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《四川农业大学》 2011年
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表达两种不同血清型的鸭大肠杆菌融合株的构建及其免疫原性的研究

李晓艳  
【摘要】:随着我国养禽业的快速发展,禽大肠杆菌病的流行日益严重,给养禽业造成了很大的经济损失,也对消费者的健康构成较大的威胁,因此有效防治禽大肠杆菌病具有重要的公共卫生学意义。免疫预防在防治大肠杆菌病中具有重要意义,然而大肠杆菌血清型众多,而且不同地区有不同的优势血清群。所以制备多价苗具有扩大应用范围的意义,然而多价苗具有单位效价低的缺点,制备融合菌苗将能改善这一问题。本文通过构建可同时表达两种不同血清型的鸭源大肠杆菌融合菌株,并对该融合菌株进行生理生化特性,血清型鉴定,免疫学研究,选择适合的融合菌株制备双价苗。 亲本菌株的筛选采用血清型鉴定结合药敏纸片法:筛选血清型不同,而抗药性互补的两株鸭大肠杆菌。血清型鉴定结果显示供试的大肠杆菌血清型种类多,其中优势血清型为O78和O2;药敏试验结果显示四川省部分地区鸭大肠杆菌耐药情况已十分严重,其中耐药率高于90%的有青霉素G、链霉素、四环素、强力霉素、红霉素、麦迪霉素和复方新诺明共7种抗菌药,多重耐药情况也较严重;通过血清鉴定试验和药敏试验,筛选出了本研究的试验菌株为种鸭大肠杆菌ZYD5和ZYD8,再通过MIC测定,得到了ZYD5和ZYD8融合子的初筛标记为40μg/mL庆大霉素和30μg/mL盐酸环丙沙星。 融合菌株的构建采用细菌原生质体融合技术—溶菌酶去除细胞壁制备原生质体,PEG促融制备融合子,高渗选择性培养基再生融合子。融合子的筛选主要从血清表型、生理生化特性、生长特性、染色特性和遗传稳定性等方面进行考察。本研究通过预实验确定了原生质体制备的工作酶浓度为0.25 mg/ml,作用时间为15 min,融合子的阳性重组率为1.63%,最终获得了3株可同时表达两亲本血清型的融合子。试验表明融合菌株的染色形态呈现为典型的大肠杆菌形态,生化特性符合大肠杆菌的生化特性,耐药性间于两亲本之间,生长量略低于亲本株生长量,具有遗传稳定性。 用亲本菌株和融合株分别接种试验动物比较各菌株毒力大小,再制备蜂胶灭活苗,免疫雏鸭,比较各疫苗的免疫保护率和抗体水平,评价融合菌苗的免疫效果。通过试验测得ZYD5、ZYD8、R-ZYD109、R-ZYD113和R-ZYD267的LD50分别是1.0×106CFU/0.5mL、2.5×107 CFU/0.5mL、3.1×108 CFU/0.5mL、2.7×108 CFU/0.5mL和3.5×108CFU/0.5mL。融合株毒力测定结果显示融合菌株的毒力有所降低,除可用以制备灭活苗,还可以尝试研制弱毒苗。首免后ZYD二价苗、R-ZYD109苗、R-ZYD113苗和R-ZYD267苗试验组对ZYD5的攻毒保护率为50%~60%,二免后的攻毒保护率为60%~80%;上述四种苗首免后对ZYD8的攻毒保护率为40%~50%,二免后的攻毒保护率为60%~80%,说明各菌苗均有一定的免疫保护效果,而且两次免疫比一次免疫具有更高的保护率。在给雏鸭分别注射ZYD二价苗和含有O2和078两种血清型的融合株蜂胶灭活疫苗后第7d开始,针对ZYD8和ZYD5的抗体水平开始逐渐上升,14d时2次免疫组的抗体水平高于1次免疫组,1次免疫组和2次免疫组的抗体水平均于免疫后28 d左右达到最高水平,然后1次免疫组和2次免疫组的抗体水平均开始缓慢下降,到第56 d时1次免疫组和2次免疫组的抗体水平均高于同组免疫后第14d的抗体水平。抗体水平检测结果显示融合株菌苗和亲本二价苗二免雏鸭的抗体水平差异不显著(P0.05),证明融合菌苗可以替代亲本二价苗免疫保护雏鸭。 可同时表达两种不同血清型的鸭源大肠杆菌融合菌株的成功构建,有利于提高疫苗中单因子的单位抗原含量,简化了菌苗的生产过程,同时节省培养时间及原料,提高免疫效果和经济效益。本研究为研制含有多价保护性抗原的禽大肠杆菌病新型疫苗提供了一定的实验基础。
【学位授予单位】:四川农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:S852.61

【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 崔彬彬;朱维红;冯大领;;细胞融合技术研究进展[J];保定师范专科学校学报;2007年02期
2 陈光荣,肖克宇,翁波,钟蕾,邓时铭,何艳林;细胞融合技术及其在生物医药中的应用[J];动物医学进展;2004年01期
3 王春平;韦强;鲍国连;刘燕;邵泽香;季权安;;微生物原生质体融合技术研究进展[J];动物医学进展;2008年05期
4 谭文辉;李燕萍;许杨;;微生物原生质体制备及再生的影响因素[J];现代食品科技;2006年03期
5 包莹玲;潘力;;茂原链霉菌原生质体制备条件的优化[J];现代食品科技;2008年02期
6 刘秋,于基成,刘长建,王艳颖;产色链霉菌MY02原生质体制备条件的研究[J];湖北农业科学;2004年03期
7 吴孔兴,黄青云,丘家军;禽巴氏杆菌大肠杆菌融合二联弱毒菌株F_4的培育[J];华南农业大学学报;2002年01期
8 黄青云,陈金顶,任涛,罗贤忠,欧守杼;禽大肠杆菌耐药标记弱毒菌株O_2(Nor~r,Chl~s)和O_(78)(Chl~r,Nor~s)的培育[J];华南农业大学学报;1997年02期
9 任涛,黄青云,欧守杼;大肠杆菌O_2(Nor~r,Chl~s)、O_(78)(Chl~r,Nor~s)原生质体制备和再生的研究[J];华南农业大学学报;1998年01期
10 罗贤忠,黄青云,林泰松;禽大肠杆菌血清型O_2、O_(78)融合双价弱毒菌株免疫原性的研究[J];华南农业大学学报;1998年02期
中国硕士学位论文全文数据库 前2条
1 李淑娜;鸭疫里默氏杆菌、大肠杆菌二联多价蜂胶疫苗的研制及其免疫应答反应的动态研究[D];四川农业大学;2008年
2 王春平;鸭疫里默氏杆菌和大肠杆菌融合菌株的构建及其双重PCR检测方法的建立[D];山东农业大学;2009年
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 徐天惠;刘强;陈学民;陈泰;;担子菌《Basidiomyces》原生质体融合的研究 [1]金针茹(Flammulina velutipes)原生质体的制备与再生[J];安徽大学学报(自然科学版);1987年01期
2 仲松;张庆庆;孙平平;;紫外诱变原生质体选育高产L-乳酸菌株的研究[J];安徽工程大学学报;2011年01期
3 秦绪岭;李玉保;王桂英;路建彪;裴兰英;毕景银;;鸭疫里默氏杆菌与大肠杆菌混合感染病原的分离鉴定和药敏实验[J];安徽农学通报;2007年23期
4 张静;;原生质体融合技术及其在微生物育种中的应用[J];安徽农学通报;2008年17期
5 竺利红;许豪;;原生质体融合技术及其在嗜酸乳杆菌菌种选育中的应用[J];安徽农学通报(上半月刊);2009年07期
6 柯毅;张涛;邹晶;熊佳;陈珊珊;;平菇高产纤维素酶抗降解物阻遏突变株的选育[J];安徽农学通报(上半月刊);2010年23期
7 李国喜;赵银丽;;中药金银花对人工感染鸡大肠杆菌病的疗效试验[J];安徽农业科学;2006年20期
8 朱河水;刘记强;杨国宇;仝千秋;张代;;原生质体融合技术的应用[J];安徽农业科学;2007年05期
9 李晓霞;曹平华;禹学礼;王占彬;;绵羊卵母细胞孤雌激活及其随后体外发育的初步研究[J];安徽农业科学;2007年06期
10 朱金凤;王汝都;;山西省鸡源大肠杆菌耐药性的监测[J];安徽农业科学;2007年25期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 欧阳凤菊;刘慧芳;司微;王春来;赫明雷;倪洪波;刘思国;;禽致病性大肠杆菌生物被膜的形成及其影响因素[A];第五次全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会论文汇编[C];2011年
2 农向群;吴正铠;;丝状真菌原生质体的分离再生和融合[A];《中国虫生真菌研究与应用》(第一卷)[C];1986年
3 吴正铠;;虫生真菌生物技术进展[A];《中国虫生真菌研究与应用》(第二卷)[C];1991年
4 农向群;张爱文;邓春生;刘维真;吴正铠;叶正楚;;油松毛虫粉状拟青霉8601原生质体的形成和再生[A];《中国虫生真菌研究与应用》(第二卷)[C];1991年
5 姜晓云;王家德;;纤维素酶及其在废木质纤维素制可还原糖中的应用[A];2009全国可再生能源—生物质能利用技术研讨会论文集[C];2009年
6 李锡香;;中国蔬菜种质资源的保护和研究利用现状与展望[A];全国蔬菜遗传育种学术讨论会论文集[C];2002年
7 王勇;陈源闽;梁艳荣;张艳萍;杜刚强;廉勇;;胡萝卜育种研究进展[A];全国蔬菜遗传育种学术讨论会论文集[C];2002年
8 姚星伟;孙德岭;刘凡;;植物非对称体细胞融合研究进展[A];中国园艺学会十字花科蔬菜分会第六届学术研讨会暨新品种展示会论文集[C];2008年
9 刘永翔;刘作易;;戴氏绿僵菌原生质体的形成及再生[A];生命科学与微生物专辑[C];2004年
10 孙凯;陈威;管小梅;熊伟;吴玲;谢荣庆;;细胞工程在环境治理中的应用[A];2007中国环境科学学会学术年会优秀论文集(下卷)[C];2007年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 张静;基于生化策略与组学技术的维生素C生产菌株间生理关系解析[D];江南大学;2010年
2 田壮;食品中甾体激素残留免疫分析技术与方法研究[D];江南大学;2010年
3 王品美;酵母甘油代谢工程与基因组重排构建乙醇高产菌株及相关机理研究[D];浙江大学;2010年
4 贺常亮;治疗鸡大肠杆菌病的中药方剂筛选及其作用机理研究[D];吉林大学;2011年
5 洪伟雄;甘蔗梢腐病病原菌—串珠镰刀菌分子生物学研究初探[D];福建农林大学;2011年
6 梁剑光;基于多尺度参数相关分析的阿维菌素发酵过程优化及工业规模放大研究[D];华东理工大学;2011年
7 斯木吉德;石灰氮对堆肥化过程中牛源致病性大肠杆菌抑制及对堆肥化效果影响[D];内蒙古农业大学;2011年
8 王璐;农杆菌介导转化及原生质体融合法选育红曲菌Monacolin K高产株[D];江南大学;2011年
9 陈敏;刺芹侧耳木质素降解酶的研究[D];浙江大学;2010年
10 桑稳姣;原生质体融合高效反硝化菌及其脱氮研究[D];华中科技大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 陈若雯;高产胞外多糖乳酸乳杆菌的选育及其发酵条件的优化[D];华中农业大学;2010年
2 郭俊红;利用原生质体融合及基因工程的方法对柑橘采后生防菌34-9遗传改良的初步研究[D];华中农业大学;2010年
3 谭雯雯;猪β-防御素2多克隆和单克隆抗体的制备及初步应用[D];华中农业大学;2010年
4 吴婕;多拉菌素产生菌的诱变育种及培养条件的优化[D];华中农业大学;2010年
5 谢宙;刺糖多孢菌对剪切力抗性的初步研究[D];华中农业大学;2010年
6 季爱云;聚β-羟基丁酸酯高产菌株的选育及发酵和提取工艺研究[D];山东科技大学;2010年
7 汪小艳;几株蛹草拟青霉原生质体制备及染色体核型研究[D];安徽农业大学;2010年
8 杨转琴;餐饮废水高效降解蛋白菌株的分离筛选及诱变选育研究[D];郑州大学;2010年
9 于清伟;大杯蕈优良菌株筛选与栽培技术研究[D];山东农业大学;2009年
10 徐谦;拟南芥原生质体诱导愈伤组织的研究[D];山东农业大学;2010年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 李蕤,马守能,刘群,吴克,刘斌,潘仁瑞;香菇菌丝原生质体制备及融合条件的研究[J];安徽大学学报(自然科学版);2001年03期
2 朱河水;刘记强;杨国宇;仝千秋;张代;;原生质体融合技术的应用[J];安徽农业科学;2007年05期
3 李平,张强,宛晓春,陶文沂,丁霄霖;黑曲霉原生质体形成与再生影响因子的研究[J];安徽农业大学学报;2003年03期
4 高晓虹,李光三,杜淼,冯燕玲,曹明丹,陆德裕,李素文;电脉冲介导金鱼囊胚细胞融合及其发育能力的研究[J];动物学报;1990年02期
5 刘振岳;泰立芳;;香菇与平菇的融合子后代性状分离研究[J];河北农业大学学报;1992年04期
6 黄金海,王英珍,丁伯良,肖西治,李秀丽,赵向华;间接ELISA检测禽霍乱抗体方法的建立[J];动物医学进展;2001年02期
7 丁伯良,鄢明华,王英珍,李秀丽,白朋勋,黄金海,赵相华,张健;天津地区鸡致病性大肠杆菌血清型分布及其优势血清型的外膜蛋白型研究[J];动物医学进展;2003年02期
8 陈光荣,肖克宇,翁波,钟蕾,邓时铭,何艳林;细胞融合技术及其在生物医药中的应用[J];动物医学进展;2004年01期
9 霍乃蕊,孟利梅;细胞融合技术的应用研究进展[J];动物医学进展;2005年03期
10 孙海虹,马同锁,于珊,赵宝华1;鸡大肠杆菌病多价灭活苗的研制[J];动物医学进展;2005年04期
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1 朱德康;程安春;汪铭书;;五种血清型的鸭疫里默氏杆菌外膜蛋白特性比较及其免疫原性的研究[A];中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第三届第七次学术研讨会论文集[C];2004年
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1 邵美丽;猪传染性胸膜肺炎重组亚单位疫苗的研究[D];东北农业大学;2006年
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1 段桂芳;稗草病原菌的生物学评价和利用研究[D];中国农业科学院;2002年
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5 李贺;H7亚型禽流感基因工程亚单位疫苗的研究[D];新疆农业大学;2006年
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1 许耀;;原生质体融合技术应用进展[J];生物学通报;1989年01期
2 ;生物工程学报第6卷(1990年)总目录[J];生物工程学报;1990年04期
3 张志光;张天晓;罗定军;;丝状真菌原生质体技术——(Ⅰ)黑曲霉原生质体灭活[J];湖南师范大学自然科学学报;1993年01期
4 陈五岭,张芳琳,景建洲,孙连魁;灭活原生质体融合技术选育苏云金杆菌新菌种——原生质体融合条件的研究[J];西北大学学报(自然科学版);1998年02期
5 彭帮柱,岳田利,袁亚宏,王丽威;酵母菌原生质体融合技术[J];西北农业学报;2004年01期
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7 竺利红;许豪;;原生质体融合技术及其在嗜酸乳杆菌菌种选育中的应用[J];安徽农学通报(上半月刊);2009年07期
8 Т.Н.Кожина ,梁志国;酵母原生质体在遗传工程上的应用[J];中国生物工程杂志;1982年01期
9 J.M.DeAraújo ,F.D.De A.Lyra ,W.Kurylowicz ,庄增辉;产抗生素链霉菌的原生质体融合重组[J];微生物学通报;1985年04期
10 楼纯菊;沈永强;焦瑞身;张明;符桂蓉;李智华;;酿酒酵母单倍体与双倍体原生质体的融合[J];菌物学报;1985年02期
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1 程龙飞;陈红梅;傅光华;施少华;万春和;黄瑜;;鸭大肠杆菌强毒株的血清型及生物学特性分析[A];第四届中国水禽发展大会会刊[C];2011年
2 孟照洁;杨灵芝;郝圣峰;李香云;董新荣;张兴晓;;O_(78)型鸭大肠杆菌的分离鉴定及防治[A];山东畜牧兽医学会禽病学专业委员会第一次学术研讨会论文集[C];2009年
3 朱昌雄;谢德龄;粟燕;倪楚芳;;利用原生质体融合技术选育农抗120高产菌株及应用的研究[A];全国生物防治学术讨论会论文集[C];1991年
4 于学辉;程安春;汪铭书;王英;王远微;汤承;;规模化鸭场鸭致病性大肠杆菌的血清型鉴定及其相关毒力基因分子流行病学调查[A];第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛论文集(下册)[C];2008年
5 罗红霞;黄彦芳;王芳;孙玉清;王建;;抗酸奶后酸化乳酸菌菌株选育研究进展[A];2009食品科技(北京)论坛会议指南[C];2009年
6 张兴国;陈劲枫;刘佩瑛;李向辉;孙勇如;李文彬;;黄瓜和南瓜原生质体融合得到愈伤组织[A];中国细胞生物学学会第五次会议论文摘要汇编[C];1992年
7 余志晟;张洪勋;庄绪亮;;运用原生质体融合技术构建内醚糖乙醇发酵菌株的初步研究[A];微生物生态学研究进展——第五届微生物生态学术研讨会论文集[C];2003年
8 罗玲;艾地云;杨峻;王红琳;温国元;罗青平;张蓉蓉;邵华斌;;鸭大肠杆菌病病原的分离鉴定及药敏试验[A];第三届中国水禽发展大会会刊[C];2009年
9 金红;贾敬芬;郝建国;;沙打旺与首蓿原生质体融合再生属间体细胞杂种[A];中国细胞生物学学会第八届会员代表大会暨学术大会论文摘要集[C];2003年
10 夏光敏;陈惠民;;簇毛麦原生质体培养及融合[A];中国细胞生物学学会第五次会议论文摘要汇编[C];1992年
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1 张碧霞;如何防治鸭大肠杆菌败血症[N];西藏日报;2002年
2 河间市畜牧水产局 付金香;鸭大肠杆菌与传染性浆膜炎混合感染的诊治[N];河北科技报;2007年
3 杨肯牧;警惕鸭大肠杆菌败血症[N];湖南科技报;2006年
4 扬州大学畜牧兽医学院 王永坤 田慧芳;四种鸭脑炎病的区别诊治[N];江苏农业科技报;2006年
5 陈素华 刘占洪;广泛应用于农业的生物技术[N];山东科技报;2002年
6 丁湖广;珍菇松茸的特性及人工驯化栽培技术[N];福建科技报;2006年
7 李大刚;鸭传染性浆膜炎的防治[N];中国畜牧报;2003年
8 扬州大学畜牧兽医学院病原微生物研究室 王永坤教授;畜禽疫病最新流行特点及对策[N];中国畜牧水产报;2001年
9 记者 西林;生物医药欲为京城经济新支点[N];中国企业报;2001年
10 温鲁;食用菌生产技术进展[N];中国绿色时报;2002年
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1 蔡兴奎;原生质体融合创造抗青枯病的马铃薯新种质及其遗传分析[D];华中农业大学;2004年
2 江年琼;三白草和鱼腥草原生质体融合的研究[D];中南林学院;2002年
3 严成其;体细胞杂交创建表达高抗白叶枯病基因的水稻新种质[D];浙江大学;2005年
4 谢志鹏;发酵法生产米多霉素的菌种选育、培养条件优化和动力学研究[D];浙江大学;2005年
5 廖劲松;原生质体融合提高玫瑰茄细胞生长速率的研究[D];华南理工大学;2004年
6 田小群;红发夫酵母(Phaffia rhodozyma)的诱变和原生质体融合及发酵优化研究[D];华南理工大学;2003年
7 袁玉兰;富铁酵母工程菌的构建及细胞中铁的生物转化、分布和结合状态的研究[D];四川大学;2004年
8 王璐;农杆菌介导转化及原生质体融合法选育红曲菌Monacolin K高产株[D];江南大学;2011年
9 刘焕民;L-缬氨酸高产菌株的选育及其特性的初步研究[D];江南大学;2011年
10 龙淼;耐酸性反刍兽月形单胞菌构建及对瘤胃微生物发酵的影响[D];吉林大学;2009年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 李晓艳;表达两种不同血清型的鸭大肠杆菌融合株的构建及其免疫原性的研究[D];四川农业大学;2011年
2 张莉滟;双歧杆菌与乳杆菌原生质体融合的初步研究[D];重庆医科大学;2002年
3 黎永学;双歧杆菌和酿酒酵母原生质体融合的研究[D];重庆医科大学;2002年
4 赵炜;利用原生质体技术选育聚β羟基丁酸高产菌株和发酵条件的研究[D];西北大学;2004年
5 蔡良水;鸭疫里氏杆菌双耐药融合菌株的构建[D];华中农业大学;2008年
6 丛国正;原生质体融合技术构建禽霍乱双型链依型菌株[D];甘肃农业大学;2001年
7 牛艳芳;蒙古口蘑与双孢蘑菇原生质体融合育种研究[D];内蒙古师范大学;2004年
8 李建洲;产碱性果胶酶菌株的原生质体融合育种[D];江南大学;2005年
9 刘娟;高产谷胱甘肽优良酵母菌种的选育及发酵条件研究[D];北京化工大学;2003年
10 张慧;缬氨酸生产菌的原生质体融合育种及发酵条件研究[D];天津科技大学;2005年
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