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《重庆医科大学》 2010年
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人参皂甙Rg1抑制人胃癌细胞增殖及机理研究

商义  
【摘要】:胃癌是我国最常见的恶性肿瘤之一,恶性程度高,5年生存率低,易发生腹腔广泛转移。其发病率占我国消化道恶性肿瘤的第一位,全身肿瘤的第三位。目前治疗胃癌的主要方法包括手术治疗、化学治疗、内镜下治疗、放射治疗、免疫治疗基因治疗、酶和中西医结合治疗等。中药配合化疗治疗胃癌可减轻由化疗引起的毒副反应,增加化疗药物的疗效。具有提高机体免疫力和杭癌能力,改善生活质量,副作用小,易被患者接受的优点。寻找低毒高效的抗肿瘤药物是目前研究新的抗肿瘤药物的趋势。我国传统医学中的中草药提取物为研制低毒高效的抗肿瘤药物提供了新的途径。目前,研究得较多的中药有人参、连黛、小蘖碱、大蒜、黄芪等。其中人参作为一种广泛应用的名贵中药,具有补元气,安神、益肺、生津、延缓衰老等功效。人参为五加科人参属植物人参Panax Ginseng C. A.Mey的干燥根,全身均可入药。人参的药理活性成分较多,包括皂甙、蛋白质、多肽、氨基酸、有机酸、维生素、脂溶性成分等。人参皂甙和人参多糖为主要活性成分,其中人参皂甙Rgl (ginseno-side Rgl)是人参主要活性成分,具有一定的抗肿瘤活性。但目前对于人参皂甙Rg1抗肿瘤机制还不十分清楚,本实验研究人参皂甙Rg1对体外培养的人胃癌细胞株BGC-823的抑制增殖和诱导凋亡作用,并探讨其作用机理。主要结果和结论如下: 1人参皂甙Rg1抑制BGC-823细胞增殖的研究。(1)以MTT法观察Rg1对BGC-823细胞增殖的抑制作用。结果显示,5 ug/ml、l0ug/ml、20ug/ml、40ug/ml、80 ug/ml Rgl、均可抑制细胞增殖,其中80ug/ml的作用最强(2)形态学研究:光镜下观察BGC-823胃癌细胞呈多边形或不规则形,贴壁生长。经用不同浓度G-Rgl处理过的处理组中许多细胞脱落成悬浮生长状态,悬浮的死亡胃癌细胞较多,细胞体积较小,细胞折光性较差,细胞较暗,细胞内黑色颗粒较多,随着浓度的增加变化越明显。80ug/ml G-Rgl作用48h开始出现凋亡的形态学改变,细胞悬浮,细胞核浓缩。随着浓度增加和作用时间延长,细胞凋亡数增多。提示G-Rgl能够直接抑制BGC-823细胞增殖。 2从细胞周期调控方面研究人参皂甙Rg1抑制增殖机制。流式细胞仪检测发现20 ug/ml G-Rgl处理BGC-823细胞48小时后G1期细胞百分比从58.25%上升到67.27%(P0.01)。结果表明G-Rgl使细胞生长阻滞于G1/GO期。采用RT-PCR(?)去检测细胞内p16、p21基因水平。凝胶成像分析系统分析发现5ug/ml、20ug/ml、40ug/ml G-Rgl诱导细胞周期抑制因子p16、p21基因表达量升高,并且随作用时间延长这种变化更加明显。提示G-Rg1抑制细胞增殖诱导细胞分化的作用与G-Rgl调控上述G1期细胞周期调节因子表达,使细胞增殖受阻于G1→S转换点有关。P16蛋白是作用于细胞分裂周期(Cell Division Cycle)关键酶之一的CDK4的抑制因子。CDK (cyclin-dependent kinase)与细胞周期素(cyclin又叫循环素)的复合体分别在细胞周期的不同时相发挥作用,启动DNA复制及诱发有丝分裂,CDKS可能是调控细胞周期装置的核心。CDK4与Cyclin的复合体参予G1-S转换的调控,p16蛋白抑制CDk4活性,最终阻止细胞进入S期。 3从诱导细胞凋亡方面研究人参皂甙Rg1的抑制增殖机制。流式细胞仪检测发现经5ug/ml、20ug/ml、40 ug/ml G-Rgl分别作用72小时的胃癌BGC-823细胞的凋亡率分别是25.9%±0.1%、26.2%±11%和41.40%±14.10%与对照组凋亡率0.2%±0.1%相比显著增加,且呈明显的剂量依赖性(P0.01),而各组间坏死率与对照组比较无显著差异(P0.05)。 本实验对人参皂甙Rg1抑制增殖作用及机制进行了一些实验性基础研究,为人参皂甙Rg1的临床应用提供了一定的理论依据。
【学位授予单位】:重庆医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:R285

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【参考文献】
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