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《四川农业大学》 2008年
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睾丸和卵巢内注射绿色荧光蛋白生产转基因鸡的研究

张红涛  
【摘要】: 近年来,随着转基因技术在哺乳动物研究中的不断成熟,众多研究者逐渐把目光转向了禽类的转基因研究。鸡由于具有世代间隔短,生产性能较高,且目的基因可在鸡蛋中得到表达的种种优势,成为转基因禽类的首选试验动物。本文通过活体手术,将脂质体包裹绿色荧光蛋白基因注射到青年鸡体内的睾丸和卵巢中,对转染后的试验鸡按照试验设计分组,进行人工受精,然后对不同时期、不同日龄胚胎进行荧光检测和PCR检测,取得的结果有如下几个方面: 1、通过活体手术向公鸡体内睾丸直接多点注射转染液,然后对公鸡进行人工采精,并提取精液中的DNA,在显微镜下进行荧光检测,发现有荧光出现。再对相应组内的母鸡进行人工授精后,对收集的不同日龄的鸡胚进行检测,子代中绿色荧光蛋白基因在不同时期的表达率平均为53.33%(32/60),提取鸡胚不同组织进行PCR检测,阳性率有50~60%。以上结果说明在睾丸内多点注射pIPES-eGFP的方法是一种可行的生产转基因鸡的方法。 2、通过活体手术向母鸡体内卵巢多点注射转染液,然后取注射后48小时的卵巢,采用二酶三步法进行消化后涂片,荧光镜检发现有微弱荧光的出现。之后利用组内没做手术的公鸡人工采精,通过人工授精技术对手术后恢复良好的母鸡进行配种,对收集的不同日龄的鸡胚进行检测,子代中绿色荧光蛋白基因在不同时期的表达率平均为45%(26/60),提取鸡胚不同组织进行PCR检测,阳性率达40~60%。 3、利用相同的方法,采集注射转染液的公鸡精液,对转染过的母鸡进行人工授精,然后对取得的鸡胚进行相同的操作,子代中绿色荧光蛋白基因在不同时期的表达率平均为66.67%(40/60)。提取鸡胚不同组织进行PCR检测,阳性率达60~70%。 4、对三组的结果进行比较表明:第三组不论是子代中绿色荧光蛋白基因在不同时期的表达率,还是鸡胚的阳性率,都明显高于第一和第二组,比第一组高10%,比第二组高10~20%。 从试验结果可以得出体内睾丸和卵巢直接注射绿色荧光蛋白基因可以作为一种新的生产转基因鸡的方法。对公鸡和母鸡同时注射外源基因再处理的方法所得到的转基因效果明显要好于单独处理公鸡或者母鸡的效果。本方法在转基因方法的研究上寻求了新的突破,也成为转基因在禽类应用的新模型,为利用转基因鸡作为生物反应器建立了一个技术平台。寻找出了一种遗传信息全面、不造成胚盘损伤、易于操作的可获得大批量转基因鸡的新途径。
【学位授予单位】:四川农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2008
【分类号】:S831

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【参考文献】
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