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《四川农业大学》 2008年
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雅安周公山苏云金芽胞杆菌基因资源研究和杀虫基因的克隆

李云艳  
【摘要】: 本研究从四川雅安周公山原始森林土壤中采集土壤350份,应用醋酸钠-抗生素法筛选出132株苏云金芽胞杆菌菌株,出菌率为11%。初步研究发现这些苏云金芽胞杆菌的伴孢晶体类型有菱形、方形、球形、无定形等,充分体现了我国菌株资源的多样性。因此我们对雅安周公山苏云金芽胞杆菌基因资源进行了初步的研究和部分杀虫基因的克隆,主要结果如下: 1、通过对采集的350份土壤的海拔、资源、气候等地理特征分析,总结出了Bt资源的分布规律:在海拔1742米下,不同海拔高度的Bt出菌率经差异显著性分析后显示其无明显差异;腐质土比黏土高、黏土又高于沙土;植被覆盖率高的地区,生态条件优越,Bt分离率高;土壤表面腐质层越厚,土壤所含腐殖质越丰富,Bt含量越多;山脉阳坡出菌率比阴坡高。 2、对这132株Bt野生菌的伴孢晶体蛋白进行了SDS-PAGE分析。结果显示杀鳞翅目、鞘翅目和双翅目的杀虫蛋白带最丰富,显示了周公山Bt菌的杀虫蛋白具有一定的特异性。 3、对132株Bt野生菌的cry基因进行了PCR-RFLP分析鉴定,发现含cry1型基因菌株有74株,cry2型为34株,cry7型16株,cry9型16株,cry3型13株,cry4型8株,cry30型7株,cry8型2株,cry40型2株,另外有46株菌含未知基因,占34.8%。结果显示cry1基因含量最丰富,cry2基因其次,cry9和cry3基因第三。 4、克隆了cry9Ea4基因(Accession number:EU760456)。该基因的核苷酸序列为3468bp,与已报道的cry9Ea序列同源性高达99%。经国际Bt杀虫晶体蛋白基因命名委员会正式命名为cry9Ea4。 5、对132株Bt野生菌vip3基因进行了PCR分析鉴定,发现有25株菌含Vip3A基因,出菌率为19%;另外有4株菌含新Vip3基因。 6、克隆了vip3A基因的部分序列。 7、对菌株ZG5-4、HY3-2进行了菌种鉴定:ZG5-4定名为苏云金芽胞杆菌腊螟变种(Bacillus thingiensis var galleriae);HY3-2菌株定名为苏云金芽胞杆菌杀虫变种(Bacillus thringiensis var entomocidus)。 8、对菌株ZG5-4和菌株HY3-2进行了抗虫生物活性测定。结果表明菌株ZG5-4对鳞翅目的甜菜夜蛾、棉玲虫初孵幼虫有毒力,LC_(50)分别为23.42 ng/mL和13.24ng/mL,而菌株HY3-2对甜菜夜蛾、棉玲虫初孵幼虫的LC_(50)分别为21.17ng/mL和14.07ng/mL。
【学位授予单位】:四川农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2008
【分类号】:S476.1

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【参考文献】
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