收藏本站
《西南农业大学》 2002年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

AGP小亚基反义基因导入魔芋研究

李贞霞  
【摘要】: 魔芋是单子叶植物纲(Monocotyledoeae)天南星科(Araceae)魔芋属(Amorphophallus Blume)的多年生草本植物,原产于印度和斯里兰卡,在我国有2000多年的栽培历史,是传统的食品和草药,目前在现代食品、医药和化工等方面也得到广泛的开发和利用。魔芋以其高产出、高利润的优势,成为我国中西部山区的重要经济作物,发挥了很好的扶贫致富和富民强县的作用,并形成集科、农、工、商、贸于一体的产业。然而,魔芋种植业现在却成为魔芋产业发展的瓶颈,主要存在品种退化、良种缺乏和更新缓慢等问题。选育高品位的新品种是生产上急需的和一个长期的课题。品质改良的主要目标在于增加葡甘露聚糖含量和减少淀粉的积累。葡甘露聚糖含量越高和淀粉含量越低的品种,品位越高,加工出来的精粉产量越高和质量越好。 腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(AGP)是植物淀粉生物合成的关键酶。它催化1-P-G和ATP生成的ADP—葡萄糖(ADPG)。后者将作为淀粉合成酶的底物直接参与直链淀粉和支链淀粉的合成。在植物中,该酶是由二个大亚基(AGPL)和二个小亚基(AGPS)组成的异源四聚体。目前,该酶及其基因已经从玉米、小麦、菠菜等多种植物中得到分离纯化和研究。在不同物种间,小亚基高度保守,而大亚基相对变幅较大;小亚基是酶的活性中心,而大亚基则主要起调节作用。1993年美国Mosounto公司将来自大肠杆菌的AGP基因导入马铃薯,其块茎的淀粉和干物质含量平均提高24%;相反,若导入该酶的反义基因,则淀粉含量下降到只有对照的2%。因此通过对该酶的遗传操作,可以达到显著增加或减少植物体内淀粉含量的目的。 本论文属国家自然科学基金项目“魔芋淀粉合成的反义抑制研究”的部分内容。主要是将通过RT-PCR方法钓取的白魔芋AGP小亚基基因(AGPS1)构建成反义基因表达载体,以白魔芋愈伤组织为试材,分别探讨农杆菌转化和基因枪法转化的条件,获得整合有AGPS1反义基因的转基因植株,并对获得的转基因植株进行PCR和PCR-Southern检测,为今后采用转基因手段进行魔芋育种和品质改良奠定基础。现将主要研究内容和结果总结如下: 1、AGPS1反义基因表达载体的构建 将位于质粒pCR—AGPS1上的AGPS1片段经SacI/XbaI酶切后,替代质粒p35S-GUS载体中的GUS基因,即构建成带有AGPS1反义基因表达盒的载体p35S—AGPS1,其中AGPS1基因的3’端位于CaMV 35S启动的下游,5’端位于Nos终止子的上游。EcoRI/HindIII酶切后回收该反义基因表达盒,插入到pBINPLUS双元载体的对应位点,获得了大小为13.93kb的AGPS1反义基因双元表达载体pBIN—AGPS1。该质粒含Kan抗性筛选基因,导入农杆菌后可用于农杆菌介导的魔芋遗传转化。 将质粒PGS 和 PBluescript 11 KS+(pBSKS-)经EcoRI/Sacl酶切后分另回收小片段和 大片段,并对回收的片段进行连接,获得含有除草剂抗性基因Pat的质粒P35S干AT。对质 粒P35S-PAT和含有AGPSI反义基因表达盒的P35S-AGPSI进行ECORI/HIOdlll酶切,分别 回收大片段、小片段后连接,获得大小为5.slkb的AGPSI反义基因表达载体pPAT{。 该质粒DNA直接用于基因枪法微弹介导的转化。 2、农杆菌介导的魔芋遗传转化体的建立 取正在生长的魔芋愈伤组织,切成0.5见方大小,分接接种于含0、25、SO、75、100、 125、150、175、200mg几卡那霉素“an)的MS培养基,观察Kan对魔芋愈伤组织分化的 影响。将魔芋愈伤组织块接种于含0、100、200、300、400、500、600。g/L竣芋青霉素(Carb) 的MS培养基中,观察不同的抑制剂浓度对魔芋愈伤组织生长和分化的影响,并探讨预培养 时间对转化的影响等。结果表明,适于魔芋愈伤组织遗传转化的筛选压浓度为75mg几的卡 那霉素;当筛选压Kan浓度大于100mg/L时,魔芋愈伤组织生长缓慢,逐渐死亡。Carb对 魔芋芽分化的影响不显著,随着浓度的增大,Carb对厦芋芽分化的抑制作用也增强,但这 种抑制效果在实验浓度范围内与对照的差异不显著.较为适宜的抑菌浓度为Carb30UL。 魔芋的预培养时间与甘蓝、油菜的相似,均以 2天为宜。因此,较适宜魔芋的农杆菌转化 条件为:魔芋愈伤组织预培养2天,直接接种农杆菌菌液,共培养2天,延迟筛选6-7天 和在含有75mg/二的 Kan和300mg/L Carb的芽分化培养基上筛选等。 3、基因枪法微弹介导的魔芋遗传转化体系的建立 将魔芋愈伤组织接种于含有不同浓度除草剂Basta(0、0.25、0.5、0.75、1.00、1.25、 1.50、1.75、2.00mg/L)的MS培养基上,观察除草剂对魔芋愈伤组织芽分化的影响。结果 表明,ZmyL的B肪t。就足以使魔芋愈伤组织致死,B%t刊。吧儿就足以抑制正常的芽再生。 实际操作中,为了得到较多的转化子,早期选用M/L Basta作为选择压,而后期的筛选 使用Zing几较高浓度的Basta,以确保获得真正的转化子。 同时,对基因枪的轰击参数氦气压力和轰击距离等进行了探讨。魔芋具有分化潜能的 细胞位于愈伤表面,较低的轰击压力和适当的轰击距离,将有助于子弹击中该细胞层,提 高转化的频率。实验表明,氦气压力/轰击距离以1100Psi伯 最适。在轰击前4h和轰击
【学位授予单位】:西南农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2002
【分类号】:S632.903.53

手机知网App
【引证文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 周盈;一种来自植物内生芽胞杆菌的新型抗魔芋软腐病菌蛋白[D];华中农业大学;2006年
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 刘志学,马向前,何艺园,徐亚南,叶鸣明,唐克轩;农杆菌介导遗传转化中辅助处理方法的改良[J];复旦学报(自然科学版);1999年05期
2 刁现民,陈振玲,段胜军,刘玉乐,赵连元,孙敬三;影响谷子愈伤组织基因枪转化的因素[J];华北农学报;1999年03期
3 陈梁鸿,王新望,张晓东,胡道芬,刘广田;基因枪转化小麦不同受体的研究[J];华北农学报;1998年01期
4 陈建南,傅鸿仪,秦环英,郭子彪,张磊;HSP_(70)反义RNA对高粱花粉的正常形成的影响[J];科学通报;1997年18期
5 米庆莉,何锶洁,曹守云,李良材,田文忠;籼稻及粳稻对基因枪转化反应的差异及提高转化率的研究[J];农业生物技术学报;1998年03期
6 林鸿生,华志华,卢德赵,高振宇,颜美仙,钱前,黄大年;水稻基因枪转化过程中选择标记基因的研究[J];上海农业学报;2001年03期
7 闻伟,杨胜利;反义RNA在基因调控中的作用[J];生物工程进展;1990年03期
8 李新征,郑成超,温孚江;农杆菌介导的玉米遗传转化研究进展[J];生物工程进展;2000年06期
9 徐军望,李旭刚,朱祯;基因工程改良淀粉品质[J];生物技术通报;2000年01期
10 梁辉,赵铁汉,李良材,欧阳俊闻,田文忠,贾旭;影响基因枪法转化小麦幼胚的几个因素的研究[J];遗传学报;1998年05期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 刘任重,Qing Liu,Allan Green;棉花油酸脱饱和酶基因ghFAD2-1倒位重复构建的遗传转化研究[J];山东农业科学;2001年06期
2 隋新霞,楚秀生,李根英,吴祥云,黄承彦;外源DNA导入技术及其在小麦育种中的应用[J];山东农业科学;2002年06期
3 王鹏;赵强;刘蕾;;植物源抗虫基因在作物育种中的应用[J];山东农业科学;2007年02期
4 魏国芹;戴洪义;孙玉刚;梁美霞;安淼;;榅桲离体培养繁殖的研究[J];山东农业科学;2010年01期
5 张晓东;李利斌;宋宜现;李化银;刘立峰;高玲;高建伟;;大白菜高效稳定遗传转化体系的建立[J];山东农业科学;2010年02期
6 刘媛媛;张春庆;吴承来;;LeJA2基因沉默表达载体导入番茄转化系统的建立[J];山东农业科学;2010年02期
7 陈俊男;高润红;邓志英;田纪春;;小麦成熟胚组织培养体系优化及优良转化受体基因型的筛选[J];山东农业科学;2010年11期
8 吴志平;植物转基因方法在桑树上的应用[J];安徽农学通报;2003年04期
9 陈素华;顾和平;陈新;张红梅;姜晓宁;张琤琤;;植物毒素及其在农业上的应用[J];安徽农学通报;2008年17期
10 高艳梅;翟金玲;徐远峰;黄惜;;抗PRSV转基因番木瓜研究进展[J];安徽农学通报(上半月刊);2009年03期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 黄月琴;薛建平;;植物抗病分子机制及抗病基因工程研究进展[A];现代农业理论与实践——安徽现代农业博士科技论坛论文集[C];2007年
2 张红梅;王国英;谭振波;;利用基因枪法将Bt基因导入早熟玉米优良自交系[A];21世纪作物科技与生产发展学术讨论会论文集[C];2002年
3 赵凌;王才林;朱镇;;花粉管介导的转bar基因水稻后代主要农艺性状的变异[A];2003年全国作物遗传育种学术研讨会论文集[C];2003年
4 刁现民;王永芳;李伟;王鹏;智慧;陈振玲;段胜军;;抗除草剂基因Bar转化谷子研究[A];2003年全国作物遗传育种学术研讨会论文集[C];2003年
5 张红伟;张红梅;郑祖平;陈刚;王国英;谭振波;;Bt转基因玉米的获得及其对玉米螟的抗性分析[A];2003年全国作物遗传育种学术研讨会论文集[C];2003年
6 李晚忱;杜娟;;外源超氧化物歧化酶基因(MnSOD)在玉米中的过量表达及其对提高抗逆性的作用[A];2003年全国作物遗传育种学术研讨会论文集[C];2003年
7 刘小红;张红伟;刘昕;刘欣洁;谭振波;荣廷昭;;MDMV CP基因的克隆及其转基因玉米的研究[A];2004全国玉米种质扩增、改良、创新与分子育种学术会议论文集[C];2004年
8 尹钧;任江萍;李志岗;李磊;周苏玫;卫丽;宋丽;;转基因抗穗发芽小麦的获得[A];中国作物学会2007年全国作物遗传育种学术研讨会论文集[C];2007年
9 吴洁;周宇;张雪梅;阎文昭;;幽门螺杆菌热休克蛋白基因HspB-C对甘薯遗传转化的研究[A];中国核科学技术进展报告——中国核学会2009年学术年会论文集(第一卷·第8册)[C];2009年
10 田时炳;刘富中;王永清;肖蕴华;皮伟;刘君绍;罗章勇;陈义康;;茄子育种研究主要进展[A];中国园艺学会第四届青年学术讨论会论文集[C];2000年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 孙国清;不同抗虫棉品种杀虫蛋白表达研究及影响抗虫性分析[D];新疆农业大学;2010年
2 刘爱玲;水稻OsHsfAs和OsCH2基因的功能研究[D];湖南农业大学;2010年
3 冯守千;红梨着色机理的研究[D];山东农业大学;2011年
4 马进;水稻条纹病毒(RSV)RNA3、RNA4的克隆与抗RSV转基因水稻的培育[D];山东农业大学;2011年
5 郝金凤;无载体无选择标记转基因耐贮藏甜瓜的培育[D];内蒙古大学;2010年
6 宋福南;白桦木质素合成苯丙氨酸途径相关酶基因的表达和功能分析[D];东北林业大学;2009年
7 杜振国;三种水稻病毒基因沉默抑制子的鉴定和研究[D];福建农林大学;2011年
8 何文锦;灰木相思无菌培养体系的建立与寒胁迫蛋白质组学的研究[D];福建农林大学;2007年
9 王钱洁;AP2/ERF转录因子与水稻产量相关基因LRK6等位基因的表达差异[D];复旦大学;2011年
10 李娟;安吉白茶高氨基酸性状相关基因的全长cDNA克隆及功能的初步研究[D];湖南农业大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 张庆福;枳精氨酸脱羧酶基因(PtADC)转化烟草提高抗脱水研究[D];华中农业大学;2010年
2 魏礼玲;MYB转录因子家族相关EST干涉载体构建及遗传转化的研究[D];华中农业大学;2010年
3 卢小三;两个杨树无性系再生体系的建立及抗虫基因Cry1C+9C转化的初步研究[D];华中农业大学;2010年
4 张鲁军;离子束诱导普通小麦小偃81 HMW-GS 1Ax1缺失突变家系突变机制研究[D];郑州大学;2010年
5 刘无双;拟南芥种子特异表达基因启动子分析[D];山东农业大学;2010年
6 王长宪;利用基因工程创造香樟抗寒树种新种质技术研究[D];山东农业大学;2009年
7 于军伟;苹果α-法尼烯合成酶基因转化番茄研究[D];山东农业大学;2010年
8 王京梅;叶籽银杏叶生雌性生殖器官发育相关基因的克隆与序列分析[D];山东农业大学;2010年
9 闻小霞;甜瓜果实蔗糖合成酶基因(SS)的克隆、表达分析及遗传转化[D];山东农业大学;2010年
10 郭梁;甜樱桃实生后代品质性状的遗传变异及远缘杂种根癌病抗性鉴定[D];山东农业大学;2010年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 李兴祥,周燚;湖北省魔芋产业现状及发展对策[J];湖北农业科学;2005年02期
2 黄俊斌,邱仁胜,赵纯森,向发楚,黄维涨,杨东;魔芋软腐病病原菌的鉴定及生物学特性初步研究[J];华中农业大学学报;1999年05期
3 柳俊,谢从华,余展深,刘勇;魔芋(Amor phophallus)离体繁殖研究[J];华中农业大学学报;2001年03期
4 胡建斌,柳俊,严华兵,谢从华;魔芋不同类型愈伤组织及分化能力研究[J];华中农业大学学报;2004年06期
5 李贞霞,张兴国;基因枪法介导的魔芋遗传转化研究[J];华中农业大学学报;2004年06期
6 朱晨光,孙明,喻子牛;带cry3 Aa启动子的aiiA基因在苏云金芽胞杆菌中的表达[J];生物工程学报;2003年04期
7 周燚,孙明,喻子牛;苏云金芽胞杆菌AiiA蛋白对魔芋软腐病菌的抗病活性[J];武汉大学学报(理学版);2004年06期
8 谢栋,彭憬,王津红,胡剑,王岳五;枯草芽孢杆菌抗菌蛋白X98Ⅲ的纯化与性质[J];微生物学报;1998年01期
9 何红,邱思鑫,蔡学清,关雄,胡方平;辣椒内生细菌BS-1和BS-2在植物体内的定殖及鉴定[J];微生物学报;2004年01期
10 周玥,刘小锦,朱晨光,孙明,喻子牛;细菌中群体感应调节系统[J];微生物学报;2004年01期
【二级引证文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 张鑫;;魔芋软腐病防治综述[J];现代农业科技;2011年08期
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 韩冬梅;枯草芽胞杆菌BSn5中新型抑菌蛋白APn5的鉴定及性质研究[D];华中农业大学;2008年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 刘庆法,唐克轩,叶建明,郝峥嵘,何艺园,沈大棱;农杆菌介导的小麦遗传转化条件的研究[J];复旦学报(自然科学版);1998年04期
2 刘志学,张旭,徐亚南,何艺园,马向前,沈大棱,唐克轩;用LBA4404/pCAMBIA系列转化水稻的最佳条件[J];复旦学报(自然科学版);1999年04期
3 李宝健,欧阳学智,许耀;应用农杆菌Ti质粒系统将外源基因转入籼稻细胞研究[J];中国科学(B辑 化学 生命科学 地学);1990年02期
4 王国英,杜天兵,张宏,谢友菊,戴景瑞,米景九,李太源,田颖川,乔利亚,莽克强;用基因枪将Bt毒蛋白基因转入玉米及转基因植株再生[J];中国科学(B辑 化学 生命科学 地学);1995年01期
5 朱祯,刘翔;转基因作物—恶魔还是救星[J];农业生物技术学报;2000年01期
6 赵天永,黄忠,王国英,谢友菊;影响玉米基因枪转化效率的几个因素[J];农业生物技术学报;1997年01期
7 王国英,张宏,丁群星,戴景瑞,谢友菊;几种玉米基因转移技术的研究及转基因植株的获得[J];生物工程学报;1996年01期
8 钱迎倩,马克平;经遗传修饰生物体的研究进展及其释放后对环境的影响[J];生态学报;1998年01期
9 范云六,张春义;迎接21世纪农作物生物技术的挑战[J];生物技术通报;1999年05期
10 钱迎倩;转基因作物的利弊分析[J];生物技术通报;1999年05期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 张平真;魔芋[J];中国食品;1999年05期
2 黄代金,宋发菊;玉米地套种魔芋技术[J];农村百事通;2001年12期
3 白木;魔芋的保健功能[J];特种经济动植物;2003年07期
4 江余昌;“德宏红魔芋”——良种引种示范见成效[J];农村实用技术;2003年12期
5 ;魔芋栽培 技术要点[J];农村实用技术;2004年04期
6 徐正武;魔芋高产高效益立体栽培[J];云南农业科技;2000年06期
7 邹久安;冻魔芋的家庭制作方法[J];四川农业科技;2002年08期
8 夏家超;魔芋的采挖与贮藏[J];特种经济动植物;2003年11期
9 巩振辉,吕元红;魔芋高产栽培技术[J];西北园艺;2004年03期
10 杨象芬;魔芋的特性及食用魔芋的制法[J];粮食与饲料工业;1986年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 牛夏;赵世伟;刘东燕;;巨魔芋在植物园的引种历史和人工栽培技术[A];中国植物园(第十四期)[C];2011年
2 费甫华;李松;张化平;尹宏喜;李爱琴;;中国魔芋病害综合防治技术研究新进展[A];湖北省植物病理学会2002年学术年会论文集[C];2002年
3 谢笔钧;李斌;;我国魔芋产业存在的问题及对策[A];现代科技与湖北新型工业化——第二届湖北科技论坛优秀论文集[C];2003年
4 谢笔钧;李斌;;我国魔芋产业存在的问题及对策[A];实施科技兴农战略促进农村经济发展学术交流论文集[C];2004年
5 张兴国;杨正安;李贞霞;苏成刚;刘佩瑛;;农杆菌介导的魔芋转化体系建立[A];中国园艺学会第九届学术年会论文集[C];2001年
6 杜宝玲;宋天保;张晓田;李小明;;Caspase-3反义基因阻抑辐照诱导的HL-60细胞凋亡[A];解剖学杂志——中国解剖学会2002年年会文摘汇编[C];2002年
7 赵兴喜;崔鸣;;秦巴山区优质魔芋安全生产技术探讨[A];第十九届全国植保信息交流暨农药械交易会论文集[C];2003年
8 李兆忠;张玲;王芸;毛海婷;李晓冰;;c-myc反义基因对人高转移肺癌细胞增殖和粘附活性的抑制作用[A];山东免疫学会、山东微生物学会医学微生物学专业委员会、山东省医学会微生物学和免疫学专业委员会、山东省医药生物技术学会2001年学术年会论文汇编[C];2001年
9 吕联煌;;反义基因药物治疗血液肿瘤研究进展[A];第六届全国中西医结合血液病学术会议论文汇编[C];2002年
10 方琦;张仲凯;丁铭;张丽珍;彭潞波;李婷婷;;云南魔芋病毒病的形态学及细胞病理学的电子显微镜观察[A];第三次全国植物病毒和病毒防治学术研讨会论文集[C];2003年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 龚太凤;魔芋春播要略[N];湖北科技报;2004年
2 余卫东;魔芋的贮藏与加工[N];中华合作时报;2002年
3 周和毅;魔芋业打起科研战[N];中国绿色时报;2000年
4 王华耀 黄允健;建宁:山垅田种植魔芋促增收[N];三明日报;2009年
5 记者张琪 实习生苏晓明;湖北长阳打造中国魔芋之乡[N];中国食品报;2010年
6 建始县农业局 向大铭;魔芋贮藏两法[N];湖北科技报;2002年
7 何益群;冬季如何保存魔芋种[N];湖北科技报;2003年
8 南郑县植保站 郑克明;魔芋巧贮藏[N];陕西科技报;2002年
9 武深秋;制作冻魔芋技术[N];陕西科技报;2004年
10 记者 葛大中 通讯员 黄怡 龙克慈;沙地魔芋获丰收[N];恩施日报;2008年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 龚加顺;魔芋多糖在茶饮料中的稳定作用机理研究[D];西南农业大学;2001年
2 杨怀义;草莓果实膜联蛋白基因的cDNA克隆及其遗传转化的研究[D];沈阳农业大学;1999年
3 朱海生;草莓乙烯受体反义基因遗传转化的研究[D];福建农林大学;2008年
4 杨孟华;Tankyrase维持胃癌细胞端粒长度及其机制的研究[D];第三军医大学;2005年
5 曾勇;纳米技术在防治球囊损伤后再狭窄中应用的实验研究[D];中国协和医科大学;2001年
6 熊文化;PIN1反义基因对人骨肉瘤的抑制作用[D];华中科技大学;2005年
7 王建华;类风湿性关节炎的反义VEGF基因治疗实验研究[D];第二军医大学;2001年
8 李拥军;反义单核细胞趋化蛋白1基因抑制移植静脉内膜增生的实验研究[D];中国协和医科大学;2000年
9 马丹;反义环氧合酶-2基因对人胃癌细胞株SGC-7901侵袭力的影响[D];第三军医大学;2007年
10 米曰堂;转反义B7-1基因治疗延长大鼠肝移植物存活时间的研究[D];山东大学;2008年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 李贞霞;AGP小亚基反义基因导入魔芋研究[D];西南农业大学;2002年
2 郑连姬;魔芋无硫干燥技术的研究[D];西南农业大学;2004年
3 李筱叶;基于AGPS/GSM/GPRS的综合导航定位系统服务器端架构设计与实现[D];北京邮电大学;2010年
4 牛义;硼素营养对魔芋生长发育、品质、产量影响的研究[D];西南农业大学;2004年
5 王虎;魔芋有效成分分析及KGM稀溶液性质的研究[D];安徽大学;2003年
6 黄训端;(60)~Coγ射线辐照魔芋催芽球茎的诱变效应及其对种质改良的影响[D];安徽农业大学;2002年
7 吴倩倩;基于AGPS的无线混合定位系统的开发与研究[D];北京邮电大学;2011年
8 冯小俊;主要栽培因素对魔芋软腐病影响的初步研究[D];华中农业大学;2008年
9 吴金平;利用离体培养技术筛选魔芋软腐病抗源材料的研究[D];华中农业大学;2005年
10 赵岫;魔芋对2型糖尿病餐后血糖干预治疗的研究[D];大连医科大学;2008年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026