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《四川农业大学》 2002年
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白菜抗虫转基因研究

张军杰  
【摘要】: 以具有广谱抗性的马铃薯胰蛋白酶抑制剂基因(PinⅡ)为目的基因,利用限制性内切酶,去除质粒载体p~(BBBS-pinⅡ)中PinⅡ基因的内含子部分,并转入农杆菌株C58用于植物转化。同时将具有高度专—抗性的蜘蛛杀虫蛋白(SIP)基因插入带有GUS、bar基因的p~(SHK)植物表达载体中,经限制性酶切,证明载体构建正确。 以13种结球白菜的带柄子叶为外植体,在含BA 2mg/L、NAA 1mg/L、AgNO_3、3mg/L的MS培养基上筛选出再生率较高的北京80号、小杂66等三种基因型。然后以这三种基因型为转化材料,利用胭脂碱型根癌农杆菌C58(Ti质粒含有bar、PinⅡ基因)感染带柄子叶外植体,获得5个转基因植株。经PCR、PCR-Southern杂交以及植物基因组Southern杂交证实目的基因已经整合入植物基因组中。在进行基因转化的同时,确定了适合“北京80号”的Basta初始筛选浓度为4mg/L,提出了以抗性株真叶再生为基础消除抗性株嵌合体的方法。最后进行了转化株的抗虫性鉴定,主要表现为抑虫效应。 通过真空渗入法转化小白菜,从四批筛选的T_0代种子中获得41株抗Basta植株。经氯酚红法、PCR、PCR-Southern以及植物基因组Southern杂交证实目的基因已整合到小白菜基因组中去。通过比较材料处理时开花与否的转化率,知道材料是否开花对转化率基本没有影响,但是结实部位下部要比上部高0.110‰,是上部转化率的三倍,结果提示,材料处理时的花蕾是农杆菌转化的主要受体。
【学位授予单位】:四川农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2002
【分类号】:S634

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