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《四川农业大学》 2003年
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牛有腔卵泡卵母细胞体外成熟和体外受精的研究

肖正中  
【摘要】: 本试验从屠宰场收集了48头黄牛、34头水牛和8头黑白花奶牛的卵巢共180个,共回收卵母细胞1050枚,其中获得可用卵母细胞973枚。水牛平均每个卵巢可收集3.22枚可用卵母细胞,只相当于黄牛和黑白花牛(分别为6.72和6.81)的一半;从水牛卵巢收集的可用于IVM的卵母细胞的比率(87.50%)也极显著(P<0.01)低于黄牛或黑白花牛(分别为94.59%和96.69%)。结果表明,水牛卵巢有腔卵泡少,卵母细胞产量少、质量差。 本研究比较了三种采集黄牛卵泡卵母细胞的方法。用抽吸加切割法平均从每个卵巢回收的卵母细胞数(8.39枚)和可用卵数(7.71枚)都极显著(P<0.01)高于抽吸法(分别为6.31和6.19枚)和切割法(分别为6.97和6.44枚),用切割法从单个卵巢回收的卵母细胞显著(P<0.05)高于抽吸法,而回收的可用卵数与抽吸法之间差异不显著(P>0.05)。结果显示,用切割法采集的裸卵比抽吸法多,抽吸加切割法是一种能够采集较多可用卵母细胞的好方法,但是该法手续繁杂,适于一次只能收集少量卵巢时使用。 在牛卵母细胞成熟培养液中不添加17β-E_2的情况下,分别添加0.3%PVP和10%FBS,黄牛卵母细胞的体外成熟率分别为60.69%和63.46%,受精率分别为51.93%和53.95%,二者无显著差异(P>0.05);在成熟培养液中添加17β-E_2的情况下,分别添加0.3%PVP和10%FBS,黄牛卵母细胞的体外成熟率分别为77.71%和80.48%,受精率分别为64.47%和67.68%,二者也无显著差异(P>0.05)。结果表明,在成熟培养液中用0.3%PVP代替10%FBS是可行的。在对水牛的试验结果也得出同样结论。另外,在黄牛(或水牛)卵母细胞成熟培养液中添加17β-E_2时,卵母细胞的体外成熟率和受精率都显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)的高于不添加17β-E_2组,试验结果表明,17β-E_2对牛卵母细胞的成熟和受精是必要的。同时,本试验对现行的黄牛体外受精程序应用于水牛体外受精的可行性进行了探讨,结果显示,虽然水牛卵母细胞在体外培养可成熟和受精,但是在同一处理下,水牛卵母细胞的成熟率和受精率都显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)低于黄牛,这表明,利用现行的黄牛体外受精程序进行水牛的体外受精是有效、可行的,但可能所用的受精液或受精过程的某些步骤不太适合水牛卵母细胞,还需进一步改进,今后水牛卵母细胞体外受精研究的重点应放在提高体外成熟的培养效果上,以提高水牛体外受精的整体效率。 本试验通过用两种不同的方法处理受精前的牛冷冻精液来研究其对卵母细胞体 外受精率的影响。本试验用上游法和Percoll法处理牛冷冻精液后,黑白花牛卵母细 胞的体外受精率分别为61.75%和59.76%,二者无显著差异(P0.05),在黄牛和水牛 的研究结果中也得出同样结论。结果表明,上游法和Percoll法是两种常用的精子处 理技术,但Pereoll法更简便、快速,如果方法应用得当,Percofl法是首选方法。
【学位授予单位】:四川农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2003
【分类号】:S823

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