两种肿腿蜂的核型及RAPD研究
【摘要】：川硬皮肿腿蜂S．sichuanensis Xiao和管氏肿腿蜂Scleroderma guani Xiao et Wu属膜翅目Hymenoptera、肿腿蜂科Bethylidae，天牛肿腿蜂属Sclerdermasp，都是外寄生蜂，是钻蛀性害虫的重要天敌。本文对这两种肿腿蜂进行了细胞学研究，为揭示其种间关系、起源和演化提供必要的资料；并对它们及川硬皮肿腿蜂种内四种分化类型进行RAPD遗传多样性分析，为肿腿蜂的进一步研究如遗传育种奠定基础，从而为研究肿腿蜂的变异时期、变异机制、变异因素及诱导良性变异做准备。
在研究方法和制片技术探究的基础上，本研究对其进行了核型分析，结果如下：
1) 最佳制片流程：肿腿蜂雌成虫卵巢在0.01％秋水仙素水溶液中预处理10min，经蒸馏水低渗5min，用甲醇、冰醋酸(3：1)固定液固定15min，Giemsa染色液染色30min，冰冻揭片(液氮)，中性树胶封片。
2) 两种肿腿蜂染色体数目均为2n(♀)：30，川硬皮肿腿蜂S．sichuanensis Xiao的核型公式为2n(♀)=4m+20sm+6st，核型为3B型；管氏肿腿蜂Scleroderma guani Xiao et wu核型公式为2n(♀)=4m+18sm+8st，核型为2B型。
本试验对川硬皮肿腿蜂和管氏肿腿蜂基因组DNA的提取方法和RAPD-PCR扩增反应体系及程序优化方法进行了探讨，结果如下：
1) 基因组DNA提取结果显示，蛋白酶K法得到的基因组DNA浓度合适，蛋白质含量低，可以用于PCR扩增。
2) 最佳体系为25ul中MgCl_23.5mM／L，Taq DNA聚合酶1.5U，DNA浓度37.5ng，dNTP150uM／L，DTT0.3mM；较优化的扩增程序为94℃预变性1min45sec，94℃变性30sec，36℃退火45sec，72℃延伸2min，45个循环后72℃延伸5min。
3) 用筛选出来的8个引物对川硬皮肿腿蜂的四种分化类型及管氏肿腿蜂进行扩增，共扩增出48个位点(分子量在50～1000之间)，平均每个引物产生6个，其中多态性位点33个，占总位点数的68.9％。表明它们之间具有丰富的多态性。
4) 引物D20中分子量为398bp的带可能是小型个体的标记带；引物B10中，分子量为602bp的带可能是川硬皮肿腿蜂寄生率高的特异性标记带；引物B16
【关键词】：川硬皮肿腿蜂 管氏肿腿蜂 核型 RAPD 【学位授予单位】：四川农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2006
【分类号】：Q963;S769
【目录】：
- 摘要4-6
- Abstract6-10
- 前言10-11
- 1 文献综述11-20
- 1.1 肿腿蜂的研究概况11-14
- 1.1.1 生物学特性11-12
- 1.1.2 人工繁育和应用技术研究12-13
- 1.1.3 其他研究13-14
- 1.2 昆虫染色体研究概述14-16
- 1.2.1 研究方法和手段14-15
- 1.2.2 寄生蜂染色体研究进展15-16
- 1.3 RAPD技术研究概况16-20
- 1.3.1 RAPD技术的基本原理16
- 1.3.2 RAPD技术的特点16-17
- 1.3.3 RAPD标记技术在昆虫学研究中的应用17-20
- 2 川皮肿腿蜂和管氏肿腿蜂的核型研究20-29
- 2.1 试验材料及处理20
- 2.2 仪器设备20
- 2.3 试剂20-21
- 2.4 试验步骤21-22
- 2.4.1 染色体玻片的制备技术探索和优化21-22
- 2.4.2 计数、测量及核型分析22
- 2.5 结果及分析22-27
- 2.5.1 较优化的制片技术和流程22-23
- 2.5.2 观察结果和核型参数23-27
- 2.6 结论与讨论27-29
- 2.6.1 制片技术27-28
- 2.6.2 肿腿蜂的核型28-29
- 3 川硬皮肿腿蜂和管氏肿腿蜂的RAPD研究29-46
- 3.1 试验材料及处理29
- 3.2 仪器设备29
- 3.3 试剂29
- 3.4 试验步骤29-37
- 3.4.1 基因组DNA的提取30-31
- 3.4.2 基因组DNA的检测31-32
- 3.4.3 PCR扩增32-37
- 3.5 结果及分析37-43
- 3.5.1 基因组DNA提取检测结果37-38
- 3.5.2 较优化的扩增反应体系38
- 3.5.3 较优化的扩增反应程序38-39
- 3.5.4 扩增结果及分析39-43
- 3.6 结论与讨论43-46
- 3.6.1 基因组DNA的提取技术43
- 3.6.2 PCR扩增的最佳体系和最优程序43-44
- 3.6.3 两种肿腿蜂的RAPD分析44-46
- 参考文献46-50
- 致谢50-51
- 攻读硕士期间发表的论文51
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