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《四川农业大学》 2010年
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鸭瘟病毒TK基因转录与表达时相及TK重组蛋白ELISA方法的建立和应用

文永平  
【摘要】: 本文对本研究小组前期鉴定、表达出的鸭瘟病毒(Duck plague virus, DPV)胸苷激酶(Thymidine Kinase, TK)基因、TK重组蛋白展开了以下系列研究:DPV TK基因在鸭胚成纤维细胞(Duck Embryo Fibroblast, DEF)中的转录与表达时相分析;TK重组蛋白作为包被抗原建立TK-ELISA检测DP抗体。结果如下: 1.荧光定量PCR (FQ-PCR)与蛋白印迹(Western-blot)分析DPV TK基因的转录与表达时相。转录时相显示DPV TK基因最早在感染后30min开始转录,随后转录产物量迅速增加,并于感染后4h达到高峰,36h后其相对含量下降到一定水平,72h转录产物极少;表达时相显示感染后从6h开始大量表达,8h达到表达的高峰,随后持续下降直到48h。转录与表达时相共同证明TK基因具备疱疹病毒早期基因的典型特征。 2.TK重组蛋白作为包被抗原建立TK-ELISA方法。结果表明,最佳包被抗原稀释倍数、血清稀释倍数、酶标二抗稀释倍数分别为:2.5μg/100μl(1:200)、1:80及1:2000。通过用建立的TK-ELISA检测鸭病毒性肝炎病毒(DHV)、鸭乙型肝炎病毒(DHBV)、鸭疫里默氏菌(R.A)、鸭大肠杆菌(E.coli)、鸭沙门氏菌(S. anatum)血清,并与鸭瘟病毒(DPV)血清对照,显示出TK-ELISA具有良好的特异性。对一份鸭阳性血清做梯度稀释,依照临界值(0.401),最大能检测出1:2560的稀释度。通过免疫活疫苗,用TK-ELISA检测发现在第4周抗体达最高峰。对30份疑似感染鸭瘟血清临床样本检测,阳性检出率为90%(27/30), TK-ELISA与血清中和试验(SNT)显示出83.33%的符合率,与全病毒包被的ELISA(DPV-ELISA)显示出90%的符合率。
【学位授予单位】:四川农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:S852.65

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【参考文献】
中国期刊全文数据库 前6条
1 范伟兴,张雪莲,赵宏坤,陈溥言;猪伪狂犬病毒鲁A株TK基因的序列测定及其结构功能与进化分析[J];病毒学报;2002年03期
2 贾仁勇;程安春;汪铭书;郭宇飞;文明;徐超;袁桂萍;周伟光;周毅;陈孝跃;;鸭肠炎病毒CHv强毒株超微结构研究[J];病毒学报;2007年03期
3 王琳;杨润德;陈丽君;孙向华;苏晓健;程龙;;伪狂犬病病毒冀A株TK基因的克隆及序列分析[J];动物医学进展;2007年04期
4 寸韡;HSVI立即早期基因研究进展[J];国外医学.病毒学分册;2003年05期
5 袁亚男;刘文忠;;实时荧光定量PCR技术的类型、特点与应用[J];中国畜牧兽医;2008年03期
6 朱捷;杨成君;王军;;荧光定量PCR技术及其在科研中的应用[J];生物技术通报;2009年02期
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 蔡铭升;鸭瘟病毒UL35基因的原核表达、蛋白纯化、转录时相、表达时相及亚细胞定位[D];四川农业大学;2009年
【共引文献】
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1 陈匡时,陈德良;中药发展面临的挑战和机遇[J];中医药临床杂志;2005年03期
2 姚丽萍;高银祥;祖元刚;;流式细胞术在植物学研究中的应用[J];安徽农学通报(上半月刊);2009年09期
3 周玲艳;秦华明;;胡萝卜悬浮细胞系及高效再生系统的建立[J];安徽农业科学;2006年16期
4 廉宜君;陈韩英;李炳奇;杨金凤;袁军;;沙枣多糖对免疫抑制小鼠的调节作用[J];安徽农业科学;2009年16期
5 马晓燕;张会彦;贾春凤;李慧;王羽;张先舟;张伟;;荧光定量PCR检测单核细胞增生性李斯特氏菌[J];安徽农业科学;2011年15期
6 袁继红;;实时荧光定量PCR技术的实验研究[J];现代农业科技;2010年13期
7 张训海,张先明,韩北芳,张行鹏,王小红,方元贵,蔡旭;鸭胚成纤维细胞培养方法的初步建立[J];安徽农业技术师范学院学报;2001年02期
8 孙大康;李柏青;;电泳迁移率变动分析化学发光法检测T细胞NF-κB活性[J];蚌埠医学院学报;2006年01期
9 王静,王秋波,鲁迎年;免疫印迹技术检测ENA抗体方法的建立及应用[J];青岛大学医学院学报;2002年04期
10 王晓俭;两种不同制备酶标记结合物方法的比较[J];青岛大学医学院学报;2003年01期
中国重要会议论文全文数据库 前7条
1 周正新;;生脉片对IL-1介导体外培养软骨细胞凋亡的影响[A];中医药理论与应用研究——安徽中医药继承与创新博士科技论坛论文集[C];2008年
2 李洁;;实时荧光定量PCR技术及实例分析[A];北京市高等教育学会技术物资研究会第十届学术年会论文集[C];2008年
3 王胜乐;王铁成;李元果;于志君;丁洁;许薇薇;忻悦;岳秀芳;王铮;郑学星;杨松涛;黄耕;赵永坤;高玉伟;夏成柱;;水貂犬瘟热动物模型的建立[A];第十届中国实验动物科学年会论文集[C];2012年
4 谢世琦;孟宪荣;栗绍文;王倩;潘秀华;张超;张丽媛;;肠出血性大肠杆菌O157:H7胶体金检测试纸条的研制[A];中国畜牧兽医学会兽医食品卫生学分会第十二届学术研讨会论文集[C];2012年
5 王芳;才子斌;王毅;徐煌;侯立中;颜炜群;;乳腺癌HER-2/neu肽疫苗的实验研究[A];增强自主创新能力 促进吉林经济发展——启明杯·吉林省第四届科学技术学术年会论文集(下册)[C];2006年
6 王毅;胡梦林;王芳;马杰;常淑芳;颜炜群;;手性MUC1肽疫苗对BALB/c小鼠细胞毒T淋巴细胞的诱导作用[A];增强自主创新能力 促进吉林经济发展——启明杯·吉林省第四届科学技术学术年会论文集(下册)[C];2006年
7 郑敏;黄梅清;吴南洋;陈少莺;;猪圆环病毒2型Taqman荧光定量PCR检测方法的建立及应用[A];2012年福建省畜牧兽医学术年会论文集[C];2012年
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1 王冰;EB病毒潜伏膜蛋白2A特异性CTL表位筛选及免疫功能研究[D];南京医科大学;2009年
2 陈克研;猪血凝性脑脊髓炎免疫层析检测试纸及其灭活疫苗的研制[D];吉林大学;2011年
3 张海华;日粮蛋白质和蛋氨酸水平对水貂生产性能及毛皮发育的影响[D];中国农业科学院;2011年
4 高苇;我国黄瓜棒孢叶斑病的病原学及诊断技术的研究[D];中国农业科学院;2011年
5 朱洪伟;鸭肠炎病毒UL15及UL41基因的鉴定[D];中国农业科学院;2011年
6 管笛;黄曲霉毒素M_1单克隆抗体及检测技术研究[D];中国农业科学院;2011年
7 贾俊英;西芹种子浸提液对黄瓜枯萎病菌化感作用及其机理的研究[D];内蒙古农业大学;2011年
8 袁飞荣;转rol ABC基因枳橙砧木的评价[D];湖南农业大学;2011年
9 龙翔宇;利用基因芯片技术发掘小麦内参基因及抗赤霉病相关基因[D];四川农业大学;2011年
10 常华;鸭瘟病毒gE基因功能初步研究[D];四川农业大学;2011年
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1 杨堃;鹅CYP7A1基因克隆、表达调节及表达规律的研究[D];华中农业大学;2010年
2 龚文芳;棉花抗细胞凋亡基因GhDAD1的克隆、定位及表达分析[D];华中农业大学;2010年
3 闫娜利;化学发光酶免疫分析法测定磺胺对甲氧嘧啶[D];郑州大学;2010年
4 高慧艳;氯化汞对大鼠原代睾丸间质细胞类固醇激素合成的影响[D];郑州大学;2010年
5 徐红明;小麦抗白粉病相关基因的克隆与分析[D];郑州大学;2010年
6 张萍;电离辐射对人外周血细胞GADD45A和nm23-H1基因表达的影响[D];郑州大学;2010年
7 金晶;牦牛血IgG分离纯化工艺研究[D];甘肃农业大学;2010年
8 杨志艺;镉处理对花生品质、生理机制和金属硫蛋白Ⅱ型基因表达的影响[D];中国海洋大学;2010年
9 王建立;猪圆环病毒2型感染对猪肺泡巨噬细胞模式识别受体转录水平的影响[D];中国农业科学院;2010年
10 鲁陈;实时荧光定量PCR检测法在孕妇弓形虫感染检测中的优势及临床应用[D];南昌大学;2010年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 张秀美,艾武,王莉莉,宋敏训,牟建青,徐苏云,杨奎,陈溥言;鸡传染性喉气管炎的诊断与病毒分离鉴定[J];山东农业科学;1997年06期
2 陈宏武,徐为燕,杜念兴;鸭瘟病毒核酸限制性内切酶图谱[J];病毒学报;1986年02期
3 余克伦,陆光进,贺东升;鸭瘟病毒的某些分子生物学特性[J];病毒学报;1993年03期
4 张显升,刘在新,赵启祖,谢庆阁;口蹄疫病毒基因组RNA结构与功能研究进展[J];病毒学报;2001年04期
5 娄高明;检测伪狂犬病的PCR方法的建立及其在临床诊断中的应用[J];病毒学报;2002年02期
6 袁桂萍,程安春,汪铭书,周毅,刘菲,韩晓英,廖永洪,徐超,郭宇飞,周伟光,文明,贾仁勇,陈孝跃;鸭病毒性肠炎病毒强毒株的形态发生学与超微病理学研究[J];病毒学报;2004年04期
7 程安春,汪铭书,刘菲,宋涌,袁桂萍,韩晓英,徐超,廖永洪,周伟光,文明,贾仁勇,陈孝跃;PCR在鸭瘟临床诊断和免疫及致病机理研究中的初步应用[J];病毒学报;2004年04期
8 赵武;肖少波;方六荣;江云波;宋云峰;严琳;余晓岚;陈焕春;;融合表达牛疱疹病毒1型VP22及猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5重组伪狂犬病毒TK~-/gE~-/VP22 GP5~+的构建[J];病毒学报;2006年01期
9 陈淑红;韩宗玺;邵昱昊;刘胜旺;孔宪刚;;鸭肠炎病毒UL6基因的分子特征[J];病毒学报;2006年05期
10 安乃莉,张智清,王嵩,刘红兵,曾革非,姚立红,陈爱君;应用硫氧还蛋白促进外源蛋白在大肠杆菌的可溶性表达[J];病毒学报;1999年02期
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 陈淑红;鸭肠炎病毒部分基因组序列的克隆与分析[D];东北农业大学;2006年
【相似文献】
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1 伍志坚;HSV-tk基因在基因治疗中的应用研究进展[J];生物技术通讯;1995年04期
2 吴小兵;tk基因在肿瘤基因治疗中的应用及进展[J];生命的化学;1994年05期
3 黄爱芳,王林川;鸽痘病毒TK基因的扩增、克隆及序列分析[J];动物医学进展;2004年05期
4 任红梅,钱凤琴,李爱芹,庄文忠;鸡传染性喉气管炎病毒TK基因的克隆与鉴定[J];中国兽医科技;2000年11期
5 安威,戎煜,刘晓军;含TK基因逆转录病毒重组体的构建[J];中国病理生理杂志;1997年06期
6 刘波,邓中平;tk基因突变的分子机制研究[J];癌变.畸变.突变;2005年03期
7 乔守怡,刘阳,孙光荣,蔡新中,赵寿元;从固定的细胞和组织中分离DNA研究人tk基因多态性[J];细胞生物学杂志;1992年02期
8 罗薇;靳艳玲;刘内生;刘群;汤承;岳华;龙虎;骆勇;;鸭瘟病毒CY07强毒株TK基因的序列分析[J];西南民族大学学报(自然科学版);2009年02期
9 邝国乾,邝海;用病毒为载体的肿瘤tk基因疗法研究概况[J];广西医学;1998年06期
10 仇华吉,周彦君,孔令达,张绍杰,钱平,王柳,童光志;伪狂犬病病毒Bartha-K61株TK基因的分离鉴定[J];中国兽医科技;2000年03期
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1 韩先杰;王君伟;马波;;鸭瘟病毒TK基因的克隆及序列分析[A];中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次研讨会论文集[C];2005年
2 朱道中;吴红专;刘福安;贺东生;李惠颜;;鸡传染性喉气管炎病毒TK基因插入缺失株的安全性和免疫力试验[A];中国畜牧兽医学会禽病学会分会第十次学术研讨会论文集[C];2000年
3 黄爱芳;王林川;;鸽痘病毒TK基因的扩增、克隆及序列分析[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十一次学术研讨会论文集[C];2002年
4 彭大新;甘军纪;高崧;吴艳涛;刘金彪;;聚合酶链反应扩增TK基因检测鸡传染性喉气管炎病毒的研究[A];第四届中国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会论文集[C];2001年
5 井波;李有文;范永卿;杨瑞;蒋海军;加衣那古丽;;山羊痘病毒klp2基因的克隆与序列分析[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会论文集(下册)[C];2009年
6 赵亚刚;张学庸;惠宏襄;王成济;;逆转录病毒介导的HSV—tk/GCV对肝癌细胞的影响[A];2002全国中西医结合肝病学术会议论文汇编[C];2002年
7 苏鑫铭;于春梅;王敏秀;曹瑞兵;周斌;陈溥言;;PrV上海株TK基因缺失株的构建及其生物学特性研究[A];第一届中国养猪生产和疾病控制技术大会——2005中国畜牧兽医学会学术年会论文集[C];2005年
8 曾文;张贵容;邹敏;;伏立康唑对小鼠淋巴瘤L5178Y细胞TK基因的致突变作用[A];中国药理学会制药工业专业委员会第十一届学术会议论文摘要汇编[C];2004年
9 邓中平;;WTK1细胞用于tk基因突变试验检测诱变剂的诱变性[A];中国药理学会毒理专业委员会第十次学术会议论文摘要汇编[C];2004年
10 石向华;谭万龙;杜跃军;;TK/GCV基因系统联合TNF-α治疗膀胱癌的实验研究[A];第十五届全国泌尿外科学术会议论文集[C];2008年
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1 罗钦文;“基因治疗”的探索[N];福建科技报;2001年
2 ;经肝动脉或瘤体注射单纯疱疹病毒-胸苷激酶基因治疗兔肝癌[N];中国医药报;2003年
3 北京兽药研究所 叶立林 支海兵;猪伪狂犬病疫苗研究趋势[N];中国畜牧水产报;2000年
4 ;芹黄素提高胸苷激酶基因系统治疗前列腺癌疗效的研究[N];中国医药报;2003年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 范永刚;放射线诱导性自杀基因的构建及其体内外治疗肝癌的实验研究[D];南京医科大学;2003年
2 詹立;藻毒素Microcystin-LR的体内及体外遗传毒性实验研究[D];四川大学;2004年
3 胡薇;逆转录病毒载体介导的胸苷激酶靶向治疗肿瘤的研究[D];吉林大学;2006年
4 郭巍;山羊痘病毒基因缺失转移载体及基因缺失突变毒株的构建[D];东北农业大学;2005年
5 郭洪;伪狂犬病毒IE180和EP0基因的表达调控[D];华中农业大学;2008年
6 徐斌;腺病毒介导的CDglyTK双自杀基因系统对瘢痕疙瘩治疗作用的实验研究[D];山东大学;2009年
7 刘希民;H-2半相合小鼠CD34~+细胞混合TK基因转染的TK~+T细胞移植模型中治疗GVHD及其GVL效应的实验研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2002年
8 杨磊;IGF-I和HSV-tk联合基因转移优化创面愈合的研究[D];第一军医大学;2004年
9 郭玉忠;hTERT启动子调控的HSV-tk基因治疗系统对卵巢癌细胞的作用[D];郑州大学;2004年
10 仇华吉;猪繁殖与呼吸综合征病毒CH-la株基因组解析及其囊膜蛋白结构与功能分析[D];东北农业大学;2001年
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1 刘红亮;伪狂犬病病毒河南株的分离鉴定与TK基因的克隆和序列分析[D];河南农业大学;2003年
2 田双喜;传染性喉气管炎病毒内蒙98a株TK基因的克隆、序列分析及核酸探针的研究[D];内蒙古农业大学;2003年
3 胡涛;伪狂犬病病毒gD、gE、TK基因的克隆与通用转移载体的构建[D];河南农业大学;2003年
4 王琳;伪狂犬病毒冀A株TK基因的克隆、序列分析及TK~—株转移载体的构建[D];河北农业大学;2007年
5 胡潇;表达H5N1亚型禽流感病毒HA和NA基因重组鸭瘟病毒的构建[D];河北农业大学;2008年
6 苏鑫铭;伪狂犬病病毒上海株TK基因缺失株的构建及其生物学特性初步研究[D];南京农业大学;2003年
7 张馨月;鸭瘟病毒gH、TK、UL24基因的克隆与病毒转移质粒的构建[D];新疆农业大学;2007年
8 卞卡;hTERT基因启动子调控靶向自杀基因治疗喉癌的研究[D];第四军医大学;2006年
9 陈勇;含rPB-DR启动子和TK基因的重组腺病毒的构建和鉴定及对前列腺癌细胞的作用[D];第三军医大学;2006年
10 黄宝钦;猪伪狂犬病病毒FZJX株的分离鉴定及TK基因的克隆与序列分析[D];福建农林大学;2009年
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