犍为县生姜连作土壤微生物特性研究

【摘要】： 从四川省犍为县榨鼓乡采集了生姜连作土壤,包括患病生姜根际土壤和非根际土壤,正常生姜根际土壤和非根际土壤,采用稀释平板法测定了土壤微生物类群的数量,分别测定了土壤过氧化氢酶、脲酶、中性磷酸酶和微生物量C、N。采用稀释平板法分离获得38株细菌,应用16S rDNA PCR-RFLP、16S rRNA基因全序列分析,研究了这些细菌的遗传多样性,确定了其系统发育及分类地位；采用PCR-DGGE研究了土壤微生物的遗传多样性。其结果如下： 1.患病生姜根际土壤细菌明显增多,放线菌和真菌显著下降,而患病生姜的非根际土壤放线菌有明显增加,真菌和细菌变化不明显。 2.患病生姜根际土壤的中性磷酸酶,脲酶活性降低,过氧化氢酶增加,表明根系分泌物对脲酶、中性磷酸酶活性具有抑制作用,而对过氧化氢酶活性有促进作用。 3.16S rDNA PCR-RFLP分析结果表明,在75%相似性水平处,38株细菌分为6个遗传群。供试菌株表现出一定的差异性,呈现出丰富的多样性。 4.在上述实验基础上,选取了SJ1-4、SJ1-5、SJ1-6、SJ1-9、SJ1-1O、SJ1-11、SJ2-1、SJ2-4、SJ2-8、SJ3-5、SJ4-2、SJ4-3、SJ4-5共13株代表菌株测定了16S rDNA序列,进而构建了系统发育树关系。结果表明,13个代表菌株分布于6个系统发育分支,分别为假单胞菌属(Pseudomonas)、不动杆菌属(Acinetobacter)、芽孢杆菌属(Bacillus)、肠杆菌属(Enterobacter)、鞘氨醇杆菌属(Sphingobacterium)、溶杆菌属(Lysobacter)。 5.对土壤DNA的PCR-DGGE分析结果表明,患病生姜根际土壤和正常生姜根际土壤细菌聚类在一起,且细菌种群相似性较高,达到70%左右,显示它们之间具有比较相似的种群结构。 在真菌种群聚类中,患病生姜根际土壤与正常生姜根际土壤聚在一起,患病生姜非根际土壤和正常生姜非根际土壤聚类在一起,各自的相似性不高,说明生姜连作导致了土壤真菌种类改变。