春剑和大花蕙兰种间杂交种子无菌萌发及杂交后代的RAPD分析

【摘要】： 本研究以春剑‘翠仙’(Cymbidium longibracteatum 'cuixian')、大花蕙兰‘黄金虎’(C. Moring Moon'Great Tiger')、‘溪流’(C. hybridium Enzan Stream'Orpheus')为材料进行种间杂交,对杂交种子进行非共生萌发试验,并运用RAPD分子标记对杂交Fl代进行分析。本研究的目的是通过兰属种间杂交方法培育出新的种质,并在分子水平上评价杂交后代特性,为春剑与大花蕙兰的杂交育种进行基础性的探索工作。主要研究结果如下。 1.以春剑为母本,大花蕙兰为父本均能获得杂交果实,其中春剑‘翠仙’×大花蕙兰‘溪流’结果率最高,为78.5%；以大花蕙兰为母本,春剑‘翠仙’为父本,杂交结果率均为0；春剑为试材进行自交易于成功,结果率为100%。 2.杂交种子无菌萌发的最适培养基为：MS+NAA0.1mg/L+6-BA0.5mg/L+Tryptone 50mg/L+AC 1 000mg/L;原球茎增殖的最佳培养基为：1/2MS+NAA0.5mg/L+6-BA0.5 mg/L+KT0.05mg/L,增殖系数为6.07;直径大小为0.3cm的原球茎最适宜增殖培养,增殖系数为6.10；培养基中添加150mg／L酵母浸膏,对原球茎增殖有明显促进作用；原球茎分化芽苗的最佳培养基为：MS+NAA0.1 mg/L+6-BA 2.0mg/L+Tryptone250mg/L +AC1.0g/L,分化率为88.33%；原球茎分化丛生芽的最佳培养基为：MS+NAA0.2mg/L +Tryptone250mg/L+TDZ1.0mg/L,丛生芽增殖系数最高为5.38；适合根形成与生长的培养基为：MS+AC1.0g/L和MS+NAA 0.1 mg/L+AC 1.0g/L,生根率为100%,平均根长2.4-2.54cm；获得根数最多的培养基为：MS+NAA0.1 mg/L+AC0.5g/L,平均根数2.06条／苗；采用混合基质(腐殖土：陶粒=5：1混匀)栽植,成活率达93.02%。 3.用21个RAPD随机引物共扩增出180条复性好且清晰的条带,其中多态性DNA条带164条,占总带数的91.11%,平均每个引物产生8.57条带和7.81条多态性条带；杂交F1代偏向亲本大花蕙兰‘溪流’(X)遗传,与其相似性系数的变化范围0.7222-0.7722。