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《四川农业大学》 2010年
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重组猪IL-15对核酸疫苗PPV VP2-PCV2 ORF2免疫原性的影响

熊飞宇  
【摘要】: 本研究将扩增得到的PCV2 ORF2基因连接到PPV SC-1株VP2基因的N端,将其克隆到真核表达载体pCI-neo上,构建真核表达质粒pCI-ORF2-VP2,在此基础上,进一步将IL-15定向克隆于该载体上,构建重组质粒pCI-IL15-ORF2-VP2。采用脂质体介导法将pCI-IL15-ORF2-VP2转染PK15细胞,观察绿色荧光蛋白的融合表达。将重组质粒免疫健康小鼠,分别设立5个对照组:pCI-ORF2-VP2组、细小病毒灭活疫苗组、圆环病毒亚单位疫苗组、PCI-neo空载体组、空白对照组。通过脾细胞增殖法、流式细胞仪来分别检测小鼠脾脏T淋巴细胞的增殖活性和外周血CD4+、CD8+ T淋巴细胞数量变化,并采用间接ELISA法来检测小鼠PPV、PCV2抗体变化。于初免后35d采集小鼠实质器官染色体基因进行PCR扩增,对核酸疫苗的安全性进行检测。 结果显示:重组质粒pCI-IL15-ORF2-VP2构建成功,在其转染的PK15细胞中观察到大量绿色荧光,说明它在PK15细胞中能正常表达。重组质粒免疫小鼠后,其脾脏细胞增值活性和CD4+、CD8+ T淋巴在外周血淋巴细胞中的比率均有一定程度的升高,均高于pCI-ORF2-VP2组和其它对照组。同时,从血清中检测出了较高水平的PPV、PCV2特异性抗体,整体水平高于pCI-ORF2-VP2组、细小病毒灭活疫苗组和圆环病毒亚单位疫苗组。提取小鼠各组织器官染色体基因组进行PCR扩增,对基因疫苗的安全性进行检测,结果显示未能从免疫小鼠各组织的基因组扩增出ORF2基因和VP2基因片,说明核酸疫苗是安全的。 通过以上可以看出:重组IL-15以后,核酸疫苗无论是在细胞免疫水平方面还是产生特异性抗体水平方面都有较大程度的提高,因此将IL-15克隆进真核表达质粒中是提高核酸疫苗免疫活性的一条有效途径。这为IL-15乃至其他细胞因子作为核酸疫苗免疫佐剂研究提供了参考,也为进一步研制新型、高效的PPV、PCV2疫苗奠定了基础。
【学位授予单位】:四川农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:S852.659.2

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