收藏本站
《重庆医科大学》 2011年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

卡氏肺孢子菌p55-v3DNA疫苗的构建及其对大鼠免疫保护作用的研究

冯燕梅  
【摘要】:目的: 本研究拟采用分子生物学和分子免疫学的方法构建卡氏肺孢子菌(Pneumocystis carinii, PC) p55-v3 DNA疫苗,同时将p55-v0抗原作为阳性对照,免疫SD大鼠后,对p55-v3 DNA疫苗预防PC的作用进行评定,并进一步对其免疫作用机理进行探讨,为阐明PC与宿主相互作用的分子机制及新型疫苗的研制提供基础,进而为PCP的防治提供一种新的方法和手段。 方法: 1.建立PCP动物模型并制备PC抗血清。 2.提取PC感染鼠肺组织总RNA,运用RT-PCR扩增p55-v3和p55-v0抗原基因。 3.运用分子克隆的方法构建p55-v3和p55-v0的真核表达载体。 4.运用脂质体2000将鉴定正确的真核表达载体转染COS-7细胞,通过RT-PCR和Western-blot分别在mRNA及蛋白水平对所转染细胞两种抗原蛋白的表达进行检测。 5.动物实验:分别将p55-v3、p55-v0 DNA疫苗免疫SD大鼠(以pVAX1空载体及PBS作为对照)后,按常规方法构建PCP模型,于第6周处死大鼠,通过一般情况、肺重/体重、肺印片包囊计数、病理切片及体液免疫、细胞免疫的检测,观察p55-v3和p55-v0 DNA疫苗对大鼠的免疫保护作用并进行比较,从而对p55-v3的免疫保护机制及效应进行评价。 结果: 1.模型鼠肺印片(GMS染色),可见大量被染成棕黑色的PC包囊。免疫组化证实血清中抗PC抗体阳性。 2.以总RNA为模板进行RT-PCR后,1 %琼脂糖凝胶电泳分析,在1200 bp、1000 bp左右处见一特异性条带,分别与p55-v0、p55-v3抗原基因大小相符。 3.将扩增产物与T载体连接,测序正确后构建重组载体pVAX-p55-v0,pVAX-p55-v3。酶切鉴定表明p55-v3、p55-v0抗原基因片段已成功克隆入pVAX1载体。 4.将重组真核表达载体转染COS-7细胞后提取总RNA,以其为模板进行RT-PCR,1 %琼脂糖凝胶电泳观察可见重组质粒转染组有明显的特异性条带,分别位于1200 bp及1000 bp左右,其大小与p55-v0及p55-v3基因片段一致,而空质粒转染组仅见内参(GAPDH)条带,未见特异性条带;Western-blot分析发现重组质粒转染组均可见约55 kDa大小的特异性条带,提示在COS-7细胞中重组质粒从mRNA及蛋白水平均有表达。 5.构建的DNA疫苗免疫SD大鼠后发现pVAX-p55-v0及pVAX-p55-v3免疫组肺重/体重、包囊计数较PBS及pVAX1空载体组明显减少,而pVAX-p55-v0与pVAX-p55-v3免疫组之间无显著性差异。病理切片观察发现PBS及pVAX1空载体组(HE染色)肺泡间隔增宽,间质水肿明显,GMS染色下可见肺泡壁及间质中大量被染成棕黑色的PC包囊,而pVAX-p55-v0及pVAX-p55-v3免疫组明显减轻,且pVAX-p55-v0与pVAX-p55-v3之间无显著性差异。与对照组相比,免疫组血清IgG显著增高,脾淋巴细胞显著增殖,血清IFN-γ,IL-2增高明显,pVAX-p55-v0及pVAX-p55-v3免疫组之间无明显差异。各组大鼠血清IL-4水平无显著性差异, 结论: 1.成功构建PCP模型并制备PC抗血清。 2.成功扩增p55-v0及p55-v3基因。 3.成功构建重组真核表达载体pVAX-p55-v0及pVAX-p55-v3。 4.重组真核表达载体pVAX-p55-v0及pVAX-p55-v3体外转染COS-7细胞,RT-PCR及Western-blot鉴定证实在mRNA及蛋白水平均有表达。 5.重组DNA疫苗pVAX-p55-v3可诱导大鼠产生部分保护性免疫应答,其免疫保护效应与p55-v0 DNA疫苗无显著性差异。
【学位授予单位】:重庆医科大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:R519;R346

【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 刘成伟,陈雅棠,李文桂,余登高,刘江;双氢青蒿素治疗实验大鼠卡氏肺孢子虫肺炎的透射电镜观察[J];重庆医学;2003年06期
2 唐小葵,倪小毅,陈雅棠,王健,吴亚梅,卢萍;白果内酯抗大鼠卡氏肺孢子虫肺炎的实验研究[J];第三军医大学学报;2003年10期
3 Varsha Thakur;Nirupma T Pati;Rajkumar C Gupta;Shiv K Sarin;;Efficacy of Shanvac-B recombinant DNA hepatitis B vaccine in health care workers of Northern India[J];Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International;2010年04期
4 易亮衡;陈金铃;秦永伟;朱丹丹;何兴新;段义农;;卡氏肺孢子虫p55基因片段DNA疫苗的免疫原性研究[J];现代预防医学;2010年13期
5 陈代雄,谢瑾灼;香菇多糖对卡氏肺孢子虫肺炎预防作用的实验研究[J];中国公共卫生;2001年10期
6 秦元华;戴晓冬;郑莉莉;陶琳;崔昱;;中药鸦胆子及补骨脂抗大鼠卡氏肺孢子虫肺炎的疗效观察[J];中国药学杂志;2007年04期
7 瞿介明,容朝晖,何礼贤,潘珏,陈雪华;Relationship between the burden of pneumocystis carinii, the inflammatory reaction and lung injury in pneumocystis carinii pneumonia[J];Chinese Medical Journal;2000年12期
8 叶彬,郑玉强,武卫华,张静;Iron chelator daphnetin against Pneumocystis carinii in vitro[J];Chinese Medical Journal;2004年11期
9 陈殿学,李建春,孙宏伟;保元汤加减对卡氏肺孢子虫肺炎模型大鼠的免疫调节作用初探[J];中国寄生虫病防治杂志;2003年05期
10 刘江;黄敏君;安亦军;卢思奇;郭增柱;;大蒜素治疗大鼠肺孢子虫肺炎的实验研究[J];中国病原生物学杂志;2006年02期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 石毅;;核酸疫苗的研究进展[J];安徽农业科学;2006年04期
2 赵俊龙,陈焕春,吕建强,王祥,肖少波,周复春;猪细小病毒结构蛋白VP_1和VP_2的基因免疫研究[J];病毒学报;2003年01期
3 谷俊朝;刘建;;卡氏肺孢子虫肺炎的治疗策略进展[J];北京医学;2009年11期
4 李小丽;阴赪宏;;大鼠肺孢子菌肺炎的中药治疗研究进展[J];北京中医药;2009年05期
5 张玉梅;李波清;乔媛媛;孙旭红;耿丽;;尿路致病性大肠杆菌Ⅰ型菌毛fim H基因真核表达载体的构建及鉴定[J];滨州医学院学报;2010年06期
6 刘成伟,陈雅棠,李文桂,余登高;扫描电镜观察双氢青蒿素对大鼠体内卡氏肺孢子虫表面形态的影响[J];重庆医学;2004年06期
7 孙岚;许炽熛;郭增柱;;抗肺孢子虫药物的研究进展[J];传染病信息;2008年01期
8 吴志洪;登革病毒核酸疫苗[J];郴州医学高等专科学校学报;2003年03期
9 郭步平;李宇飞;;大蒜素体外抗阴道毛滴虫效果的实验研究[J];长治医学院学报;2010年03期
10 陈蕊雯,林懿,戴建新,周凤娟,孙树汉;乙肝核心抗原DNA疫苗的构建及其免疫原性分析[J];第二军医大学学报;2000年06期
中国重要会议论文全文数据库 前2条
1 黄达娜;吴少庭;袁仕善;张仁利;高世同;耿艺介;;弓形虫表面抗原SAG1真核表达重组质粒的构建与表达[A];全国寄生虫学与热带医学学术研讨会论文集[C];2006年
2 徐向田;;中医“治未病”思想与乙肝三级防治技术理论探讨[A];中医理论临床应用学术研讨会论文集[C];2007年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 刘栋;畜禽补体C3d基因克隆及序列分析和重组鸡C3d免疫佐剂效果研究[D];山东农业大学;2010年
2 郭宪;抑制素基因工程疫苗的研究与应用[D];甘肃农业大学;2010年
3 王燕;两株海洋病原菌的分离鉴定、致病机理研究及三株海洋新菌的分类鉴定[D];中国海洋大学;2010年
4 张德庆;C3d分子佐剂核酸疫苗的构建与免疫效果研究[D];山东农业大学;2011年
5 于淼;山东鸡新城疫病毒分离鉴定与Ⅱ+Ⅶ基因型灭活疫苗研究[D];南京农业大学;2009年
6 寇志华;钩端螺旋体保守性抗原与疫苗研究[D];第二军医大学;2001年
7 张冉;日本血吸虫新基因克隆及DNA疫苗的构建和保护性研究[D];中南大学;2003年
8 任晓峰;猪传染性胃肠炎病毒TH-98株S基因多表达系统与DNA疫苗的研究[D];东北农业大学;2003年
9 吴绍强;鸡球虫核酸疫苗的研究[D];中国农业大学;2003年
10 骆旭东;结核分枝杆菌Ag85B-MPT64融合基因疫苗对鼠结核杆菌感染的保护作用[D];重庆医科大学;2003年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 周晓芬;金黄色葡萄球菌肠毒素B作为免疫佐剂的研究[D];华中农业大学;2010年
2 刘莉;HSV-2 gD模拟抗原表位、IL-18重组核酸疫苗的构建及免疫效果观察[D];泰山医学院;2010年
3 张小娟;巢式PCR方法检测卡氏肺孢子虫的研究[D];广西医科大学;2011年
4 夏庆祥;猪C3d分子佐剂增强PRRSV GP5核酸疫苗免疫效果的研究[D];山东农业大学;2011年
5 刘星;BCR-ABL-pIRES-GM-CSF融合基因疫苗在BALB/c小鼠中安全性的检测[D];暨南大学;2011年
6 彭波;沙白肺炎合剂对反复SP感染老龄大鼠肺脏TNF-α、IFN-γ等因子的调节作用[D];成都中医药大学;2011年
7 易亮衡;卡氏肺孢子菌p55基因片段DNA疫苗免疫保护作用的研究[D];南通大学;2010年
8 吴玉蓉;瑞香素联合母牛分支菌治疗卡氏肺孢子菌肺炎的实验研究[D];重庆医科大学;2011年
9 耿丽;尿路致病性大肠埃希菌Ⅰ型菌毛fimH基因疫苗对小鼠的免疫保护性研究[D];山东大学;2011年
10 芦晓立;羊痘病毒P32基因与羊CD58基因共表达质粒的构建及其表达产物免疫活性分析[D];甘肃农业大学;2010年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 罗阳,吴耕书,张荔彦,杜晶;大蒜素改善GJIC功能及抗氧化作用的实验研究[J];癌变.畸变.突变;1998年06期
2 童守全,邱加闽;卡氏肺孢子虫肺炎1例报告[J];重庆医学;1997年02期
3 刘成伟,陈雅棠,李文桂,余登高;扫描电镜观察双氢青蒿素对大鼠体内卡氏肺孢子虫表面形态的影响[J];重庆医学;2004年06期
4 贾维胜;张艮甫;黄赤兵;范明齐;;肾移植术后卡氏肺孢子虫肺炎的诊治及预防[J];重庆医学;2006年16期
5 唐小葵,倪小毅,陈雅棠,王健,吴亚梅,卢萍;白果内酯抗大鼠卡氏肺孢子虫肺炎的实验研究[J];第三军医大学学报;2003年10期
6 沈蔚霞,朱良;卡氏肺孢子虫的超微结构[J];国外医学(寄生虫病分册);1996年01期
7 施晓华;卡氏肺孢子虫肺炎的预防和治疗进展[J];国外医学(寄生虫病分册);1996年02期
8 李焱;艾滋病病人中的几种机会致病原感染:念珠菌病、肺孢子虫病、隐孢子虫病、弓形虫病[J];国外医学(寄生虫病分册);1999年06期
9 黄学亮,冯曼玲,孙丽静;艾滋病的治疗现状[J];河北医药;2005年04期
10 张帆,卢思奇;卡氏肺孢子虫的分类、命名、体外培养及其动物模型的建立[J];寄生虫与医学昆虫学报;2004年04期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 王洪涛;;γ-干扰素在幽门螺杆菌小鼠模型炎症反应及免疫保护中的作用[J];国外医学(微生物学分册);2000年04期
2 卜玲毅,石佑恩,甘燕,朱晓华,宁长修,朱红刚;日本血吸虫Mr23000抗原与白细胞介素-12多价DNA疫苗诱导小鼠保护性免疫的研究[J];中国寄生虫学与寄生虫病杂志;2005年02期
3 张燕丽;曹丽艳;芦赟;蔡志杰;王艳华;付宝权;李文卉;张德林;;弓形虫GJS株pcDNA3-MIC3核酸疫苗的研究[J];中国兽医学报;2009年10期
4 何凌;郑彩娥;黄春苓;余绮玲;周倩;王燕;梁伟;肖正华;;1,25-二羟维生素D_3对胰岛β细胞免疫保护作用[J];生物医学工程与临床;2010年04期
5 陈志华;初连瑞;徐晓平;苏新;;痢疾杆菌有毒株及其变异株免疫保护作用的比较[J];军事医学科学院院刊;1991年03期
6 郑铃,王芝敏,刘超斌,郑秀芬,陈锦英;泌尿道致病性大肠埃希菌PapG重组蛋白对小鼠尿道上行感染的免疫保护作用[J];中国生物制品学杂志;2005年04期
7 李春艳;余龙江;刘智;朱路;朱晓华;胡媛;石佑恩;;日本血吸虫DNA多价疫苗pVIVO_2SjFABP-23的构建及其保护性免疫[J];中国人兽共患病学报;2006年02期
8 肇毅;陆森;成峰;华一兵;吴文溪;王学浩;;大鼠肝肠联合移植后肝对小肠的免疫保护作用[J];世界华人消化杂志;2006年19期
9 余传信;殷旭仁;李健;吴宇迪;华万全;梁幼生;高琪;;重组日本血吸虫四跨膜蛋白第二亲水基团对小鼠免疫保护作用的研究[J];中国血吸虫病防治杂志;2009年01期
10 李道坤;鲍朗;张英;孙湛;;赖型钩端螺旋体OmpA外膜基因Loa22重组卡介苗的构建及其免疫蛋白表达[J];四川大学学报(医学版);2010年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 陆书华;钟启平;董海新;;临床多重耐药菌脂多糖脂质体的制备及免疫保护作用[A];中华医学会第九次全国检验医学学术会议暨中国医院协会临床检验管理专业委员会第六届全国临床检验实验室管理学术会议论文汇编[C];2011年
2 李先富;潘秀珍;韩明月;王长军;唐家琪;;2型猪链球菌ZnuA蛋白免疫保护作用的研究[A];华东地区第十次流行病学学术会议暨华东地区流行病学学术会议20周年庆典论文汇编[C];2010年
3 方瑞;赵俊龙;周艳琴;姚宝安;;弓形虫MIC3自杀性DNA疫苗的构建及免疫保护作用研究[A];全国寄生虫学与热带医学学术研讨会论文集[C];2008年
4 魏雪涛;李颖;鲍恩东;;重组火鸡疱疹病毒的构建及其免疫保护作用[A];中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十三次学术讨论会和中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十二次学术讨论会论文集[C];2005年
5 葛宁灵;叶胜龙;;IL-2和B7-1基因共转染瘤苗预防小鼠肝癌形成的实验研究[A];第八届全国肝癌学术会议论文汇编[C];2001年
6 陈烨;王继德;叶桂安;张亚历;周殿元;;幽门螺杆菌重组粘附素rHpaA免疫保护作用的动物实验研究[A];中国中西医结合学会第十二次全国消化系统疾病学术研讨会论文汇编[C];2000年
7 穆飞飞;孙龑;刘乐锋;李闰婷;邓洪宇;佟春玉;姜海芳;陈亮;呼锐;朱战波;崔玉东;;无乳链球菌Sip蛋白的表达及免疫保护作用研究[A];第二届全国人畜共患病学术研讨会论文集[C];2008年
8 丁剑冰;;Eg95/XJ基因疫苗对细粒棘球蚴感染小鼠的免疫保护作用及其机制的研究[A];第六届全国免疫学学术大会论文集[C];2008年
9 陈洁;陈旻湖;朱森林;陈为;;大肠杆菌不耐热内毒素(LT)加幽门螺杆菌抗原经口免疫对小鼠幽门螺杆菌感染的免疫保护作用[A];中国中西医结合学会第十二次全国消化系统疾病学术研讨会论文汇编[C];2000年
10 王庆敏;陈蕊雯;戴建新;孙树汉;;IL-2重组质粒增强了副肌球蛋白核酸疫苗的免疫保护作用[A];中国生物工程学会第三次全国会员代表大会暨学术讨论会论文摘要集[C];2001年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 李杰;新型疫苗正在研制[N];科技日报;2009年
2 林明贵 金关甫;DNA疫苗 战胜结核的希望[N];健康报;2003年
3 ;关爱生命 播种健康[N];雅安日报;2005年
4 王学领;鸡群气雾免疫6注意[N];河北农民报;2008年
5 王迪 桔梗;寻找通用型流感疫苗[N];医药经济报;2009年
6 孙现海;禽病免疫失败原因剖析[N];中国畜牧报;2002年
7 朱国旺;治疗RSA中西医结合前景广阔[N];中国医药报;2004年
8 衣晓峰;哈医大肝胰联合移植研究获进展[N];中国医药报;2004年
9 记者 蒋炜宁 通讯员 陶子;警惕,结核病有抬头之势[N];宁波日报;2009年
10 任绍敏;流行病学专家姜庆五:“墨西哥流感”已是强弩之末[N];第一财经日报;2009年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 冯燕梅;卡氏肺孢子菌p55-v3DNA疫苗的构建及其对大鼠免疫保护作用的研究[D];重庆医科大学;2011年
2 肖异珠;金黄色葡萄球菌重组表皮剥脱毒素的表达及其抗体的免疫保护作用研究[D];重庆医科大学;2010年
3 胡雪梅;日本血吸虫(中国大陆株)线粒体相关蛋白分子及其抗原表位的克隆和免疫保护作用的研究[D];南京医科大学;2001年
4 陈志琳;表达马立克氏病病毒gl基因重组鸡痘病毒的构建及其免疫保护作用[D];扬州大学;2002年
5 刘志国;西尼罗病毒多表位疫苗研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2007年
6 李宝全;H9亚型禽流感病毒抗独特型抗体的研制与其免疫原性的初步分析[D];山东农业大学;2005年
7 郑铃;致肾盂肾炎大肠埃希菌粘附素基因papG的克隆表达及其免疫保护作用的初步研究[D];天津医科大学;2003年
8 张雪莲;表达血清1、3型马立克氏病病毒gB主要抗原表位的重组CVI988病毒构建及其免疫保护作用[D];南京农业大学;2003年
9 黄文;重组幽门螺杆菌口服脂质体疫苗的制备及其免疫保护作用的基础研究[D];中国人民解放军第一军医大学;2003年
10 张冬梅;恶性疟原虫主要裂殖子表面蛋白1的表达及免疫保护作用的研究[D];第二军医大学;2001年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 王永玲;腺胃型传染性支气管炎病毒的分离、鉴定及其免疫保护作用的研究[D];山东农业大学;2003年
2 陆吉虎;霍乱弧菌tcpA基因的克隆表达及其免疫保护作用研究[D];安徽农业大学;2008年
3 王晓婷;日本血吸虫多价DNA疫苗的研究[D];江苏省血吸虫病防治研究所;2005年
4 鲁飞;密码子优化联合体内电穿孔增强日本血吸虫TPI DNA疫苗免疫保护作用的研究[D];江苏省血吸虫病防治研究所;2009年
5 戴洋;日本血吸虫疫苗联合应用及体内电穿孔技术的研究[D];江苏省血吸虫病防治研究所;2008年
6 刘微;Tim-3阻断对H.pylori感染免疫致病和疫苗免疫保护作用影响及机制的研究[D];南昌大学;2010年
7 张俊;云芝糖肽对环磷酰胺所致免疫抑制小鼠的免疫保护作用[D];南京中医药大学;2012年
8 钱莺娟;串联表达GA株MDV gB主要表位基因重组鸡痘病毒的构建及其免疫保护作用[D];南京农业大学;2003年
9 呼锐;大肠杆菌OmpA蛋白的表达及免疫保护作用[D];黑龙江八一农垦大学;2010年
10 王小波;呼吸道合胞病毒治疗性单克隆抗体的制备及其免疫保护作用研究[D];安徽医科大学;2010年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026