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抗生素对梨叶片不定梢诱导的影响研究

刘淑芳  
【摘要】:根癌农杆菌介导的植物遗传转化方法是植物转基因研究中最有效而且应用最广泛的方法。采用该方法进行遗传转化时,必须要对受体材料进行抗生素敏感性测定,这样才能保证有效地抑制农杆菌的生长而不影响外植体的正常分化和再生,同时减少假转化体的出现,提高基因转化效率。为此,本试验研究了氨苄青霉素(Ampicillin, Amp)、羧苄青霉素(Carbenicillin, Carb)、头孢霉素(Cefotaxime, Cef)、卡那霉素(Kanamycin, Km)和新霉素(Neomycin, Nm)对‘巴梨’(Pyrus communis cv. Bartlett)、‘考密斯’(P.communis cv. Comice)和‘身不知’(P. pyrifolia cv. Shenbuzhi)叶片愈伤组织和不定梢诱导的影响,其试验结果如下: 1.通过考察不定梢再生率和平均每叶梢数两个指标,三个品种最合适的诱导培养基及植物生长调节剂组合和在其培养基上叶片的不定梢诱导率分别是: ‘巴梨’:NN69+IBA0.1mg/L+TDZ0.9mg/L,不定梢诱导率达69.26%。 ‘身不知’:NN69+NAA0.1mg/L+TDZ1.6mg/L,不定梢诱导率达76.67%。 ‘考密斯’:MS+IBA0.1mg/L+TDZ4.0mg/L,不定梢诱导率达66.67%。 2.通过考察出愈率、不定梢再生率、平均每叶梢数以及死亡率四个指标,不同抗生素对梨叶片愈伤组织和不定梢诱导的影响结果如下: (1) Amp浓度在50~300mg/L内对‘身不知’叶片出愈率和不定梢再生率的影响较小,Amp在高浓度下(500mg/L)极显著地抑制‘身不知’叶片的出愈率和不定梢再生。低浓度(≤100mg/L)的Amp对‘考密斯’叶片的出愈率和不定梢再生率影响极小,而在高浓度下(500mg/L),Amp完全抑制了‘考密斯’叶片不定梢的发生。Amp浓度在500mg/L以内时对‘巴梨’叶片出愈率和不定梢诱导率的影响较小。 (2) Carb浓度大于200mg/L时极显著抑制‘巴梨’叶片愈伤组织和不定梢的分化。Carb浓度在50~200mg/L内对‘身不知’叶片的出愈率影响不明显,而对不定梢的抑制却达极显著水平;Carb在较高浓度下(400mg/L)完全抑制了‘身不知’叶片不定梢再生。‘考密斯’叶片对Carb的反应较为敏感,低浓度的Carb(50mg/L)极显著地抑制‘考密斯’叶片的出愈率和不定梢再生率。 (3) Cef浓度在50~300mg/L时对‘巴梨’叶片出愈率和不定梢再生率的影响较小,较高浓度的Cef(≥400mg/L)对‘巴梨’叶片的不定梢诱导表现出一定的抑制作用。Cef对‘身不知’和‘考密斯’叶片的出愈率和不定梢诱导率影响极小,‘身


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