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《四川农业大学》 2008年
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禽呼肠孤病毒σC基因的克隆表达及其免疫原性初步研究

凌珊珊  
【摘要】: 鸡病毒性关节炎是近年来发现的一种由禽呼肠孤病毒(Avian Reovirus virus,ARV)引起的鸡慢性传染病,以侵害跗关节、趾关节及其肌腱和心肌为特征。该病在世界各地均有发生,对养鸡业带来严重的经济损失。ARVσC蛋白能刺激机体产生保护性中和抗体,具有免疫效果好的特点。本试验应用基因克隆技术进行体外表达σC蛋白并对其进行免疫原性的初步研究。 试验采用RT-PCR技术设计扩增禽呼肠孤病毒(ARV)S1133毒株的σC基因,将扩增基因克隆至pMD-19T载体上,构建了pMD19T-σC克隆载体,经PCR、酶切及测序鉴定,克隆的基因片段大小为1038bp,扩增的目的片段与报道的S1133σC基因的核苷酸序列同源性为98%。将该基因重组至pET32a(+)原核表达载体上成功构建了表达载体pET32a-σC,该重组质粒在大肠杆菌BL21中经1.0mM IPTG诱导5小时得到最佳表达。表达重组蛋白的相对分子质量为54KDa,以包涵体形式存在。经Western-blot分析表明,该重组蛋白能于ARV阳性血清发生特异性反应,表明该重组蛋白具有良好的反应原性。 pET32a-σC重组菌大量诱导表达后的产物用低压液相层析仪进行组氨酸标签的过柱纯化,在100mM咪唑buffer洗脱时蛋白较纯,纯化的蛋白经复性后测得其蛋白含量为150μg/ml。试验动物分为三组,分别为S1133灭活苗组,σC蛋白免疫组和空白对照组,在13、20和35日龄分别采集血清用建立的σC-ELISA方法进行抗体的检测分析,在36日龄时用ARVS1133病毒攻毒,试验结果表明σC蛋白刺激机体产生保护性的中和抗体同商品化S1133全病毒灭活苗的效果大致相当。
【学位授予单位】:四川农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2008
【分类号】:S852.659.4

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【引证文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 徐延伟;禽呼肠孤病毒σC蛋白在毕赤酵母中的表达及免疫保护性研究[D];中国农业科学院;2012年
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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【共引文献】
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中国重要会议论文全文数据库 前5条
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中国博士学位论文全文数据库 前5条
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中国硕士学位论文全文数据库 前10条
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【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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3 刘文兴,王劭,吴宝成;禽类呼肠孤病毒的分子生物学[J];福建畜牧兽医;2004年S1期
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中国硕士学位论文全文数据库 前4条
1 颜赟;鸡免疫抑制性病毒共感染的流行病学调查[D];山东农业大学;2010年
2 魏战勇;鸡病毒性关节炎油乳剂灭活苗的研究[D];内蒙古农业大学;2001年
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【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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2 徐仕忠;;禽呼肠孤病毒感染的危害和控制[J];兽医导刊;2009年11期
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4 陈士友,陈溥言,蔡宝祥,钱建飞;禽呼肠孤病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立[J];病毒学报;1991年03期
5 廖敏,李康然,谢芝勋;禽呼肠孤病毒分子生物学研究进展[J];广西农业生物科学;2000年02期
6 许秀梅;苏敬良;黄瑜;傅光华;程龙飞;赵继勋;;两株鸭源禽呼肠孤病毒S3基因序列分析[J];中国兽医杂志;2008年01期
7 俞燕;;应用禽呼肠孤病毒muNS包裹体固定和纯化蛋白质[J];中国家禽;2010年22期
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2 廖敏;谢芝勋;谢志勤;刘加波;庞耀珊;邓显文;唐小飞;何竞铭;;一步法RT-PCR检测禽呼肠孤病毒的研究[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十一次学术研讨会论文集[C];2002年
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中国重要报纸全文数据库 前7条
1 王永坤 田慧芳;一种新鹅病——鹅出血性坏死性肝炎(又称鹅呼肠孤病毒感染)[N];中国畜牧兽医报;2006年
2 广西大学 韦平 阳秀英;家禽免疫抑制性疾病的危害及其防制策略[N];中国畜牧兽医报;2006年
3 广西大学 韦平 阳秀英;家禽免疫抑制性疾病的危害及其防制策略[N];中国畜牧兽医报;2006年
4 ;三价禽呼肠孤油苗与对种鸡有效保护[N];中国畜牧报;2002年
5 广西大学 韦平 阳秀英;家禽免疫抑制性疾病的危害及其防制策略[N];中国畜牧兽医报;2006年
6 本报记者 黄妙英 翟陆;报效祖国[N];广西日报;2005年
7 王大鹏;鸡病毒性关节炎诊断与防治[N];中国畜牧报;2002年
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1 木其尔;禽呼肠孤病毒基因组序列模体特征分析[D];内蒙古大学;2012年
2 马利;禽呼肠孤病毒和传染性支气管炎病毒的环介导等温扩增检测方法的研究[D];山东农业大学;2012年
3 李爽;鸭源禽呼肠孤病毒感染雏鸭的免疫病理学研究[D];华中农业大学;2010年
4 孙美玉;禽呼肠孤病毒检测方法的建立及病毒分离鉴定[D];中国农业科学院;2012年
5 姜珂;禽呼肠孤病毒诱导细胞自噬的机制及其与病毒复制的关系[D];扬州大学;2012年
6 党娟;禽呼肠孤病毒L2基因的克隆与序列分析[D];内蒙古农业大学;2012年
7 何建文;禽呼肠孤病毒S2、S4基因的克隆与序列分析[D];内蒙古农业大学;2012年
8 李斌;禽呼肠孤病毒感染流行病学调查与广西地方分离株S1基因的测序和克隆[D];广西大学;2004年
9 万俊杰;减毒沙门氏菌介导的禽呼肠孤病毒σB/σC基因疫苗的构建及其免疫特性研究[D];四川农业大学;2011年
10 梁英;禽(鸡源)呼肠孤病毒的分离与鉴定[D];福建农林大学;2005年
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