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《四川农业大学》 2017年
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甜樱桃UVR8基因的克隆及分子特性分析

杨涛  
【摘要】:UVR8(UV Resistance Locus 8)是目前唯一被发现,能感受环境中紫外B光(UV-B)的特异光受体,植物通过其接受UV-B信号,调控其生长发育进程。目前对UVR8基因的研究主要集中在以拟南芥为主的少数模式植物上,对于高等植物的研究开展时间较短,特别是在甜樱桃上。光照可以调控甜樱桃等不同植物中花青素的合成与分布,但对于甜樱桃UVR8感受UV-B光后,诱导果实转色还未见报道。本研究以甜樱桃'红灯'果实为试验材料,利用RT--PCR技术,克隆得到一个甜樱桃UV-B光受体基因PacUVR8,并从生物信息学、表达特异性、亚细胞定位、转拟南芥等几个方面对该基因进行分析及鉴定。主要的研究结果如下:1.用同源克隆的方式获得甜樱桃UV-B光受体基因cDNA全长序列。该基因包含长1 329bp的完整开放阅读框,该阅读框编码了 442个氨基酸,相对分子质量为47.80 kD,将该基因命名为PacUVR8并登录Genebank,接收号为KX671127。氨基酸保守域分析表明,PacUVR8基因编码的蛋白包含7个RCC1结构域,该氨基酸序列与其他植物序列相似性在78%~98%之间。2.利用荧光定量PCR分析三种不同颜色的樱桃品种UVR8基因在果实生产发育时期的表达情况。'红灯'随着果实成熟,果皮颜色加深,UVR8表达量逐渐上升;'佐藤锦'在成熟时期基因表达量表现为先增长后降低,在转色期(花后20d)表达量最高。表明了甜樱桃果皮颜色变化与PacUVR8表达有密切的关系。同时本研究还分析了甜樱桃的不同组织和器官中的表达情况,其中,幼茎和果实表达量最高,表明甜樱桃的幼茎和果实很可能是感受UV-B的主要器官。3.PacUVR8在洋葱表皮细胞中定位结果初步认为:PacUVR8是定位在细胞质中。4.甜樱桃UVR8基因转拟南芥:将得到的甜樱桃UV-B光受体基因PacUVR8与植物表达载体(1300-35S)相连,构建出过表达载体,并将该载体转入野生型拟南芥中,鉴定出了三个转基因株系。本研究主要克隆甜樱桃UV-B光受体基因PacUVR8,为认识其在甜樱桃果实着色中的作用奠定了基础,为甜樱桃UVR8光受体应答UV-B光的分子机理提供了一定的理论依据。
【学位授予单位】:四川农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2017
【分类号】:Q943.2;S662.5

【参考文献】
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