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《西南农业大学》 2002年
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棉花茎尖基因枪—农杆菌转化体系的建立和GLU-CHI基因的导入

张浩  
【摘要】: 棉花是世界重要的经济作物之一,但是由于长期受到黄萎病的危害,其产量和品质受到严重影响。目前,通过常规育种方式来寻找合适的抗源尚存在困难。因此,利用基因工程进行遗传改良的研究一直倍受人们关注。 本实验以川棉239和川棉45的茎尖为材料,建立起良好的再生体系和基因枪—农杆菌转化体系。并把玉米几丁质酶基因和大麦β-1,3-葡聚糖酶基因的双价表达载体导入棉花,获得了抗卡那霉素的转基因棉花新材料,主要结果如下: 1.棉花茎尖再生体系的建立 取1.5d苗龄的茎尖,接入MSB_1(MSB+BA 0.1mg/L)中培养2-3周,然后转入MSB_2(MSB+活性炭lg/L)中培养2-3周,再转入MSB_3(MSB+IBA 0.1mg/L+IAA0.1mg/L)中培养2周,再在1/2MSB上培养2-4周。两个品种的再生频率达90%以上。 2.Kan筛选压的确定 取1.5d苗龄的棉花茎尖,置于附加不同浓度(0、10、20、30、40、50、75、100mg/L)Kan的MSB_1(MSB+BA 0.1mg/L)培养基中进行Kan敏感性测试,确定了筛选压浓度为:Kan 50mg/L。 3.棉花茎尖基因枪—农杆菌转化体系的建立 取1.5d苗龄的茎尖,用钨弹轰击形成创伤,轰击距离为3cm,轰击压力为1550psi,真空度27-28 inches Hg(负压)。然后用OD_600值为1.1的农杆菌菌液(内含100mg/L乙酰丁香酮)抽真空感染30min,真空度为25 inches Hg。转入表面附加有一层滤纸的MSB_1+AS 100mg/L的培养基上28℃、暗处共培养3d后,将外植体转入延迟筛选培养基(MSB_1+Cef500mg/L)中培养7d。然后依次转入附加Kan 50mg/L+Cef 500mg/L的MSB_1、MSB_2、MSB_3培养基中进行筛选,获得抗性植株。两个品种的茎尖转化率均为7.89%±。 4.转基因植株的鉴定 转基因植株经PCR检测证明目的基因已随NPTⅡ基因转入棉花基因组中。
【学位授予单位】:西南农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2002
【分类号】:S562.035.3

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【引证文献】
中国期刊全文数据库 前1条
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中国博士学位论文全文数据库 前3条
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2 蒋玉蓉;棉花遗传转化方法与耐盐、抗除草剂基因的转化利用研究[D];浙江大学;2007年
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中国硕士学位论文全文数据库 前6条
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4 倪萌;农杆菌介导法转hpalxoo基因棉花再生植株建立及转hpalxoo基因棉细胞组织抗病表型鉴定[D];新疆农业大学;2008年
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【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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10 李燕娥,朱祯,陈志贤,吴霞,王伟,李淑君,朱玉,焦改丽,吴家和,徐鸿林,范小平,孟晋红,肖桂芳,李向辉;豇豆胰蛋白酶抑制剂转基因棉花的获得[J];棉花学报;1998年05期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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7 侯丽霞;何启伟;卜丽霞;王崇启;董玉梅;焦自高;;花粉管通道法转化甜瓜自交系的技术研究初报[J];山东农业科学;2007年03期
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中国重要会议论文全文数据库 前10条
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4 邢宏宜;易永华;贾涛;杨安民;;陕西棉花抗枯、黄萎病育种方法与效果分析[A];中国作物学会2007年学术年会论文集[C];2007年
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8 张燕;吴国良;丁春刚;;核桃生物技术研究进展[A];第三届全国干果生产与科研进展学术研讨会论文集[C];2003年
9 刘德兵;魏军亚;秦岭;范崇辉;李绍鹏;;转基因技术在果树抗病育种中的应用[A];中国园艺学会第六届青年学术讨论会论文集[C];2004年
10 齐靖;申连英;毛永民;曹柳青;兰海波;陈亮;;枣转基因研究前景展望[A];第五届全国干果生产、科研进展学术研讨会论文集[C];2007年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 张婕;嗜热真菌热稳定几丁质酶基因的克隆、表达与分子改造[D];山东农业大学;2010年
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3 刘宏波;甘蓝型油菜抗病虫基因遗传转化及转基因植株抗性鉴定的研究[D];浙江大学;2010年
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5 徐伟荣;中国华东葡萄抗白粉病芪合成酶基因及启动子克隆与功能分析[D];西北农林科技大学;2010年
6 崔玉琳;亚心型扁藻细胞核与叶绿体稳定转化系统的构建[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2011年
7 咸洪泉;菌寄生真菌几丁质酶基因的克隆及功能研究[D];山东农业大学;2011年
8 冯守千;红梨着色机理的研究[D];山东农业大学;2011年
9 马进;水稻条纹病毒(RSV)RNA3、RNA4的克隆与抗RSV转基因水稻的培育[D];山东农业大学;2011年
10 于莹;利用羊草EST文库克隆耐盐碱相关基因[D];吉林大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 张庆福;枳精氨酸脱羧酶基因(PtADC)转化烟草提高抗脱水研究[D];华中农业大学;2010年
2 魏礼玲;MYB转录因子家族相关EST干涉载体构建及遗传转化的研究[D];华中农业大学;2010年
3 梁梅荣;澳大利亚扇子花Scaevola nitida R.Br的组织培养研究[D];华中农业大学;2010年
4 刘鑫;利用分子标记辅助选择培育和评价三种BT基因(CRY1AC、CRY1C~*和CRY2A~*)抗虫水稻[D];华中农业大学;2010年
5 骆雪姣;棉花不同密度效应研究[D];华中农业大学;2010年
6 丛胜波;斜纹夜蛾与转基因棉(Cry1Ac)的互作研究[D];华中农业大学;2010年
7 卢增斌;防治水稻螟虫单项技术措施的评价及储备技术—转基因水稻对非靶标生物影响的研究[D];华中农业大学;2010年
8 闫恒超;棉花纤维发育伸长期和次生壁加厚期数字表达谱分析[D];华中农业大学;2010年
9 吴寿明;转基因抗虫棉单交种、三交种的优势分析[D];华中农业大学;2010年
10 黄振;马尾松幼苗茎段和春梢茎段组织培养[D];中南林业科技大学;2009年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 王家宝,王留明,沈法富,张学坤,杨静,刘任重;环境因素对转Bt基因棉Bt杀虫蛋白表达量的影响[J];山东农业科学;2000年06期
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中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 李付广;双价转基因抗虫棉的获得及其抗虫性与生理生化特征[D];中国农业科学院;2003年
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3 刘柱;可变盐单胞菌中草甘膦抗性EPSP合酶新基因克隆、大肠杆菌表达及其抗性机制的研究[D];四川大学;2004年
4 于寒颖;核盘菌生物除草剂特性及其相关基因的克隆表达[D];哈尔滨工业大学;2006年
5 蒋玉蓉;棉花遗传转化方法与耐盐、抗除草剂基因的转化利用研究[D];浙江大学;2007年
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9 金丹;新型高抗草甘膦EPSPS基因的克隆及草甘膦N-乙酰转移酶的活性位点鉴定[D];四川大学;2007年
10 方军;苏云金杆菌营养期杀虫蛋白vip3基因及其在转基因水稻中的应用[D];浙江大学;2008年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 李晓;棉花基因转化的研究及其在纤维品质改良中的应用[D];浙江大学;2002年
2 朱玉;极端污染环境下草甘膦耐受菌株荧光假单胞菌G2的鉴定及其EPSP合成酶基因的克隆[D];中国农业科学院;2002年
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5 李玉全;不同耐盐棉花品种细胞结构、mRNA差异表达及其BADH基因的序列分析[D];山东农业大学;2003年
6 于娅;棉花基因枪转化体系的建立[D];河北农业大学;2003年
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10 罗小敏;棉花组织培养与雪花莲凝集素基因转化[D];河北大学;2004年
【二级引证文献】
中国期刊全文数据库 前8条
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2 浦艳吉;李国怀;姚延兴;张陆阳;梁晓梅;;李茎尖离体培养与植株再生[J];华中农业大学学报;2009年02期
3 黎冬华;廖玉才;李和平;;根癌农杆菌介导的大麦茎尖转化研究[J];麦类作物学报;2012年01期
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中国博士学位论文全文数据库 前7条
1 燕树锋;转基因抗草甘膦棉花种质系的创造及利用[D];浙江大学;2011年
2 蒋玉蓉;棉花遗传转化方法与耐盐、抗除草剂基因的转化利用研究[D];浙江大学;2007年
3 汪静儿;棉花原生质体培养与体细胞杂交研究[D];浙江大学;2007年
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7 李玉珠;苜蓿与百脉根原生质体培养及体细胞杂交的研究[D];甘肃农业大学;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
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4 史勇;影响矮败小麦花培的因素及D32基因转化小麦花药愈伤组织的研究[D];西北农林科技大学;2010年
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7 李琳;Harpin(X_(oo))和Harpin_X_m蛋白激发烟草氧爆发相关基因的时序性表达及其纳米粒的制备[D];海南大学;2012年
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【二级参考文献】
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2 刘庆法,唐克轩,叶建明,郝峥嵘,何艺园,沈大棱;农杆菌介导的小麦遗传转化条件的研究[J];复旦学报(自然科学版);1998年04期
3 刘志学,张旭,徐亚南,何艺园,马向前,沈大棱,唐克轩;用LBA4404/pCAMBIA系列转化水稻的最佳条件[J];复旦学报(自然科学版);1999年04期
4 高越峰,朱祯,朱玉,肖桂芳,李向辉;大豆Kunitz型胰蛋白酶抑制剂基因的克隆及其转基因烟草抗虫性初探[J];高技术通讯;1997年09期
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