张占平;刘兴文;;新疆维吾尔族家系中PAH基因R111X纯合子突变研究[A];中国遗传学会“发育、遗传和疾病”研讨会论文汇编集[C];2007年
5 郑伟文;刘波;;生物信息学与药用植物研究[A];全国中药材GAP研究与应用学术研讨会会议论文汇编[C];2004年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 俞晓军;失血性休克大鼠肝脏差异基因的筛查及EPHX2基因表达的初步研究[D];第二军医大学;2011年
2 田晶;2型重组腺相关病毒载体介导β珠蛋白基因治疗地中海贫血的实验研究[D];中南大学;2010年
3 刘曼莉;猪链球菌2型感染宿主后宿主表达谱的分析研究[D];华中农业大学;2011年
4 王志鹏;AHSP基因对β-地中海贫血表型的修饰及BCL11A基因在β-地中海贫血患者持续表达胎儿血红蛋白中的作用[D];南方医科大学;2011年
5 赵永忠;α-地中海盆血分子诊断技术、基因缺陷及其流行病学调查研究[D];第一军医大学;2001年
6 霍纳新;小麦纹枯病、白粉病抗性QTL分析[D];中国农业科学院;2002年
7 贾骏;导电高分子PPy构建种植体表面电生物活性层的应用基础研究[D];中国人民解放军第四军医大学;2003年
8 陈汉忠;电化学免疫传感器的研制及其初步应用研究[D];中国农业大学;2003年
9 樊小农;用基因表达谱芯片筛选老年痴呆异常表达基因及针刺对其主效基因的影响[D];天津中医学院;2003年
10 马向东;α-淀粉酶基因的克隆与体外诱变[D];华中农业大学;2001年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 范锐;脐橙(Citrus sinensis Osbeck)果实采后商业贮藏中基因表达的芯片分析及候选基因的表达验证[D];华中农业大学;2010年
2 刘毅;侵染百合的南芥菜花叶病毒的分子检测及鉴定[D];昆明理工大学;2009年
3 黄飞飞;苹果microRNA的检测鉴定及前体结构预测[D];沈阳农业大学;2010年
4 徐祥虎;云南省地中海贫血的遗传流行病学及应用血红蛋白电泳筛查地中海贫血的研究[D];昆明医学院;2011年
5 朱鸿斌;地中海贫血相关珠蛋白基因启动子区甲基化研究[D];昆明医学院;2011年
6 石西南;云南西双版纳傣族儿童中β-地中海贫血HBB基因的变异分布特征[D];昆明医学院;2011年
7 赵爱玲;地中海贫血的基因诊断及DNA甲基化转移酶在地中海贫血发病机理中的作用[D];大理学院;2011年
8 赵晶;广西、内蒙贫困农村地区6~24月龄儿童贫血患病状况及影响因素研究[D];中国疾病预防控制中心;2010年
9 代廷非;多重RT-PCR技术检测马铃薯病毒的研究[D];四川农业大学;2011年
10 黄芳;结核分枝杆菌耐氨基糖苷类药物相关基因突变的研究[D];第四军医大学;2011年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 张基增,徐湘民,马维芳,单越新;用反向点杂交快速检测中国人β—地中海贫血基因突变[J];第一军医大学学报;1993年01期
2 肖维威,徐湘民,徐钤;中国人缺失型α-地中海贫血的分子基础及产前基因诊断[J];第一军医大学学报;1998年01期
3 周玉球,肖鸽飞,李文典,朱兰芳,屈信军,李莉艳,刘忠英,莫秋华,徐湘民;Gap-PCR作为临床一线α-地中海贫血携带者筛查技术的应用评价[J];第一军医大学学报;2002年05期
4 周玉球,徐湘民;中国人β地中海贫血的分子基础及产前诊断[J];国外医学.遗传学分册;1995年03期
5 蒋南华,梁徐,梁荣,苏承武,金琪;广西地区β-地中海贫血突变基因的分析[J];广西医科大学学报;1994年02期
6 贵州省血红蛋白病研究协作组;晏家益;李断勋;;贵州省31444人异常血红蛋白流行病学调查[J];贵阳医学院学报;1986年04期
7 海南岛血红蛋白病研究协作组;;海南岛10万人中的异常血红蛋白[J];海南卫生;1982年02期
8 区采莹,蒙晶,许蕴碧,王传文,黄尚志;海南343名黎族小学生α-地中海贫血基因型调查[J];海南医学;1999年02期
9 周代锋,蔡望伟,韩建勋,蔡兰洁;海南汉族人群中东南亚缺失型α地中海贫血的研究[J];海南医学院学报;2001年02期
10 区采莹,蒙晶,陈历昌;海南籍汉族学生α-地中海贫血基因频率的分析[J];海南医学院学报;2001年03期
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中国期刊全文数据库 前10条
1 ;我校与江南生物科技有限公司合作开展地中海贫血基因芯片项目研究[J];第一军医大学学报;2000年05期
2 王沙燕,张阮章,李芳芳,石之嶙,徐辉,戴勇;缺失型α地中海贫血的基因芯片检测[J];中国优生与遗传杂志;2003年05期
3 邓国生;罗宇迪;张宁;;玉林地区地中海贫血基因缺失和点突变分布的探讨[J];中华全科医学;2011年01期
4 张力,区小冰,俞一平;广东地区αβ复合型地中海贫血的检出率及临床表现[J];中国小儿血液;2004年02期
5 申芫子;李哲刚;潘干华;郑立新;黄勇;刘国先;;广东省佛山市新婚育龄人群α地中海贫血的分子流行病学调查[J];中国计划生育学杂志;2010年01期
6 申芫子;李哲刚;潘干华;郑立新;黄勇;刘国先;;广东省佛山市育龄人群β地中海贫血的分子流行病学调查[J];中国计划生育学杂志;2010年03期
7 区小冰,张力,余一平,李梅爱,何艳明;基因芯片诊断地中海贫血的研究[J];中华儿科杂志;2005年01期
8 杨艳秋;葛世军;番云华;刘厚昌;杨必清;王冠;禹祖祥;陈祖聪;尹兆清;罗祥美;;德宏地区地中海贫血社区群体筛查和基因诊断[J];国际检验医学杂志;2010年06期
9 代宏剑;温柏平;杨俊逸;;地中海贫血的实验室诊断进展[J];国际检验医学杂志;2011年02期
10 姚莉琴;邹团标;范丽梅;陈谦;忽丽莎;杨发斌;刘锦桃;赵钟鸣;;德宏州傣、景颇、德昂、阿昌族0-7岁儿童地中海贫血调查[J];中国优生与遗传杂志;2011年05期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 ;深圳市广东籍人群地中海贫血流行病学调查及基因型分布研究[A];第八次全国医学遗传学学术会议(中华医学会2009年医学遗传学年会)论文摘要汇编[C];2009年
2 黄欣秋;王琳;杜华;张新华;王荣新;吴志奎;柴立民;;β-地中海贫血基因突变型与益髓生血灵颗粒疗效相关性的研究[A];中华医学会第十四次全国儿科学术会议论文汇编[C];2006年
3 李坚;钟惠珠;;地中海贫血和G6PD缺乏的大人群产前筛查报告[A];中国优生优育协会第三届学术研讨会专辑[C];2003年
4 易萍;李力;邓兵;姚宏;陈竹钦;;单细胞水平β地中海贫血基因突变检测技术的实验研究[A];第八次全国妇产科学学术会议论文汇编[C];2004年
5 金旻;戚华兵;黄炜;王小凤;陈林;;基因芯片研究结合FGFR3的核心短肽对小鼠前软骨细胞的作用[A];中华医学会第六次全国骨质疏松和骨矿盐疾病学术会议暨中华医学会骨质疏松和骨矿盐疾病分会成立十周年论文汇编[C];2011年
6 王兴斌;黄轶;熊娟;袁召建;包黎明;邹琳;;重庆地区1406例儿童地中海贫血基因突变类型分析[A];中华医学会第十五次全国儿科学术大会论文汇编(上册)[C];2010年
7 周红平;饶兆英;罗桂英;;48例江西籍β地中海贫血产前诊断结果分析[A];中华医学会第七次全国检验医学学术会议资料汇编[C];2008年
8 赖永榕;王明月;;羟基脲对血红蛋白E/β-地中海贫血患者的疗效观察[A];第12届全国实验血液学会议论文摘要[C];2009年
9 姜烈君;;脐血血红蛋白电泳筛查地中海贫血[A];第五次全国中青年检验医学学术会议论文汇编[C];2006年
10 方建培;许吕宏;;重型β地中海贫血诊治指南的解读[A];中华医学会第十五次全国儿科学术大会论文汇编(上册)[C];2010年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 记者刘晓军;基因芯片查地中海贫血[N];科技日报;2002年
2 本报记者 尹海明 通讯员 覃世光;让地中海贫血远离生命[N];南宁日报;2008年
3 吴敏;“三关”可防地中海贫血[N];大众卫生报;2009年
4 本报记者 罗猛;“向地中海贫血宣战”[N];广西日报;2010年
5 记者 魏如松 通讯员 张泽彪;王洁委员建议:将地中海贫血病列入少儿医保大病门诊[N];海南日报;2011年
6 本报记者 慕欣;拒绝地贫儿[N];医药经济报;2010年
7 黄绍良;防治地中海贫血应始于婚前[N];健康报;2004年
8 健康时报特约记者  陈锦屏;什么办法能治地中海贫血?[N];健康时报;2006年
9 记者 任珊珊;广东每9个人就有1人带地贫基因[N];广州日报;2008年
10 孟庆普;地中海贫血不该发生的遗憾[N];健康报;2005年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 李泽松;缺失型α-地中海贫血基因诊断芯片及在分子流行病学研究中的应用[D];重庆大学;2008年
2 杨林;猪瘟病毒基因芯片诊断技术的研究及应用[D];中国农业大学;2005年
3 刘雪强;乌头碱逆转耐药性人口腔上皮鳞状癌细胞分子机制研究[D];北京中医药大学;2005年
4 周盛年;电刺激大鼠癫痫模型及基因芯片检测谷胱苷肽-巯-转移酶基因的表达[D];山东大学;2004年
5 许明火;表皮参与瘢痕形成的实验和临床研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2006年
6 王珍祥;增生性瘢痕的基因芯片分析及意义[D];第三军医大学;2002年
7 祁震宇;人脑胶质瘤中二条差异表达基因的研究[D];苏州大学;2003年
8 刘学端;海底及污染环境中微生物群落分子多样性研究[D];湖南农业大学;2003年
9 孙波;基因芯片技术在子痫前期外周血白细胞差异表达基因研究中的初步应用[D];吉林大学;2006年
10 祁小飞;骨髓增生异常综合征患者的基因表达谱研究[D];苏州大学;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 胡明;人退变椎间盘基因表达谱的研究[D];第二军医大学;2004年
2 王玉鹏;基于基因芯片的基因表达模式分析[D];厦门大学;2007年
3 戴奇刚;鼻咽癌转移相关基因表达谱的研究[D];广西医科大学;2008年
4 朱利娜;酵母基因芯片的制备及其在热休克基因表达谱研究中的应用[D];第一军医大学;2002年
5 江远;基因芯片技术研究莪术不同成分对HSC-T6细胞基因表达的影响[D];湖北中医学院;2004年
6 宋光辉;应用基因芯片研究同型半胱氨酸对ECV-304细胞基因谱表达的影响[D];郑州大学;2004年
7 沈征;2型糖尿病大鼠建模、基因表达谱与细胞凋亡研究[D];浙江大学;2004年
8 林苗;2型糖尿病大鼠肝脏基因表达谱[D];福建医科大学;2004年
9 李秀萍;应用基因芯片检测奶牛乳房炎主要致病菌的研究[D];山东农业大学;2005年
10 赵文瑾;HBV基因分型芯片的构建及临床初步应用[D];中国医科大学;2006年
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