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《重庆大学》 2009年
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Rhodobacter sphaeroides和Rhodovulum sulfidophilum LHII的α和β亚基的交叉作用关系

李尽哲  
【摘要】: 光合细菌能够利用光能进行光合作用,同时产氢固氮,在自然界碳、氮、硫循环中扮演着重要角色,其捕获光能的机理研究对于弄清楚光合作用机理具有重要意义,为实现体外构建高效光合作用单位,有效利用光能的目标提供了一些理论依据,具有重要的研究价值。 Rhodobacter sphaeroides和Rhodovulum sulidophilum为不同属的两种光合细菌,前者的捕光系统II由pucB、pucA基因编码产生的β亚基和α亚基组装形成,后者的捕光系统II由pucsB、pucsA基因编码产生的β亚基和α亚基组装形成。本文将这两组基因交叉组合,克隆到包含puc启动子的表达载体中,得到两个表达质粒即pRKpucsBpucA和pRKpucBpucsA,然后通过接合转移方法分别转入LHI、LHII和RC缺陷型菌株DD13中,两种接合转移菌株都可以形成捕光系统II并进入光合细菌膜系统。本研究取得的主要成果如下: ①设计一对引物扩增出基因pucsBA,并把此基因克隆到载体pMD18-T中,并测序验证。 ②用SacI和XbaI分别双酶切质粒pMD18-T-SBA和pRKpucApuc2B*HHT,得到pucsB基因片段和pRKpucA载体片段,加入T4-DNA连接酶,连接得到表达载体pRKpucsBpucA;用Xba I和BamH I双酶切质粒pMD18-T-SBA , pRKpucBpuc2A-1,得到基因片段pucsA和载体片段pRKpucB,用同样的的方法连接得到表达载体pRKpucBpucsA。 ③利用E.coli S17-1通过接合转移将pRKpucsBpucA和pRKpucBpucsA导入宿主Rb. sphaeroides DD13得到菌株Rb. sphaeroides DD13/pRKpucsBpucA和Rb. sphaeroides DD13/pPKpucBpucsA。 ④RT-PCR分析证实杂合基因的获得高效的表达。 ⑤近红外光谱分析证明表达的杂合捕光蛋白能够与捕光色素结合,形成色素蛋白复合物。 ⑥通过以上研究结果证明,外在表型性状差别较大的两种光合细菌的捕光蛋白有一定的通用性,为我们以后进一步了解光合细菌捕获太阳能的机理奠定了基础。
【学位授予单位】:重庆大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2009
【分类号】:Q936

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