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《四川农业大学》 2006年
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犬瘟热病毒的分离、鉴定及其抗原蛋白的研究

李惠敏  
【摘要】:本研究对来自临床疑似犬瘟热(CD)的三色犬病料和狮子狗病料样品的肝脏组织进行RT-PCR检测,结果为阳性。从RNA反转录产物中扩增出大小约为574bp的F基因的核苷酸片段,与理论值一致。该检测方法特异性、敏感性高,可用于CDV临床快速检测。 取三色犬和狮子狗病料的肝脏组织制成组织悬液,接种Vero细胞(非洲绿猴肾细胞系)分离到2株犬瘟热病毒,命名为Ssq株和Szg株。2株病毒也能在DK细胞(犬肾细胞)上培养增殖。在病毒的分离培养中,消除小牛血清中的干扰因素(接毒后的维持液不加小牛血清)、增加病毒吸附敏感细胞的时间(6~12h单层Vero细胞,吸附时间2h)和维持病毒培养过程中pH值的稳定,都是成功分离和培养犬瘟热病毒的关键因素。Ssq株和Szg株在Vero细胞上的细胞病变(CPE)明显,对细胞的感染毒力分别为TCID_(50)=10~(-3.925)/0.5ml和TCID_(50)=10~(-3.223)/0.5ml。 提取Ssq株、Szg株和Y-1(犬瘟热五联苗)的病毒蛋白,经SDS-PAGE和免疫印迹分析发现,Ssq株和Szg株蛋白条带相似,与Y-1株有5条共同的蛋白条带,分子量分别为70.6KD、57.5KD、51.3KD、40.6KD和34.1KD,3株病毒的57.5KD分子量的蛋白条带均能与犬瘟热阳性血清反应,呈现1条较深的棕色条带,而与阴性血清均无反应。分子量57.5KD的蛋白是3株病毒的共同抗原。
【学位授予单位】:四川农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2006
【分类号】:S858.292

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