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《四川农业大学》 2006年
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枯草芽孢杆菌纤维素酶产酶条件及酶学性质研究

韩学易  
【摘要】:以实验室自行筛选的一株产纤维素酶枯草芽孢杆菌C—36为研究对象,从碳源、氮源、接种量、培养基初始pH值、温度、培养时间几方面研究该菌株的产酶条件,结果表明该菌产酶的最适碳源为2%的CMC-Na,最适氮源为2.5%的蛋白胨+酵母粉复合氮源,最佳接种量为4%,培养基最适起始pH为pH5.0,产酶最适温度为37℃,最佳培养时间为36h。再以碳源浓度、氮源浓度、接种量、培养基初始pH值、培养时间五个试验因素,按正交表L_(16)(4~5)设计正交试验,确定枯草芽孢杆菌C—36产酶的最佳优化组合条件。结果表明,枯草芽孢杆菌C—36产酶最佳组合条件为:培养基起始pH值为pH5.0,碳源为2%的CMC-Na,氮源为3.5%的蛋白胨+酵母粉,按2%的接种量,培养时间为36h。在此条件下,37℃培养,CMC酶活可达223.23U/ml,是优化前的3.5倍。 按优化培养条件,对枯草芽孢杆菌C—36进行产酶培养,得到粗酶液。粗酶液经硫酸铵、Sephadex G-75、Sephadex G-100分离纯化后,得到一个电泳纯的纤维素酶,酶纯化倍数为10.42倍,回收率为21.26%。SDS-PAGE结果表明,该酶分子量为35kD。 对枯草芽孢杆菌C—36纤维素酶进行酶学性质测定,结果表明,该酶最适反应温度为65℃;最适反应pH值为pH6.8,在pH3.5~pH9.5范围内酶活较稳定;Zn~(2+)、Pb~(2+)、Fe~(3+)对酶有抑制作用,Ba~(2+)、Fe~(2+)对酶有激活作用;在50℃,pH6.8条件下,酶对CMC-Na的米氏常数Km为0.34g/L,最大反应速度Vmax为0.17mg/(min·ml)。
【学位授予单位】:四川农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2006
【分类号】:TQ920.1

【引证文献】
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【同被引文献】
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