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《重庆医科大学》 2011年
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CRMP-2的磷酸化对缺血再灌注脑损伤后神经再生的影响及机制研究

王恬竹  
【摘要】:目的排斥性导向分子(repulsive guidance molecule,RGMa)是中枢神经系统受损后过度表达的抑制轴突再生的蛋白之一,具有轴突排斥及诱导生长锥塌陷的作用。生长锥塌陷后,轴突的结构受到严重破坏,将导致神经突起间联系的中断,细胞间信息的传递受阻,最终导致神经功能的损害。在脑缺血/再灌注损伤动物模型中,观察到其明显抑制轴突再生、阻碍神经功能恢复的不良影响。同时发现在成年人局灶性缺血的脑片中,RGMa免疫阳性的细胞主要聚集在梗死区白质、出血区、梗死中心及梗死区周围。因此,通过特异性RNA干扰(RNA interference,RNAi),抑制其基因转录水平,进而下调蛋白表达,可能有助于轴突的再生及神经功能的恢复。此外,目前对于RGMa发挥抑制作用的细胞内信号途径并不清楚,可能与Rho激酶(Ras homologous kinase,Rho-kinase)下游分子塌陷反应介导蛋白-2(collapse response mediator protein-2,CRMP-2)有关。为了寻找到更合适的干预靶点,使缺血性损伤后的神经再生更为容易,神经功能的康复更为完全,对其作用机制的探索显得非常重要。本研究的结果,更为基础研究向临床应用转化提供了良好的理论依据。 方法 1.成年雄性SD大鼠132只,随机分为:正常组,假手术组,MCAO/再灌注组,PBS注射组,rAd-HK组,rAd-shRGMa组,取手术后第2天、第7天为两个观察时间点,采用“线栓法”制作MCAO/再灌注模型,缺血侧皮质立体定向注射RGMa特异性重组腺病毒rAd-shRGMa及空载体,通过RT-PCR、免疫组织化学/荧光方法检测缺血侧脑皮质内RGMa与CRMP-2 mRNA、蛋白的表达水平; 2.成年雄性SD大鼠66只,分组同上,制作MCAO/再灌注模型,给予腺病毒干预,采用免疫组织化学方法检测缺血侧皮质内NF200的表达; 3.对各组大鼠进行神经功能评分; 4.成年雄性SD大鼠48只,随机分为:正常组,MCAO/再灌注组,rAd-HK组,rAd-shRGMa组,用Western blot检测RGMa、CRMP-2、pCRMP-2蛋白的表达,采用统计学方法对各分子间蛋白表达的关系进行相关性分析; 5.新生鼠皮质神经元原代培养,采用细胞免疫荧光方法进行神经元鉴定、纯度计算,以重组的RGMa蛋白体外诱导,光镜下观察神经元轴突形态、长度变化,用Western blot检测pCRMP-2随时间变化的规律; 6.新生鼠皮质神经元原代培养,于重组RGMa体外诱导前,进行Rho-kinase及GSK-3β特异性阻滞预处理,用Western blot检测细胞内pCRMP-2的表达水平。 结果 1. MCAO/再灌注后,大鼠缺血侧皮质内RGMa mRNA及蛋白表达明显升高(p0.01),而CRMP-2表达显著降低(p0.01);用rAd-shRGMa干预后,大鼠在第2天时的RGMa水平较MCAO/再灌注组显著降低(p0.01),CRMP-2水平明显升高(p0.01),至第7天时基本接近正常水平。 2. MCAO/再灌注后,缺血侧皮质内pCRMP-2蛋白水平显著升高(p0.01),此时轴突破坏最为严重,NF200表达明显减少(p0.01),大鼠神经功能缺损明显(p0.01)。而rAd-shRGMa组大鼠的pCRMP-2蛋白水平明显降低(p0.01),部分轴突得到保存,但大鼠神经功能未见显著改善(p0.05);至第7天时,pCRMP-2水平仅稍高于正常水平(p0.01),NF200表达明显增多(p0.01),大鼠的神经功能缺损已不明显(p0.01)。 3. MCAO/再灌注组大鼠缺血侧皮质pCRMP-2蛋白表达与RGMa蛋白表达pCRMP-2呈直线正相关(r=0.994),与NF200呈直线负相关(r=-0.895)。 4.离体原代培养的皮质神经元存活状态良好,胞体丰满,轴突生长正常,纯度在90%以上。 5.加入重组RGMa培养后,各孔神经元轴突明显回缩(p0.01),细胞透光性欠佳,大部分神经元仅见胞体,而轴突基本消失;在Y-27632、GSK-3βinhibitor联合RGMa培养孔里,神经元轴突回缩现象较单纯RGMa培养孔有所改善(p0.01)。 6.随着RGMa诱导时间的延长,细胞内pCRMP-2的水平逐渐升高,6 h起即高于正常水平(p0.01),到24 h达到高峰(p0.01),以后开始下降,48 h的水平与6 h没有显著性差异(p0.05);经Rho-kinase及GSK-3β特异性抑制剂预处理后的神经元,对RGMa的诱导作用出现明显抵抗,pCRMP-2水平与正常时无统计学差异(p0.05)。 结论 脑缺血/再灌注后皮质内RGMa及pCRMP-2水平明显增高,腺病毒介导的RGMa特异性RNAi可以明显降低RGMa的表达,抑制CRMP-2的磷酸化,从而促进轴突再生及神经功能的恢复。RGMa可能是通过同时激活Rho-kinase及GSK-3β信号通路调控CRMP-2的磷酸化,介导神经元轴突缩短的。
【学位授予单位】:重庆医科大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:R363

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【参考文献】
中国重要会议论文全文数据库 前1条
1 尹红蕾;秦新月;;RGMa和RhoA在局灶性脑缺血/再灌注大鼠皮质及海马内表达规律及其与轴突生长关系的研究[A];第十一届全国神经病学学术会议论文汇编[C];2008年
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1 尹红蕾;RGMa和RhoA在脑缺血大鼠皮质和海马内的表达及其干预的实验研究[D];重庆医科大学;2008年
2 吴小慧;RGMa特异性RNAi对MCAO/再灌注大鼠脑组织中RGMa表达、轴突生长及神经功能的影响[D];重庆医科大学;2010年
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1 花嵘,李玺,龙建军,董红燕,李德本,刘军权;大鼠胰腺缺血再灌注损伤微循环改变的实验[J];中国临床康复;2005年18期
2 徐凤;王爱玲;陈峰;周美玲;;骨髓间充质干细胞预移植1周后构建心肌缺血再灌注损伤大鼠模型[J];中国组织工程研究与临床康复;2011年01期
3 王东,吴清玉,陈兴彭,杨秀滨;抑制核因子-κB表达对大鼠供肺缺血-再灌注损伤的保护作用[J];中华器官移植杂志;2005年07期
4 林春,黄扬,徐隽,王晶,陈崇宏;蕲蛇酶对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用[J];中国药理学通报;2005年09期
5 王立;邹锋;;大鼠肢体IRI后脊髓神经元Fos的表达[J];四川解剖学杂志;2005年04期
6 刘新波;张雪萍;李亚丽;瞿舜贤;;异丙酚对大鼠小肠缺血再灌注后肺损伤的作用[J];咸宁学院学报(医学版);2005年06期
7 于维东;杨军;范红杰;胡新华;;环氧合酶2基因在大鼠脑缺血再灌注损伤中的表达及意义[J];中国动脉硬化杂志;2007年05期
8 孙玉生,皇甫超申;大鼠前脑缺血再灌注不同时间神经元损伤情况[J];郑州大学学报(医学版);2002年05期
9 胡国汉,卢亦成,董艳,张光霁,朱诚,Bruce Lyeth,Joe Watson;3-CP对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的脑保护作用[J];中国临床神经外科杂志;2005年02期
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1 刘书馨;陈香美;尹忠;吕杨;师锁柱;刘维萍;;大鼠肾脏缺血/再灌注损伤E-cadherin表达的变化[A];中华医学会肾脏病学分会2006年学术年会论文集[C];2006年
2 芦玲巧;于刚刚;马立权;郑少鹏;张立克;;CYP2J3基因转染对大鼠心肌缺血/再灌注损伤的影响[A];第七届海峡两岸心血管科学研讨会论文集[C];2009年
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4 高晓霞;;心复宁Ⅰ号对急性心肌缺血/再灌注损伤大鼠心肌组织SOD、GSH-Px、MDA含量的影响[A];面向21世纪的科技进步与社会经济发展(下册)[C];1999年
5 魏颖鸿;孙锋;王金春;闻霞;杨继红;马明辉;孙乾;;低频连续和脉冲超声波对脑缺血再灌注大鼠不同影响的研究[A];第十一届全国神经病学学术会议论文汇编[C];2008年
6 杨琳;高春锦;庞宝森;王国忠;葛环;;高压氧对急性脑缺血再灌注损伤大鼠可溶性粘附分子的影响[A];中华医学会第十三次全国高压氧医学学术会议论文汇编[C];2004年
7 方七五;冷玉芳;张琰;;氯胺酮后处理及其联合缺血后处理对肝再灌注损伤的保护作用[A];2009年西部麻醉学术论坛论文汇编[C];2009年
8 杨鹏麟;张明;龚永生;范小芳;唐疾飞;;Apelin在大鼠心肌缺血/再灌注损伤及缺血预处理中的作用[A];2006年浙江省心血管病学学术年会论文汇编[C];2006年
9 徐小惠;刘毅;胡燕;金满文;;五甲基槲皮素对麻醉大鼠心脏缺血-再灌注损伤的作用[A];2008心血管药理学术研讨会论文汇编[C];2008年
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1 ;关木通对大鼠致癌性的实验研究[N];中国医药报;2003年
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3 ;丹参能加快放创复合伤大鼠创面愈合[N];中国中医药报;2005年
4 郑健刚;杜元灏;石学敏;针刺能增加脑缺血大鼠脑血流量[N];中国医药报;2005年
5 ;新抗病毒抗生素17997在大鼠体内药代动力学和组织分布研究[N];中国医药报;2003年
6 ;刺五加皂甙对大鼠血管性痴呆有防治作用[N];中国中医药报;2005年
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7 杨建新;腹部术后疲劳综合征模型及抗术后疲劳方作用的研究[D];湖北中医学院;2004年
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5 张虹;白介素-18融合蛋白对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及其增效作用[D];吉林大学;2012年
6 向芳;围产期大鼠血脂组成与乳腺炎症相关基因的表达变化研究[D];四川农业大学;2011年
7 刘圣林;骨髓悬液对离体大鼠心脏缺血再灌注损伤的保护作用[D];江西医学院;2004年
8 吴芳庚;环境温度变化致大鼠小肠黏膜免疫屏障损伤的研究[D];南昌大学;2011年
9 闫芳;Ro25-6981改善大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的实验研究[D];苏州大学;2011年
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