收藏本站
《四川农业大学》 2006年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

产内切葡聚糖酶芽孢杆菌C-36筛选及基因克隆、序列分析

高凤菊  
【摘要】:以羧甲基纤维素钠为唯一碳源,从废泥浆中经反复筛选及刚果红鉴定,获得一株高活力产内切葡聚糖酶芽孢杆菌。经研究发现,在培养20h后,显微镜下,经革兰氏染色为阳性。细胞杆状,细胞大小(2.2~3.0)um×(0.8~0.9)um,有芽孢,中生或近中央生,芽孢大小(1.1~1.4)um×(0.8~0.9)um,卵圆形或柱形,孢囊不膨大。细胞成对或成链,具圆端,运动性较强。将此菌株C-36与枯草芽孢杆菌标准菌株ZW-1进行了参比试验,初步鉴定该细菌为枯草芽孢杆菌。在CMC-Na平板上菌落呈乳白色,粘稠厚重,湿润光亮,生长迅速,24h可见明显透明圈。生长条件的测定显示该菌生长pH范围较宽,在pH7.0生长最好,在pH8.0~9.0的碱性条件下长势较好。摇瓶发酵粗酶液的性质测定表明,该菌所产生的内切酶在pH6.8左右酶活最高,酶活力为79.2U/mL。在pH9.0时仍能保持最高酶活力的65%以上。酶反应的适宜温度为50℃,适宜中性至碱性。 根据国际基因库(GenBank)中注册的内切葡聚糖酶基因序列设计了引物,通过对内切葡聚糖酶基因PCR扩增反应条件的优化,获得了一条长约1.5kb的特异性PCR扩增条带,并对其进行了菌落PCR鉴定。然后将PCR扩增片断克隆到pMD18-T质粒中,构建含有目的基因片断的克隆质粒,并转化到JM109株大肠杆菌载体中,筛选获得阳性克隆菌株。克隆质粒中外源片断的DNA序列测定表明,该片断含有内切葡聚糖酶基因的完整序列,内切葡聚糖酶基因全长1500bp,编码499个氨基酸。将B.subtilis C-36内切葡聚糖酶基因序列在GenBank中登陆,登陆号为DQ782954。枯草芽孢杆菌C-36与其他芽孢杆菌内切葡聚糖酶基因(序列号为:Z29076.1,X04689.1,AY044252.1,X67044.1,AY766381.1)的同源性高达90%~93%,编码的氨基酸序列(序列号为:CAA82317,CAA97610,AAK94871,AAZ22322,AAN07019)同源性高达90%~98%。利用在线生物信息学数据库及生物软件对本基因进行信号肽序列、N-端糖基化位点、密码子的偏爱性等分析,并对其二级结构和三维结构进行了预测。
【学位授予单位】:四川农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2006
【分类号】:Q939.9

【引证文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前2条
1 官兴颖;枯草芽孢杆菌C-36内切葡聚糖酶基因在大肠杆菌中的表达[D];四川农业大学;2007年
2 胥兵;枯草芽孢杆菌C-36内切葡聚糖酶基因在巨大芽孢杆菌中的表达[D];四川农业大学;2007年
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 梁靖,须海荣,蒋文莉,陈利燕;纤维素酶在速溶茶中的应用研究[J];茶叶;2002年01期
2 谢占玲,吴润;纤维素酶的研究进展[J];草业科学;2004年04期
3 刘昭壮,任大明;浅谈饲用纤维素酶的生产与应用[J];饲料工业;1995年03期
4 郑淑霞,沈志扬,刘树滔,邓文汉,饶平凡;黑曲霉发酵粉中一种β-葡萄糖苷酶的分离纯化与表征[J];福州大学学报(自然科学版);2004年01期
5 余晓斌,全文海,章克昌;洗涤剂用碱性纤维素酶的研究(I)——产酶菌种的选育及发酵条件[J];工业微生物;1997年04期
6 冯群策;浅谈酶在非接触印刷废纸脱墨中的应用[J];黑龙江造纸;2002年04期
7 宋国安;纤维素酶的应用开发前景[J];河南化工;1999年06期
8 康秋莲,闫双,吴照义;纤维素酶的综合利用[J];化学工程师;1995年06期
9 乔宇,毛爱军,何永志,刘伟丰,董志扬;里氏木霉内切-β-葡聚糖酶Ⅱ基因在毕赤酵母中的表达及酶学性质研究[J];菌物学报;2004年03期
10 杨莹;宋滇平;段勇;杨克;王玉明;刘华;;PCR-RFLP方法检测锰超氧化物歧化酶基因V(16)A多态性的实验条件研究[J];昆明医学院学报;2005年04期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 关宏宇,吕通建,杨永珍,李冠军,邱醒宇,宋迎霞,李旭辉,李莹;稻草纤维填充聚丙烯材料的研究[J];工程塑料应用;2001年10期
2 熊成;戚嵘嵘;;HDPE/木粉复合材料的性能研究[J];工程塑料应用;2008年05期
3 解永梅;张成玲;赵永强;张薇;张广民;;山东省大白菜黑腐病病原的鉴定及其生物学特性的研究[J];山东农业科学;2007年06期
4 姚良同;丁延芹;刘尧;陈一然;杜秉海;李俊;;玉米秸秆低温快速腐熟菌的筛选、鉴定及效果试验[J];山东农业科学;2008年03期
5 朱彭玲;陈强;丁延芹;姚良同;杜志兵;王晶;杜秉海;;新疆地区棉花根际拮抗菌的筛选与鉴定[J];山东农业科学;2008年06期
6 张广志;周红姿;杨合同;赵晓燕;;盐碱土壤中耐盐细菌的分离与鉴定[J];山东农业科学;2008年09期
7 张一;王凤忠;张铭铄;李妍;韩明渠;周波;毛志泉;;苹果园土壤中一株根皮苷降解菌的筛选[J];山东农业科学;2011年12期
8 凌晨;刘波;;2,4,6-三溴苯酚降解菌的筛选[J];安徽化工;2012年03期
9 黄辉;汤斌;;基于响应面法对枯草芽孢杆菌WB600-eg2发酵产内切葡聚糖苷酶条件的优化[J];安徽工程大学学报;2012年01期
10 鲍立宁,洪桂云,黄显怀;电极生物膜脱氮工艺中反硝化菌相分析[J];安徽建筑工业学院学报(自然科学版);2004年05期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 王在贵;何瑞国;钱世钧;刘朝良;;特异腐质霉纤维素酶的酶谱分析[A];现代农业理论与实践——安徽现代农业博士科技论坛论文集[C];2007年
2 窦瑞木;雷清泉;张改强;;番茄内生细菌TB-2生化特性及对番茄灰霉病菌的抑制作用[A];经济策论(上)[C];2011年
3 刘春;;鳢舒伯特气单胞菌内脏类结节病的研究[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
4 马镝;;产壳聚糖酶菌株的筛选、鉴定及抑菌活性研究[A];科学发展与社会责任(A卷)——第五届沈阳科学学术年会文集[C];2008年
5 林英;秦萍;杜志强;张蓓蓓;;产纤维素酶绿色木霉F-UV264产酶条件优化[A];科学发展与社会责任(A卷)——第五届沈阳科学学术年会文集[C];2008年
6 黄华伟;王印庚;陈霞;张凤萍;;渡夏期养殖刺参腐皮综合征的发生与环境因子间的关系[A];农产品质量安全与现代农业发展专家论坛论文集[C];2011年
7 吴淑芳;张留伟;蔡伟健;喻正发;;杂交鹅掌楸材性、纤维特性及制浆性能研究[A];中国造纸学会第十五届学术年会论文集[C];2012年
8 邬纯鸿;黄毅;王文莉;钟代彬;吴广安;方艳军;;现代化奶牛场乳房炎病因调查及其防治[A];中国奶业协会年会论文集2009(上册)[C];2009年
9 蒋少军;李志忠;张新璞;胥顺吉;;大麻纤维性能及生物酶脱胶工艺研究[A];第八届功能性纺织品及纳米技术研讨会论文集[C];2008年
10 蒋少军;李志忠;张新璞;胥顺吉;;大麻纤维的生物酶脱胶技术[A];铜牛杯第九届功能性纺织品及纳米技术研讨会论文集[C];2009年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 徐荣燕;嗜热真菌糖苷酶的基因克隆、表达与分子改造[D];山东农业大学;2010年
2 郎亚军;Ectoines高效制备技术及其应用研究[D];大连海事大学;2010年
3 李永芹;养殖鱼类病原菌检测芯片技术的建立[D];中国海洋大学;2010年
4 赵祺;冻土细菌新种和冰缘植物内生细菌新种的特征和多相分类学研究[D];兰州大学;2010年
5 朱兵峰;枯草杆菌两步法生产四甲基吡嗪的调控及机制的研究[D];江南大学;2010年
6 王大红;粘细菌Stigmatella WXNXJ-B产生新型抗肿瘤抗生素的研究[D];江南大学;2010年
7 肖仔君;Acetobacter sp. CCTCC M209061细胞催化潜手性酮不对称还原反应的研究[D];华南理工大学;2010年
8 高卫华;芽孢杆菌胞外蛋白酶合成及抑菌功能的调控机制研究[D];南开大学;2010年
9 陈洋;转cry1Ab/vip3H水稻抗螟性的鉴定及三类不同转基因水稻对其非靶标生物褐飞虱影响的评价[D];浙江大学;2010年
10 刘咏梅;产精氨酸脱亚胺酶变形假单胞菌的筛选鉴定及酶的定向改造[D];江南大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 罗晶晶;斑点叉尾鮰生鱼片加工过程中的微生物变化[D];华中农业大学;2010年
2 郎晓磊;肠道菌对苏云金芽胞杆菌家蚕杀虫活性的作用[D];华中农业大学;2010年
3 董俊丽;深海细菌Martelella mediterranea纤维素酶基因的克隆、表达与酶学分析[D];华中农业大学;2010年
4 谢久凤;亮斑扁角水虻(Hermetia illucens L.)幼虫肠道内纤维素酶活性菌株的筛选与鉴定[D];华中农业大学;2010年
5 逯晋忠;苏云金芽胞杆菌对云斑天牛的抗性研究[D];华中农业大学;2010年
6 张献芳;利用半夏凝集素构建内生工程菌及其抗同翅目害虫效果研究[D];华中农业大学;2010年
7 韩亚超;新型微生态制剂的研制[D];华中农业大学;2009年
8 袁玮;贵州省苗族腌酸汤中产乳酸菌素菌的筛选与初步研究[D];华中农业大学;2010年
9 贺中华;黄鳝肠道菌群的初步分析和益生菌的开发与应用研究[D];华中农业大学;2010年
10 孟小亮;黄颡鱼肠道益生菌的筛选及其应用研究[D];华中农业大学;2010年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 谢占玲,吴润;纤维素酶的研究进展[J];草业科学;2004年04期
2 郑淑霞,沈志扬,刘树滔,邓文汉,饶平凡;黑曲霉发酵粉中一种β-葡萄糖苷酶的分离纯化与表征[J];福州大学学报(自然科学版);2004年01期
3 杨晓梅;包涵体蛋白的复性技术[J];国外医学.临床生物化学与检验学分册;2000年02期
4 刘永生,冯家勋,段承杰,赵广存,柏学亮,张成刚,唐纪良,马庆生;地衣芽孢杆菌GXN151的纤维素酶基因cel12A的序列分析及其在大肠杆菌中的表达[J];广西农业生物科学;2003年03期
5 李春华,廖贵芹,张桂敏,马立新;β-1,4-内切葡聚糖酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达[J];湖北大学学报(自然科学版);2005年03期
6 朱智东,唐燕发,许建和,叶勤,储炬;底物诱导和分批补料对巨大芽孢杆菌环氧化物水解酶生物合成的影响[J];华东理工大学学报;2001年03期
7 汪维云,朱金华,吴守一;纤维素科学及纤维素酶的研究进展[J];江苏理工大学学报;1998年03期
8 汪天虹,吴静,邹玉霞;瑞氏木霉分子生物学研究进展[J];菌物系统;2000年01期
9 乔宇,毛爱军,何永志,刘伟丰,董志扬;里氏木霉内切-β-葡聚糖酶Ⅱ基因在毕赤酵母中的表达及酶学性质研究[J];菌物学报;2004年03期
10 赵荣乐;;纤维素酶研究进展[J];喀什师范学院学报;2005年06期
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 吴琦;枯草芽孢杆菌植酸酶phyC基因的克隆及其表达研究[D];四川大学;2004年
中国硕士学位论文全文数据库 前2条
1 赵海霞;植酸酶phyA基因活性中心密码子的改造及基因工程菌培养条件的研究[D];四川农业大学;2004年
2 邹立扣;枯草芽孢杆菌WHNB02植酸酶phyC基因在大肠杆菌中的表达及玉米表达载体的构建[D];四川农业大学;2004年
【二级引证文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前2条
1 牟琳;枯草芽孢杆菌WHNB02中性植酸酶基因在巨大芽孢杆菌中表达研究[D];四川农业大学;2008年
2 赖欣;羽毛降解菌枯草芽孢杆菌B-3的分离鉴定及角蛋白酶基因的克隆表达[D];四川农业大学;2010年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 张德强,黄镇亚,张志毅;绿色木霉纤维素酶AS3.3032固态发酵的研究[J];北京林业大学学报;2001年02期
2 洪 ,黄秀梨;黑曲霉变种2281—C纤维素酶的纯化和性质[J];北京师范大学学报(自然科学版);1998年03期
3 崔锐谦;速容茶技术新进展浅析[J];茶叶;1996年03期
4 陈铭,李燕;茶饮料的开发与高新技术的应用[J];中国茶叶加工;1999年03期
5 许修宏,肖玉珍,陈建平,李杰;高效纤维素分解菌分离筛选的研究[J];东北农业大学学报;1998年04期
6 田胜艳,刘廷志,杨叶东,丁友昉;纤维素酶在白酒生产上的应用研究[J];广东化工;1999年02期
7 章文贤,蒋咏梅,周晓兰,陈必链,施巧琴,吴松刚;抗性突变株筛选法选育碱性脂肪酶高产菌[J];工业微生物;2001年02期
8 余晓斌,全文海,章克昌;洗涤剂用碱性纤维素酶的研究(I)——产酶菌种的选育及发酵条件[J];工业微生物;1997年04期
9 刘耘,鄢满秀;纤维素酒精发酵的研究进展[J];广州食品工业科技;1999年02期
10 李华,吴拾荆;纤维素酶的研制及在动物饲料中的应用[J];湖北化工;2000年05期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 张菊;薛永常;;果胶酶pelB基因片段克隆及序列分析[J];生物技术通报;2011年05期
2 许正平;杜珠还;;谷氨酸棒状杆菌启动子在枯草芽孢杆菌中的克隆及其序列分析[J];生物工程学报;1993年03期
3 孙军涛;王洪新;吕文平;马朝阳;戴易兴;姚红;;β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因的克隆与序列分析[J];食品与生物技术学报;2011年04期
4 曲凯;田平芳;谭天伟;;兽疫链球菌磷脂酰甘油磷酸合成酶基因的分离[J];北京化工大学学报(自然科学版);2008年05期
5 李军;刘兵;曾兰;罗廷荣;;猪Caspase-3基因的克隆及序列分析[J];广西农业科学;2006年05期
6 刘新育;张品品;李林珂;赵玉萍;马向东;;枯草芽孢杆菌碱性蛋白酶基因的克隆和表达[J];生物技术;2007年02期
7 陈宝玉;查云峰;徐兴然;张慧丽;邓旭明;;鼠防御素Crp4基因的克隆及序列分析[J];吉林农业大学学报;2006年01期
8 陈晓月;金宁一;邹伟;海洋;马海利;李昌;;枯草芽孢杆菌启动子序列在大肠杆菌中的克隆及序列分析[J];沈阳农业大学学报;2008年03期
9 覃映雪;苏永全;周化民;王军;王德祥;;副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)极鞭毛蛋白FlaB基因的克隆与序列分析[J];农业生物技术学报;2003年06期
10 钟万芳,方继朝,郭慧芳,王节萍,刘宝生;广谱高效Bt菌株的筛选及其杀虫蛋白基因的克隆[J];华南农业大学学报(自然科学版);2005年04期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 陈晓月;金宁一;马海利;贾雷立;刘成宏;陈义锋;;枯草芽孢杆菌启动子基因的克隆及分子进化分析[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第六届理事会第二次会议暨教学专业委员会第六届代表大会论文集[C];2006年
2 刘春生;王新娟;徐耀辉;杨霞;陈陆;王川庆;;猪链球菌ZKHY株谷氨酸脱氢酶基因的克隆与序列分析[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会论文集(下册)[C];2009年
3 崔景香;钱源;曾勇庆;陈其美;宋一萍;杜金芳;陈伟;;莱芜猪TNFAIP9基因部分序列的克隆及分析[A];中国动物遗传育种研究进展——第十五次全国动物遗传育种学术讨论会论文集[C];2009年
4 刘伟;朱兴全;戴荣四;林瑞庆;宋慧群;程天印;刘毅;;湖南省日本血吸虫线粒体nad4基因的多态性研究[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第九次学术研讨会论文摘要集[C];2006年
5 刘伟;朱兴全;戴荣四;林瑞庆;宋慧群;程天印;刘毅;;湖南省日本血吸虫线粒体cox1基因的多态性研究[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第九次学术研讨会论文摘要集[C];2006年
6 宋永峰;宋延华;温纳相;周丽;周全;高恒;管凤霞;黎敏;;番鸭源鹅细小病毒XX-08株VP2基因的克隆和序列分析[A];中国家禽科学研究进展——第十四次全国家禽科学学术讨论会论文集[C];2009年
7 许金俊;陶建平;彭金彪;王留;;柔嫩艾美耳球虫YZ株SO7基因的克隆、核苷酸及氨基酸序列分析[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第九次学术研讨会论文摘要集[C];2006年
8 倪宏波;宋丽;崔玉东;吴凌;邵红;沈冰蕾;;牛肌生成抑制素基因成熟蛋白编码序列的克隆与序列分析[A];第三届第八次全国学术研讨会暨动物微生态企业发展战略论坛论文集[C];2006年
9 郝凤奇;王春凤;杨桂连;叶丽萍;杨中娜;;牛乳中乳酸乳球菌nisRK 基因的克隆与序列分析[A];第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛论文集(上册)[C];2008年
10 席俊;张改平;王选年;张红;乔松林;赵绪永;张利娜;李青州;冯丽丽;;IBDV地方野毒株(XX株)VP2基因高变区的克隆与序列分析[A];河南省畜牧兽医学会第七届理事会第二次会议暨2008年学术研讨会论文集[C];2008年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 ;浅谈枯草芽孢杆菌在水产养殖上的应用[N];中国海洋报;2003年
2 ;空调竞争:莫克隆彩电[N];厂长经理日报;2001年
3 ;克隆联想PC[N];中国经营报;2002年
4 本报记者 赵伟;奇瑞:克隆年代的另类[N];中国质量报;2001年
5 鲁钟鸣;要创新不要克隆[N];新华每日电讯;2001年
6 本报记者 侯朝晖;“克隆”人体 赚![N];厂长经理日报;2001年
7 本报记者 马莹;在中国克隆国际名牌展览[N];中国贸易报;2001年
8 经济学家温铁军○本报记者杨晓平;无法克隆的现代化[N];中华工商时报;2002年
9 本报记者 姚福泰;中国会克隆国际“6+3”的格局吗[N];中国汽车报;2002年
10 记者 姚备;复星重整克隆公司股权[N];中国证券报;2000年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 张焱如;马生长激素(GH)基因序列、分子进化及其多态性的研究[D];内蒙古农业大学;2005年
2 李敏;牛免疫球蛋白重链基因中JH,Eμ片段敲除的研究和JH,Cμ基因的分析[D];中国农业大学;2005年
3 张运雄;欧文氏杆菌CXJZ95-198非纤维素降解特性及manA基因的克隆研究[D];中国农业科学院;2006年
4 黄晋玲;晋A棉花线粒体基因组BAC文库的构建及重要功能基因的筛选[D];中国农业科学院;2006年
5 黄俊琼;IL-31在皮肤炎症中的作用及作用机制研究[D];苏州大学;2007年
6 任鄄胜;水稻抗病基因同源序列分析及抗稻瘟病候选基因克隆[D];四川农业大学;2008年
7 刘亮伟;木聚糖酶蛋白质序列分析、分子进化和分子模拟[D];江南大学;2005年
8 黄志立;纳豆激酶基因的克隆及其在大肠杆菌与毕赤酵母中的表达[D];华南理工大学;2001年
9 王严;曲霉植酸酶基因的克隆及其表达研究[D];大连理工大学;2007年
10 喻麟;猪生长激素基因cDNA克隆与表达效应研究[D];四川大学;2007年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 高凤菊;产内切葡聚糖酶芽孢杆菌C-36筛选及基因克隆、序列分析[D];四川农业大学;2006年
2 王春芳;牛分枝杆菌MPB64基因的克隆与原核表达[D];吉林农业大学;2005年
3 朱丽杰;一株O型口蹄疫病毒分离株的全基因序列分析[D];东北农业大学;2007年
4 闫峻;乌苏里蝮蛇具抑制血小板聚集活性的金属蛋白酶分离纯化及基因信息学分析[D];吉林大学;2005年
5 于龙政;猪附红细胞体病PCR诊断方法的建立[D];延边大学;2006年
6 金雏凤;尖吻蝮毒液类凝血酶的序列分析和异源表达[D];安徽大学;2007年
7 赵达卓;猪产毒多杀性巴氏杆菌toxA基因的克隆与PCR诊断方法的建立[D];延边大学;2007年
8 申建斌;Mineirao柱花草抗炭疽病候选基因MSRA的克隆及其序列分析[D];华南热带农业大学;2007年
9 王建伟;华山新麦草低分子量谷蛋白亚基基因克隆及序列分析[D];西北农林科技大学;2008年
10 唐婕;狂犬病毒的电镜检测及其糖蛋白基因的克隆与序列分析[D];湖南农业大学;2007年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026