收藏本站
《重庆医科大学》 2011年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

二聚体突变引物定量PCR技术的研发及其临床应用

夏乾峰  
【摘要】:实时聚合酶链式反应(real-time polymerase chain reaction,real-time PCR)技术分为内掺式染料技术和探针技术两类。内掺式染料技术方法简单,成本较低,但特异性差,故不适于临床检测。探针技术采用了基于荧光淬灭原理或荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer, FRET)的探针,包括TaqMan探针、Amplifluor探针、分子信标、蝎型探针等。这些探针均是在与模板互补的同一寡核苷酸链上,分别标记荧光基团和淬灭基团,特异性高,定量准确,因而被广泛应用于临床诊断中。但这些探针均属于多标记探针,其合成难度和成本较高,制约了其推广应用。不少研究人员试图采用单标记探针来降低合成难度和成本,如杂交探针(hybridization probes)和荧光置换探针(displacing probes),取得了较好效果。但为防止探针与靶序列杂交引起自身延伸而被破坏,仍然需要在探针末端磷酸化来阻断其延伸,因此,并非真正意义的单标记探针技术。 基于上述分析,本课题设计了一种全新的二聚体突变引物,其具有独特的结构,为真正意义的单标记探针。与其它多标记荧光探针相比,二聚体突变引物有以下优点: 1.结构上具有天然的“热启动”功能,增加了方法的特异性; 2.荧光报告基团和淬灭基团空间距离近,报告基团可被有效抑制,降低了方法的本底,一旦扩增开始两者便彻底分离,产生的荧光信号强,增加了方法的灵敏度; 3.真正实现荧光探针的单标记,降低了合成、纯化难度,因此降低了成本。 这种新型定量检测系统既具有染料法对新生双链DNA均能示踪、成本低的特点,又具有探针法高特异性,是一种高通用性、高特异性和灵敏性、操作简单、价廉的新型real-time PCR技术。 我们选取乙型肝炎病毒和沙眼衣原体为具体研究对象,系统地对二聚体突变引物技术进行方法学和临床应用价值评价。证实二聚体突变引物技术具有高灵敏度、宽线性范围、重复性好、检测成本低等优点,可用于临床病原体检测或流行病学调查研究。
【学位授予单位】:重庆医科大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:R440

手机知网App
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 张静静;马长艳;孙玉洁;;鉴定定量PCR不同引物对的扩增效率[J];南京医科大学学报(自然科学版);2006年08期
2 从玉文;mRNA差别显示技术的研究进展[J];国外医学.分子生物学分册;1996年04期
3 邓少丽,罗阳;荧光定量PCR技术及其在临床上的应用[J];国外医学.临床生物化学与检验学分册;2002年05期
4 张巍,沈倍奋;一种快速简便的定点突变方法[J];免疫学杂志;2003年S1期
5 张宏伟,徐永俊,张丽霞,丁鹏,陈嵘;小鼠ScFv基因片段的构建[J];中国公共卫生;2003年05期
6 曹孟德,秦东春,郭小兵,苏堤,王东升,苏天水,燕桂香;HLA-DR快速基因分型PCR-SSP方法的建立[J];河南医科大学学报;1999年01期
7 裴德翠;AFLP:DNA指纹分析的有力手段[J];微生物学免疫学进展;2002年03期
8 吴勤学,李新宇,李涛,侯伟;几种检测麻风菌的基因扩增试验的比较研究[J];中国麻风皮肤病杂志;1996年03期
9 孙明林,薛采芳;疟疾复合PCR检测系统的建立[J];中国寄生虫学与寄生虫病杂志;1999年02期
10 王宁霞,李扬秋,蒋光愉,徐以浩;PCR技术检测大肠肿瘤及肿瘤样病变中EB病毒DNA[J];广东医学;1999年03期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 周素娟;张铁军;何纳;;HCV的C/E1区PCR扩增方法的改进[A];华东地区第十次流行病学学术会议暨华东地区流行病学学术会议20周年庆典论文集[C];2010年
2 谭诗文;余波;冉懋韬;蔡一鸣;艾玉萍;王璇;张华;;牛源HBV套式PCR方法建立及其S靶基因同源性分析[A];中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第八次学术研讨会论文集[C];2010年
3 张太翔;凌宗帅;徐彪;梁成珠;朱来华;孙军;王洪兵;;实时荧光定量PCR检测猪流感病毒方法的建立[A];动物检疫学分会2010年学术年会论文集[C];2010年
4 陈信忠;任聪;龚艳清;王寿昆;;实时荧光定量PCR法检测对虾白斑综合征病毒[A];经济发展方式转变与自主创新——第十二届中国科学技术协会年会(第三卷)[C];2010年
5 潘康成;冯兴;崔恒敏;张亚兰;赵爽;;实时荧光定量PCR检测鸡口服枯草芽孢杆菌后肠道芽孢杆菌数量变化[A];第四届第十次全国学术研讨会暨动物微生态企业发展战略论坛论文集(下册)[C];2010年
6 薛飞;李莉;李文庆;李校;邹方东;李静;;基于三重引物的PCR技术鉴定四川雉鹑等雉科鸟类的性别[A];四川省动物学会第九次会员代表大会暨第十届学术研讨会论文集[C];2011年
7 朱振营;林祥梅;刘建;吴绍强;仇松寅;李宁;王建武;薛振华;;转人溶菌酶基因奶牛多重PCR检测方法研究[A];中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十五届学术研讨会论文集(上册)[C];2010年
8 孔艳;吴小红;杨立宏;安祺;董关木;俞永新;;逆转录酶活性检测荧光定量PCR方法[A];2010年中国药学大会暨第十届中国药师周论文集[C];2010年
9 范晴;谢芝勋;刘加波;庞耀珊;邓显文;谢志勤;谢丽基;彭宜;;TaqMan实时荧光PCR快速检测牛病毒性腹泻病毒[A];中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第八次学术研讨会论文集[C];2010年
10 郝大程;李明霞;肖培根;张宇;陈玮琦;;定量细胞端粒长度的实时定量PCR方法(英文)[A];2011年中国药学大会暨第11届中国药师周论文集[C];2011年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 通文;Bio—Rad公司推出快速定量PCR反应液[N];中国医药报;2008年
2 通言;ABI实时定量PCR仪获准与rRT—PCR Flu Panel联用[N];中国医药报;2008年
3 罗伊;DNA帮农民买放心种[N];农民日报;2002年
4 李金明;PCR绝非简单的玩艺儿[N];健康报;2003年
5 本报记者 邓丽;甲型H1N1流感快速诊断试剂揭秘[N];21世纪经济报道;2009年
6 郭伟立;实时、个体、高效[N];中国医药报;2011年
7 刘浦泉;北京将建“国门商务区”[N];中国乡镇企业报;2004年
8 中国农业大学 查红波;猪的牛病毒性腹泻病毒感染[N];中国畜牧兽医报;2005年
9 刘红亮 袁逢新 罗国琦 李华民 李艳芬;PCR技术在畜禽细菌病诊断中的应用[N];中国畜牧报;2002年
10 本报记者 党鹏;72亿地王曲终人不散 出让高收益引物权争议[N];中国经营报;2007年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 夏乾峰;二聚体突变引物定量PCR技术的研发及其临床应用[D];重庆医科大学;2011年
2 张在平;荧光定量PCR检测禽白血病病毒与RNA干扰抑制J亚群禽白血病病毒复制的研究[D];内蒙古农业大学;2010年
3 渠柏艳;基于血液样品和微流控芯片技术的细胞分离、PCR扩增及DNA测序方法研究[D];东北大学;2009年
4 李泽松;缺失型α-地中海贫血基因诊断芯片及在分子流行病学研究中的应用[D];重庆大学;2008年
5 张丽;实时定量PCR检测儿童急性早幼粒细胞白血病PML/RARα融合基因[D];北京协和医学院;2011年
6 陈智勇;胰腺癌相关基因mucin4的初步研究[D];第二军医大学;2005年
7 王彦君;细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4基因微卫星多态性与炎症性肠病相关性研究[D];吉林大学;2008年
8 马孟根;猪源致病性沙门氏菌耐药基因PCR和基因芯片检测技术研究[D];四川大学;2005年
9 肖性龙;多重荧光PCR与液相芯片高通量病原体检测体系的建立与应用[D];华南理工大学;2010年
10 陈寒玉;多氯联苯类环境激素的实时定量免疫PCR检测方法研究[D];东华大学;2009年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 冯海永;羊肉产品肉种来源的分子追溯研究[D];中国农业科学院;2010年
2 吴金光;两种硅酸盐细菌特异性PCR方法的建立及应用[D];浙江理工大学;2010年
3 王稳;利用RT-PCR验证基于小鼠外显子芯片发现的脑缺血相关基因表达的研究[D];西北农林科技大学;2010年
4 汪巧;转cry1Ac基因抗虫棉鄂杂棉1号外源插入序列分析及特异性PCR检测方法[D];中国农业科学院;2011年
5 金戈;博尔纳病病毒磷蛋白的原核表达和p24片段荧光定量PCR试剂盒的研制开发[D];重庆医科大学;2011年
6 谭景尹;PCR—膜芯片~(?)技术检测结核杆菌耐药基因突变的应用研究[D];广西医科大学;2011年
7 王文娟;食源性致病菌多重PCR检测试剂盒的研制与应用[D];山东农业大学;2011年
8 陈贞;转基因作物的多重PCR检测体系的研究[D];暨南大学;2011年
9 刘志国;实时多重荧光PCR快速鉴别布鲁菌方法的建立[D];内蒙古农业大学;2010年
10 陈继军;TaqMan实时定量PCR检测轮状病毒G4型VP7基因方法的建立[D];兰州大学;2010年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026