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《四川农业大学》 2004年
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多重PCR检测沙门氏菌、大肠杆菌对磺胺类、氯霉素类药物耐药基因的研究

羊云飞  
【摘要】:本研究测定了从规模化猪、鸡场分离的33株沙门氏菌和103株致病性大肠杆菌对磺胺类药物(磺胺嘧啶、磺胺甲基异噁唑)及氯霉素类抗生素(氯霉素、甲砜霉素、氟甲砜霉素)的最低抑菌浓度(MIC),参照美国临床实验室标准委员会(NCCLS)(1999)的标准,判定其耐药性。结果表明,33株沙门氏菌对磺胺嘧啶、磺胺甲基异噁唑、氯霉素、甲砜霉素、氟甲砜霉素抗菌剂的耐药率分别为57.6%、48.5%、66.7%,63.6%,33.3%;103株大肠杆菌的耐药率分别为54.39%、51.45%、54.3%,51.5%,14.6%。 本研究根据国内外在GenBank中注册的大肠杆菌、沙门氏菌对磺胺药的耐药基因Sul1、Sul2、Sul3及对氯霉素类药的主要耐药基因Gat1、GmlA、Flor进行比对分析,设计出检测磺胺药耐药基因的二重PCR的两对引物(Sul1、Sul2的简并引物和Sul3的引物),以及检测氯霉素药耐药基因的三重PCR的三对引物(Cat1、CmlA和Flor引物)。通过试验条件的筛选和优化,建立了检测猪、鸡源沙门氏菌和大肠杆菌耐磺胺类药物基因的二重PCR方法和氯霉素类抗生素耐药基因的三重PCR方法。通过对33株沙门氏菌和103株大肠杆菌的磺胺药耐药基因及氯霉素类耐药基因进行检测,结果表明,这两套多重PCR技术与常规PCR技术的符合率达98.5%以上;与药敏试验的符合率达73.3%~100%,具有很高特异性。 通过灵敏性试验,该多重PCR技术能检测的细菌最低浓度为10~6CFU/ml。整个试验过程的时间只用7个小时,检测速度比常规PCR有很大提高。这两套多重PCR可用于沙门氏菌、大肠杆菌对磺胺类、氯霉素类药物耐药性的快速检测及耐药性的分子流行病学监测,具有重要的学术意义和应用价值。 本研究对沙门氏菌重庆分离株CQCS0304-2株的Sul1、Cat1基因PCR产物、大肠杆菌双流分离株SLPE 1-1株Sul3基因PCR产物、沙门氏菌双流分离株PJPS 6株的CmlA基因PCR产物和沙门氏菌重庆分离株CQCS0304-4株的Flor基因PCR产物进行了序列测定,将测序结果分别与GenBank中相应序列进行比对分析,基因序列同源率达98.4%以上,并将测序的序列在GenBank中注册,序列号分别为:AY617069、AY617066、AY617070、AY617067和AY617068。
【学位授予单位】:四川农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:S852.61

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【引证文献】
中国期刊全文数据库 前1条
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中国重要会议论文全文数据库 前1条
1 周万蓉;王红宁;张安云;吴琦;黄勇;柳萍;田浪;杨鑫;刘立;夏青青;;猪、野生动物源大肠杆菌、沙门氏菌对磺胺类药物耐药基因检测研究[A];良好农业规范与畜牧业健康发展——中国畜牧兽医学会家畜生态学分会第六届理事会暨学术研讨会论文集[C];2006年
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【参考文献】
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中国硕士学位论文全文数据库 前10条
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【同被引文献】
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