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《重庆医科大学》 2011年
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金黄色葡萄球菌对万古霉素敏感性降低的流行病学调查和分子机制研究

张光艳  
【摘要】:目的逐年分析金黄色葡萄球菌对万古霉素的MIC值变化情况,评估其万古霉素MIC漂移趋势,了解VraSR双组份系统在金黄色葡萄球菌对万古霉素敏感性降低中的作用。 方法收集2007-2009年重庆和广州地区四家三甲医院临床分离的MRSA菌株,重庆的医院为A院,广州地区三家医院分别为B院、C院、D院。微量肉汤稀释法测定万古霉素MIC ,计算MIC50,MIC90,MIC值几何均数,敏感率及耐药率,分析其MIC变化趋势。然后,对MRSA菌株进行PCR检测vraSR基因,测序分析,并通过genebank的Blast与N315基因组比对分析,了解其基因有无氨基酸突变。另外,体外用低剂量万古霉素诱导MRSA临床菌株,对亲本菌株及诱导后不同MIC值阶段的菌株检测vraSR基因,分析有无氨基酸突变,行RT-PCR检测vraSR基因表达量变化。 结果2007年至2009年,临床分离MRSA菌株共779株,其中2007年264株,2008年342株,2009年173株。研究总体对万古霉素MIC几何均值为0.911、0.954、0.976μg/ml,呈逐年上升趋势,(P0.001),在各个医院中,A院MIC几何均值分别为1.052、1.06、1.069μg/ml,呈逐年上升趋势( P0.001)。B院MIC几何均值分别为0.885、0.901、1.006μg/ml,呈逐年上升趋势( P0.001)。C院MIC几何均值分别为0.915、0.954、0.926μg/ml,无逐年上升趋势( P0.05)。D院MIC几何均值分别为1.025、1.001、0.865μg/ml,无逐年上升趋势( P0.05)。MRSA菌株均检测出双组份系统vraSR基因。1株MIC=2μg/mL的MRSA菌株vraR的第59位谷氨酸突变为天冬氨酸。对10株MRSA进行万古霉素体外诱导实验,4天后5株菌株MIC值由0.75μg/ml上升为2μg/ml,6天后1株菌株MIC值从2μg/ml上升为4μg/ml,12天后3株株菌株MIC值从2μg/ml上升为4μg/ml,1株菌株MIC值仍为2μg/ml,其余5株MIC值仍为0.75μg/ml。诱导后的不同阶段菌株vraSR基因未发现突变,vraR基因表达量随MIC值上升而增加。 结论总体MRSA菌株的万古霉素MIC存在漂移趋势。其中,A院和B院可见漂移趋势,C院和D院未见漂移趋势。所有MRSA菌株均检测出双组份系统vraSR基因,发现一例vraR基因突变。在万古霉素体外诱导下,MRSA对万古霉素的MIC可由0.75μg/ml达到4μg/ml,同时菌株的vraR表达量也随MIC值增加而上调,但未发现vraSR基因突变。
【学位授予单位】:重庆医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:R181.3

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