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纵条纹炭角菌抗菌活性次生代谢产物研究

刘霞  
【摘要】:高等真菌能在自然条件下产生多糖、生物碱、黄酮、甾体等物质来抵御其他生物侵蚀,而有些物质大多结构复杂、生物活性多样,是未来新药的潜在来源之一。本研究的主要内容包括:对拟黄薄孔菌、纵条纹炭角菌、葱柄白鬼伞、光炭轮菌、漏斗形马勃、海绵胶煤炱菌、球形炭角菌、叉炭角菌、扁炭角菌、长柄炭角菌、炭角菌和老炭角菌共12种高等真菌的发酵产物进行了抗菌及抗氧化筛选;对纵条纹炭角菌的最佳培养条件进行了优化;研究了纵条纹炭角菌液体培养提取物的抗菌及抗氧化活性;采用活性追踪法对纵条纹炭角菌菌丝体的抗菌活性成分进行了分离鉴定。具体研究结果如下:(1)运用薄层自显影法测定12种高等真菌提取物抑制细菌活性,结果表明,拟黄薄孔菌、纵条纹炭角菌、光炭轮菌、漏斗形马勃、球形炭角菌和长柄炭角菌的发酵液和菌丝体提取物对受试6种细菌都有不同程度的抑制作用;采用生长速率法测定了12种高等真菌提取物对小麦赤霉的抑制作用,结果发现拟黄薄孔菌和纵条纹炭角菌菌丝体提取物在供试终浓度分别为0.31和0.30 mg/ml时,对小麦赤霉的抑制率分别为85.41%和83.58%,老炭角菌发酵液提取物在终浓度为0.52mg/ml时对小麦赤霉的抑制率为100%;采用TLC-DPPH测定12种高等真菌提取物的抗氧化活性,结果发现12种高等真菌提取物都具有清除DPPH·的作用。(2)以菌丝体生物量为指标,采用单因素试验及正交优化试验,确定纵条纹炭角菌液体培养的最佳条件。单因素实验表明,碳源以麦芽糖、葡萄糖或玉米粉最佳,最佳氮源为黄豆饼粉,最佳碳氮比为5:1,其它最佳培养参数为p H 6、接种2块菌饼、振荡培养7 d,K、Mg、P及VB1对菌丝体生长有明显的促进作用。正交实验表明,在麦芽糖4%、黄豆饼粉0.8%、p H 7、25℃及振荡培养13 d的条件下,菌丝体生物量最大,菌丝体干重可达8.75 g/l。(3)采用牛津杯法和96孔板法测定纵条纹炭角菌提取物对10种细菌的抑制作用,结果发现,菌丝体提取物在供试终浓度为2.86mg/ml时,对细菌的抑菌圈直径为13.0~17.5 mm,发酵液提取物的抑菌圈直径为10.5~12.7 mm。菌丝体及发酵液提取物对阴沟肠杆菌的抑制效果最为明显,最低抑菌浓度分别为0.72和1.43 mg/ml,抑菌圈直径分别为17.1和12.7 mm;采用生长速率法测定提取物对9种植物病原真菌的抑制作用,结果表明,菌丝体和发酵液提取物在终浓度为0.4 mg/ml时,对小麦赤霉病菌的抑制效率最大,抑制率分别为85.9%和69.5%;抗氧化结果表明,纵条纹炭角菌提取物清除DPPH·、·OH和ABTS自由基的效果较为明显,清除率均高于75%,提取物也具有很强的还原能力和螯合能力。(4)采用硅胶柱层析和Sephadex LH-20柱层析方法,从纵条纹炭角菌菌丝体中分离出两个抗菌活性强的化合物,即麦角甾醇和过氧麦角甾醇。两个化合物对大白菜软腐病菌均表现出十分明显的抑制效果,最低抑菌浓度分别为5和18μg/ml。麦角甾醇在0.02 mg/ml时,对苹果腐烂病菌、油菜菌核病菌、小麦赤霉病菌和玉米小斑病菌的菌丝生长均完全抑制,而过氧麦角甾醇仅能完全抑制玉米小斑病菌的生长,对其它真菌的抑制效果较差。


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1 刘霞;纵条纹炭角菌抗菌活性次生代谢产物研究[D];西南科技大学;2015年
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