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《四川农业大学》 2004年
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高效苜蓿根瘤菌株的筛选

钟文文  
【摘要】:本实验旨在利用celB基因标记技术从土著根瘤菌中筛选出与苜蓿品种相匹配的有效性高、竞争性强的高效苜蓿根瘤菌株。盛世是四川省正在推广种植的苜蓿品种,但目前还没有相匹配的优质根瘤菌剂,筛选与之匹配的高效根瘤菌株用于人工接种,对于苜蓿的高产和优质栽培具有重要意义。 从四川雅安、重庆北碚、万州采集野生苜蓿根瘤,利用平板划线法分离纯化,经菌落形态特征鉴定、革兰氏染色镜检和回接试验获得了93株纯菌株,通过与苜蓿品种—盛世(S)在无氮水培液中进行结瘤试验和有效性分析,并结合菌株的地理来源,初筛出了与对照相比有效性较高的4株苜蓿根瘤菌,分别为Y6-1-1、BB_1-8-1-1、BB_2-2-1-1、WZ-6-2-2。然后利用celB基因标记技术对筛选出的菌株进行竞争性研究。 在基因标记的方法中,抗链霉素是重要的突变筛选标记,供试出发菌株抗链霉素浓度不得高于250μg/ml,因此需要对所选出的菌株进行链霉素抗性测定,选出敏感型菌株进行基因标记。通过链霉素抗性测定,发现筛选出的4株苜蓿根瘤菌Y6-1-1、BB_1-8-1-1、BB_2-2-1-1、WZ-6-2-2对链霉素的耐受浓度都低于100μg/ml。 通过供体大肠杆菌HAMBI2356与根瘤菌接合的方法对以上四个菌株进行基因标记,成功地将celB基因导入了这四个菌株中;然后对标记基因可能会对标记菌株产生的影响进行了一系列试验和检测,包括通过测定代时和传代次数来检测标记基因在标记菌株内的稳定性以及标记基因对标记菌株生长的影响;通过水培试验来检测标记基因对标记菌株竞争结瘤能力和共生固氮有效性的影响。本试验证明了标记基因在标记菌株内能稳定传代,而且对标记菌株的生长、竞争结瘤能力以及固氮有效性都没有产生显著影响,因此celB基因标记技术可以作为一种简便、直观而又有效的检测手段用于追踪根瘤菌株在土壤中的竞争性。 进一步通过土壤盆栽试验和田间试验,比较了标记菌株与土著菌的竞争结瘤能力和固氮有效性,结果表明有三个菌株与对照相比在占瘤率、瘤重、总瘤数上差异显著,占瘤率都在72%以上,显著提高了植株的干重、叶绿素含量、全氮量和产量。 本试验最后筛选出三个高效菌株分别为Y6-1-1、BB_2-2-1-1、WZ-6-2-2,其中WZ-6-2-2的有效性最高、竞争性最强,可以用于苜蓿盛世品种的接种。
【学位授予单位】:四川农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:S182

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【引证文献】
中国期刊全文数据库 前2条
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【参考文献】
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【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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【二级引证文献】
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3 张淑卿;苜蓿内生根瘤菌数量分布及其运移动态研究[D];甘肃农业大学;2009年
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6 张燕慧;紫花苜蓿(Medicago sativa)新型种衣剂的研制[D];兰州大学;2007年
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