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《重庆医科大学》 2011年
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聚焦超声辐照豚鼠慢性湿疹模型的生物学效应研究

陶轶妮  
【摘要】:背景 慢性湿疹是皮肤科的常见病,其特点是瘙痒明显,易反复,局部皮肤肥厚,患者因瘙痒而搔抓,搔抓后又加重皮疹及瘙痒而形成恶性循环。聚焦超声作为一种新兴的物理治疗手段已应用于妇科疾病、恶性肿瘤、外科止血等临床治疗,特别是在治疗外阴白色病变中已取得了显著疗效。慢性湿疹与大部分外阴白色病变在病因、临床表现及病理改变有诸多相似之处。已有研究直接或间接证实聚焦超声可用于治疗湿疹。而聚焦超声能否成为一种既有效又方便而安全的新的物理治疗方法是超声治疗皮肤病的重要研究方向之一。 目的 本实验用2,4-二硝基氯苯(DNCB)为抗原制备豚鼠慢性湿疹模型,观察聚焦超声用于慢性湿疹治疗的剂量及有效性和安全性,探讨聚焦超声治疗慢性湿疹的可能机制,为临床应用聚焦超声治疗慢性湿疹奠定理论基础。 方法 本研究分为4个部分: 1.形态学和病理学变化:选择健康豚鼠50只,分为模型组(40只)和正常组(10只),模型组每只背部剃毛2处,以2,4-二硝基氯苯(DNCB)为抗原,小剂量多次刺激豚鼠背部皮肤制备慢性湿疹模型。将40只模型随机分为1W、2W、3W组和对照组,每组10只,分别于辐照后7d、14d取皮肤组织,HE染色病理组织学检查。旨在探讨聚焦超声辐照豚鼠慢性湿疹模型豚鼠的皮肤病理结构改变。 2.超微结构改变:将32只豚鼠随机分为4组,辐照后1d、7d、14d和对照组,用2,4-二硝基氯苯(DNCB)制备豚鼠慢性湿疹模型。辐照组以CZF型超声治疗仪对模型皮肤真皮层进行连续直线辐照,功率3W,分别于辐照后1、7和14天取材,对照组不辐照立即取材,做透射电镜观察。探讨聚焦超声辐照豚鼠慢性湿疹模型豚鼠的皮肤超微结构改变。 3. IL-2和IL-4检测:超声辐照前,抽取正常组和模型组的外周血,辐照后7d、14d抽血,采用酶免疫(ELISA)检测血清IL-2和IL-4含量。探讨聚焦超声辐照慢性湿疹模型豚鼠后血清IL-2和IL-4的水平变化以及其在湿疹发病机制中的作用。 4. NGF蛋白和bFGF蛋白测定:超声辐照前,正常组和模型组取皮肤组织,辐照后7d、14d取皮肤组织,采用免疫组织化学技术研究超声辐射豚鼠皮肤后组织中NGF蛋白和bFGF蛋白的变化。探讨NGF蛋白和bFGF蛋白在慢性湿疹发病中的可能作用以及聚焦超声治疗湿疹的可能机制。 结果 1.大体观察:模型组豚鼠皮肤表现为慢性湿疹样皮损的特点。超声辐照后即刻出现皮肤充血水肿加重,皮肤完整,稍硬,皮温升高(3W2W1W),但均未见皮肤烧伤。第7天充血水肿渐退,淡红斑,少量鳞屑,仍稍硬,皮温正常。辐照组症状评分总分明显降低,与对照组相比差异具有统计学意义(P0.05)。第14天基本恢复正常。 2.组织学变化:湿疹模型表皮棘层肥厚,细胞间轻度水肿,真皮大量炎症细胞浸润。超声辐照后7天充血水肿消退,棘层肥厚减轻,真皮炎症细胞浸润减少,辐照后l4天真皮浅层少量炎症细胞浸润,部分胶原纤维增生,其余基本正常。真皮炎性细胞计数:1W组辐照后7天和14天均与对照组无显著差异(P0.05);2W组辐照后7天和14天均与对照组有显著差异(P0.01);3W组辐照后7天和14天均与对照组有显著差异(P0.001)。 3.电镜观察:模型组皮肤可见表皮角质层增厚明显,成纤维细胞线粒体肿胀、粗面内质网扩张,细胞间隙加大;辐照后第1天和7天可见血管内皮细胞线粒体肿胀、微吞饮小泡数量多,成纤维细胞线粒体肿胀、粗面内质网扩张,但细胞间隙变小;第14天基本恢复正常。 4.豚鼠血清IL-2水平均无明显差异。模型组豚鼠血清IL-4水平与正常组相比,明显升高,正常组和模型组比较差异有统计学意义(P0.0001)。聚焦超声能降低豚鼠升高的IL-4水平,辐照后7天, 2W、3W组与模型组有显著差异(P0.01);辐照后14天,辐照组(1W、2W、3W)均与模型组有显著差异(P0.001),辐照组与正常组无差异,7天和14天比较有显著差异(P0.05)。 5. NGF蛋白和bFGF蛋白均表达于表皮和真皮附属器的上皮细胞、成纤维细胞以及血管内皮细胞等的胞浆和胞膜。模型组的NGF蛋白和bFGF蛋白表达明显高于正常组(P0.001)。在聚焦超声辐照后7和14天,1W组与对照组无显著差异,2W组和3W组的NGF蛋白和bFGF蛋白表达明显低于对照组(P0.05,P0.01)。辐照后14天,比较2W和3W组的NGF蛋白和bFGF蛋白表达,发现3W组的吸光值更加接近豚鼠正常皮肤。 结论 1.聚集超声辐照豚鼠慢性湿疹模型可以有效地降低症状评分,初步结果显示3W也是安全的,因此聚焦超声对慢性湿疹的治疗是安全和有效的,在安全剂量内,超声辐照剂量越大,治疗效果越好,聚焦超声有利于皮肤炎症的恢复和组织的修复。 2.通过聚焦超声辐照豚鼠慢性湿疹模型的超微结构观察,聚焦超声可用于治疗湿疹,有利于微血管和胶原纤维的增生与修复,可使患处上皮细胞及真皮组织的超微结构趋于恢复正常。 3.聚焦超声能降低其升高的血清IL-4水平,对IL-2水平无显著影响,可能通过降低已经升高的IL-4水平,调节Th2分泌的IL-4之间的平衡,从而抑制Th2细胞功能发挥免疫调节作用。聚焦超声对豚鼠慢性湿疹模型有治疗作用,其作用机制可能与Th2型细胞因子有关。 4.聚焦超声辐照豚鼠慢性湿疹模型通过超声的生物学效应可使组织中NGF和bFGF恢复正常,进而有利于皮肤组织的修复。
【学位授予单位】:重庆医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:R758.23

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