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山杜英组织培养技术体系建立及根诱导分化机理研究

辜云杰  
【摘要】:本研究首次以山杜英(Elaeocarpus sylvestris(Lour.)Poir.)的茎段为外植体进行组织培养技术体系的建立及根诱导分化机理研究。通过正交实验设计并结合方差分析和多重比较,探讨了山杜英离体培养的最佳培养基配方及培养程序,并在此基础上着重研究了根分化过程中内源吲哚乙酸(IAA)、脱落酸(ABA)的变化及过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)活性变化。其试验结果表明: (1)启动培养中以MS+BA1.0~2.0 mg·L~(-1)+NAA0.05 mg·L~(-1)+蔗糖3%为较适宜培养基配方组合。其出芽率(SFF)和出芽指数(SFI)分别为78.59%~78.94%和2.11~2.57。 (2)继代培养中,丛生苗增殖途径有两种方式:愈伤组织发生型(C型)和腋芽发生型(A型)。C型丛生苗增殖培养适宜培养基配方为:MS+BA1.0 mg·L~(-1)+NAA0.5 mg·L~(-1)+蔗糖3%,月增殖倍数达5.6(A型占2.7,C型占3.9),有效苗数6.2(A型占3.3,C型占2.9);A型丛生苗增殖培养适宜培养基配方为:MS+BA2.0 mg·L~(-1)+IBA0.1 mg·L~(-1)+蔗糖3%,月增殖倍数达7.3(A型占4.1,C型占3.2),有效苗数6.7(A型占4.2,C型占2.5)。 (3)有效苗诱导培养中以MS+BA0.5 mg·L~(-1)+IBA0.1 mg·L~(-1)+GA1.0 mg·L~(-1);+蔗糖3%为较适宜培养基配方组合。月有效苗数5.8,苗高3.8 cm。 (4)生根培养中以1/2MS+IBA3.0 mg·L~(-1)+蔗糖2%+AC1.0g L~(-1)为较适宜培养基配方组合,其生根率为89%。在此基础上比较了不同封口材料对生根的影响。结果表明:用聚氟乙烯比用聚乙烯菌膜封口生根率明显提高,生根时间明显提前。 (5)在对根诱导过程中POD和PPO活性变化研究发现:使用IBA和NAA后,对生根有显著影响,过氧化物酶活性在0~4 d迅速下降,然后逐步上升,在根开始伸长时,活性又开始下降;不使用任何生长素情况下,没有生根,过氧化物酶活性在0~16 d上升,然后开始下降。多酚氧化酶活性在整个根诱导中都维持在较低水平。 (6)在对根诱导过程中内源IAA和ABA含量变化研究发现:处理1中,内源IAA含量在开始出现根点之前一直上升,开始出现根点后含量开始下降,呈单峰曲线;处理2内源LAA含量变化相类似;不使用任何外源生长素情况下,内源IAA含量一直维持在较低水平。内源ABA含量在处理1和处理2出现根点之前一直上升,根开始伸长后含量开始下降。在处理1和处理2中出现愈伤组织是IAA/ABA比值在2.2~3.5之间,而在对照中IAA/ABA比值始终都维持在1.2以下。


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