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《西南农业大学》 2001年
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根癌农杆菌介导几丁质酶基因和β-1,3-葡聚糖酶基因转入甘蓝型油菜

陆万香  
【摘要】: 甘蓝型油菜是世界重要的经济作物之一,但是由于长期受到多种病害特别 是菌核病的危害,其产量和品质受到严重影响。目前,通过常规育种方式来寻 找合适的抗源尚存在困难。因此,利用植物基因工程,转入外源抗真菌基因使 油菜获得对菌核病的抗性无疑成为油菜抗病育种的一条可行的新途径。 本实验是在建立甘蓝型油菜下胚轴高频再生体系和成熟的遗传转化体系 的基础上,利用根癌农杆菌介导的方法,将玉米几丁质酶基因、大麦β-1,3 葡聚糖酶基因及其双价表达载体分别导入油菜,并对转基因植株进行了检测。 实验结果如下: 1.建立起以高频再生体系 取6d苗龄的下胚轴切段,接入MS+0.2mg/L BA+1.0mg/L2,4-D中预培养 3~4d,再转入MS+3.0mg/L BA+0.1mg/L NAA+6mg/L AgNO_3分化培养,50d后 下胚轴再生出不定芽。D_2和96V44两个品种再生频率达80%以上。 2.建立起以下胚轴为受体的遗传转化体系 取各转化受体接入预培养基上培养3d,然后采用OD_(600)值为0.3~0.4的农 杆菌菌液迅速浸染30sec,取出外植体,置灭菌滤纸上吸干多余的菌液,转入 表面附加有一层滤纸的预培养基上26℃、暗处共培养2d。完成共培养后,将外 植体转入MS+500mg/LCef液体培养基中,轻微振荡洗涤2~3次后滤纸吸干, 接入脱菌培养基中培养7d。然后依次转入分别附加5、10、15mg/L Kan的筛选 培养基中进行梯度筛选,将最终筛选到的绿芽进行检测和扩繁。四个品种的下 胚轴转化率在1.6~8.4%之间。 3.转基因植株的检测 分别对几丁质酶基因、葡聚糖酶基因和双价表达载体的Kan抗性芽进行 PCR分子生物学检测,结果表明目的基因已随NPTⅡ基因转入油菜。 分别取几丁质酶基因和双价表达载体转化植株的叶片制备粗酶液,通过化 学检测法和几丁质平板检测法显示:转基因植株叶片中几丁质酶的产量比对照 (非转基因植株)高,说明外源基因已在转基因植株中进行表达。 取几丁质酶基因转化植株的两个株系进行室内菌核菌的接种实验,结果表 明:其中一个株系与对照相比具有较强的抗性,适宜于进一步田间鉴定,以筛 选出有前途的抗菌核病的油菜新材料。
【学位授予单位】:西南农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2001
【分类号】:S565.403.5

【引证文献】
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1 刘梅;利用生防木霉基因提高水稻抗病性研究[D];浙江大学;2003年
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【参考文献】
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【共引文献】
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4 刘建荣;农杆菌介导的几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶基因转化马铃薯的方法研究[D];甘肃农业大学;2000年
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6 李群;根癌农杆菌介导的β-1,3-葡聚糖酶基因在新疆甜瓜中的转化与表达[D];新疆农业大学;2000年
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【同被引文献】
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10 暴增海,马桂珍,杨文兰;链孢粘帚霉HL-1-1对核盘菌的抑菌作用及其发酵条件的研究[J];河南农业科学;2004年10期
中国博士学位论文全文数据库 前5条
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中国硕士学位论文全文数据库 前10条
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【二级引证文献】
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【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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