收藏本站
《四川农业大学》 2009年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

甘薯黑斑病菌(Ceratocystis fimbriata Ellis.et Halsted)分离鉴定及基因组文库构建

李忆  
【摘要】: 甘薯是世界上重要的粮食、饲料和工业原料用作物,在世界粮食生产中总产排列第七位。甘薯黑斑病是为害甘薯最普遍而严重的病害,该病在世界上的许多地区均有发生,在我国每年由甘薯黑斑病造成的甘薯产量损失在10%左右。由于甘薯黑斑病是一种传播途径较多的顽固性病害,天然存在的高抗黑斑病菌的材料十分稀少,因此通过常规育种手段选育抗病甘薯品种较为困难,目前大多采用薯块储藏时药剂浸种的方法防治,而利用生物技术手段创造抗病材料获得抗病品种是防治该病害最经济和有效的方法。本研究主要内容为甘薯黑斑病菌的分离纯化和利用lambda噬菌体构建了甘薯黑斑病菌基因组文库,为下一步筛选甘薯黑斑病菌无毒基因,构建甘薯抗病基因的转基因表达载体奠定基础。 本研究第一部分从病薯中分离得到的甘薯黑斑病菌通过甘薯黑斑病室内鉴定,调查17-7渝123、18-3南1552、Z5866、2-7、Sy046等76个甘薯品种的平均病斑直径,以胜利百号、徐薯18和52-45为参试对照种,结合对照品种的抗性表现,确定76个不同品种的抗感性。本试验结果表明17-7渝123、19-3、②-128等14个为高抗品种,18-3南1552、②-123、20-3等23个为中抗品种,Z5866、2-7、Sy046、36号等39个为感病品种。 本试验第二部分从收集到的病薯中分离纯化黑斑病菌,通过方法摸索提取高质量的基因组DNA,选择合适的限制性内切酶BamHⅠ进行部分酶切使之成为适宜的片段,应用QIAGEN试剂盒法分离大小在9~23kb之间的片段。将此回收的大小合适的外源DNA片段与载体DNA(λ噬菌体载体,λDASHⅡVector)进行连接,经体外包装,转染细菌,得到一组含有不同DNA片段的重组噬菌体颗粒。通过倒平板测定包装的噬菌体滴度,计算出噬菌斑形成率为4.12×10~5pfu/μg,说明所建立的基因组文库是较为完整的。挑取数个噬菌斑,提取重组λ噬菌体DNA,酶切检查插入片段的大小,其插入片段在9~23kb之间。结果表明回收得到的DNA片段很好地插入载体并且片段大小完全符合基因组文库构建要求。
【学位授予单位】:四川农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2009
【分类号】:S435.31

手机知网App
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 殷飞;陈丽梅;李昆志;;利用一碳化合物(C1)细菌的分离及基因组文库的构建[J];生物技术通报;2006年05期
2 程子刚;程强;敖光明;;小麦基因组文库的构建及高分子量(HMW)谷蛋白亚基基因的筛选[J];中国农业大学学报;1992年02期
3 梁银燕;周明兵;汤定钦;;毛竹简易基因组文库的快速构建[J];世界竹藤通讯;2008年02期
4 侯思名;张薇;翟书华;岑晓江;黄兴奇;程在全;;云南药用野生稻BIBAC文库的构建及分析[J];湖南农业大学学报(自然科学版);2011年01期
5 唐莉丽;孙栋;武波;;琼氏不动杆菌GXP04的苯酚羟化酶基因的克隆及序列分析[J];广西农业生物科学;2006年01期
6 周玲艳;姜大刚;庄楚雄;;水稻TAC基因组文库的筛选与克隆转化[J];江苏农业科学;2006年04期
7 杨志勇,张庆琪,焦新之,许政暟;盐藻基因组DNA 文库的构建(英文)[J];植物生理学报;2000年01期
8 陈凡国,张学勇;大片段DNA插入文库的研究进展[J];生物技术通报;2002年02期
9 丁鸿,关伟军,马月辉;我国濒危家养动物细菌人工染色体基因组文库的构建及应用[J];中国畜牧兽医;2004年01期
10 宋来鹏;刘萍;李健;刘振辉;;三疣梭子蟹基因组小卫星特征分析[J];水产学报;2008年06期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 张大鹏;石强;刘铁铮;杨利国;吴国祥;成国祥;;用粘粒载体构建山羊基因组文库[A];中国畜牧兽医学会2003年学术年会论文集[C];2003年
2 张桂敏;王裔雄;胡勇;马立新;;一种简便快速构建宏基因组文库的方法[A];2008年中国微生物学会学术年会论文摘要集[C];2008年
3 彭晴;张雪;关国华;李颖;;一个克隆自海洋底泥宏基因组文库的脂酶新基因[A];2008年中国微生物学会学术年会论文摘要集[C];2008年
4 黄雅丽;李慧贤;张炯;杜纪坤;谭红铭;陆勇军;周世宁;;深海宏基因组文库筛选及新的功能基因[A];2010年第四届全国微生物遗传学学术研讨会论文摘要集[C];2010年
5 冷园园;韩文君;祝磊;李越中;吴志红;;山羊瘤胃宏基因组文库构建及内切葡聚糖酶基因的筛选[A];第二届全国微生物资源学术暨国家微生物资源平台运行服务研讨会论文摘要集[C];2010年
6 沈月毛;;通过构建宏基因组文库探讨植物美登木素生物合成起源[A];2008年中国微生物学会学术年会论文摘要集[C];2008年
7 代俊;江帆;彭方;方呈祥;;深海沉积物宏基因组文库中产甲壳素酶克隆的筛选[A];基因开启未来:新时代的遗传学与科技进步——湖北省遗传学会第八次代表大会暨学术讨论会论文摘要汇编[C];2009年
8 王春燕;刘四新;;宏基因组技术在纤维素酶活筛选中的研究进展[A];2009年海南省微生物学检测及质量保证研讨会论文集[C];2009年
9 黄雅丽;陆勇军;赖心田;张炯;林永成;周世宁;;南海微生物宏基因组文库的构建及功能基因初步筛选[A];微生物实用技术生态环境应用学术研讨会论文集[C];2008年
10 夏平安;刘维全;江禹;李晓艳;;家蝇基因组文库的构建[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立20周年庆典暨第十次学术研讨会论文集(下)[C];2003年
中国重要报纸全文数据库 前8条
1 ;HGP“中国卷”完成图通过专家验收[N];中国高新技术产业导报;2001年
2 胡国群;未来生物技术带来的商机[N];中国贸易报;2001年
3 记者 熊燕;国际首例共生菌宏基因组文库在昆建成[N];云南日报;2009年
4 胡国群;生物技术的未来商机[N];中华工商时报;2002年
5 清华大学生物芯片研究中心主任 程京;生物芯片将怎样改变我们的生活[N];光明日报;2001年
6 本报记者 曹继军;谈家桢:百年一生 长照后人[N];光明日报;2008年
7 本报记者 李治国;大师风骨 耀泽后人[N];经济日报;2008年
8 河南省伊川高中 孙雪茹;浅谈基因文库[N];学知报;2011年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 路杨;土壤宏基因组文库筛选除草剂降解基因[D];吉林大学;2011年
2 谢婧;三株霍乱弧菌基因组文库的构建与鉴定及含ctxΦ阳性克隆子的筛选[D];郑州大学;2003年
3 罗坤;土壤宏基因组文库PKS基因的筛选及其代谢物杀线虫活性测定[D];湖南农业大学;2010年
4 赵翠;对虾和扇贝BAC基因组文库的发掘和应用研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2012年
5 余建秋;大熊猫基因资源库构建及粪便高质量DNA提取方法的建立[D];浙江大学;2006年
6 陈寅;杆状病毒基因组扫描技术筛选病毒因子和顺式元件及其表达系统的应用[D];中国农业科学院;2006年
7 叶满红;鸡脂肪酸结合蛋白基因的克隆及其与肌内脂肪含量关系的研究[D];中国农业科学院;2003年
8 朱德康;鸭疫里默氏杆菌荚膜多糖输出蛋白基因的发现及其免疫原性研究[D];四川农业大学;2006年
9 耿波;黑龙江野鲤细菌人工染色体基因组文库的构建及在基因组研究中的应用[D];吉林大学;2007年
10 陈时飞;一株新的纳他霉素生产菌L10的系统发育分析及其基因工程高产菌构建[D];浙江大学;2009年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 李忆;甘薯黑斑病菌(Ceratocystis fimbriata Ellis.et Halsted)分离鉴定及基因组文库构建[D];四川农业大学;2009年
2 王光超;山羊瘤胃宏基因组文库蛋白酶的筛选分离[D];山东大学;2012年
3 袁静;黑山羊胃肠微生物宏基因组文库构建及多样性研究[D];湖南农业大学;2012年
4 宋晓;牛瘤胃宏基因组文库的构建及纤维素酶的筛选[D];吉林大学;2010年
5 安娜;山羊瘤胃微生物宏基因组文库的构建及功能基因的筛选[D];安徽农业大学;2010年
6 吴莎莎;基于芒草饲养牛瘤胃微生物宏基因组文库构建及多样性分析[D];湖南农业大学;2012年
7 刘家英;从环境样本宏基因组中筛选酯酶相关基因[D];华东理工大学;2013年
8 马艳玲;海洋放线菌基因组文库的构建和功能基因的克隆及序列分析[D];华中师范大学;2011年
9 刘舒;番茄灰霉病病株根际土壤宏基因组文库的构建[D];山东理工大学;2011年
10 秦培钢;水稻纹枯病菌Rhizoctonia solani AG1 IA Fosmid基因组文库的构建及线粒体全基因组组装分析[D];四川农业大学;2011年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026