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《重庆医科大学》 2010年
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基底样乳腺癌与管腔A乳腺癌干/祖细胞的表型和功能研究

陈元文  
【摘要】:研究背景 近年来的研究表明,乳腺癌是一种高度异质的疾病,由五种在形态、基因表达谱、生物学和临床后果差异明显的分子亚型组成。随着乳腺癌肿瘤干细胞的证实,人们认识到乳腺癌的分子亚型和白血病的亚型类似,彼此间可能是细胞起源不同的独立性疾病实体。因此推测各分子亚型有生物学功能和细胞表型不同的肿瘤干细胞。为此,本研究选取五个分子亚型中差别最为明显的基底样乳腺癌和管腔A乳腺癌,分别分离培养各自的干/祖细胞,对比研究两种细胞的生物学功能和细胞表型。 第一部分乳腺癌干/祖细胞的分离培养与鉴定 目的从人乳腺癌新鲜组织分离、培养具有干细胞样特性的肿瘤细胞,通过细胞表型鉴定,结合体内、外功能分析,鉴定其是否具有肿瘤干细胞的生物学特性,并进一步探讨了乳腺癌细胞原代无血清培养的影响因素。 方法将乳腺癌细胞接种于添加生长因子的无血清培养基,通过乳腺癌微球(mammosphere, MS)无血清悬浮培养富集乳腺癌干/祖细胞;应用连续无血清传代培养生成MS检测乳腺癌微球细胞(mammosphere-derived cells, MSDCs)的自我更新能力,血清诱导检测其分化能力;采用间接免疫荧光标记、激光共聚焦扫描镜观测MSDCs的CD34、神经巢蛋白(Nestin)和上皮特异性抗原(ESA)的表达;构建裸鼠皮下移植瘤模型,观察MSDCs的成瘤情况和组织学特点。 结果30例未化疗乳腺癌标本除2例污染外均成功培养出MS,12例化疗后乳腺癌标本有5例未获得足够的乳腺癌细胞,另7例富集MS,能在无血清培养基中形成MS; MSDCs分化前后呈ESA阳性表达,但均不表达CD34、nestin蛋白,证明其为上皮干细胞来源;MSDCs不仅可在无血清培养基中连续传代形成MS,能经血清诱导多向分化,还能在裸鼠体内形成与原发瘤性质相同的移植瘤,表现出干细胞样特性。 结论本研究从乳腺癌新鲜组织分离培养获取的MSDCs为具有肿瘤干细胞生物学特性的乳腺癌细胞,可用于乳腺癌干/祖细胞的实验研究。 第二部分基底样乳腺癌与管腔A乳腺癌干/祖细胞的干细胞生物学行为比较 目的从人基底样乳腺癌和管腔A乳腺癌新鲜组织分离、培养具有干细胞样特性的肿瘤细胞,比较其体外的增殖能力、自我更新能力和分化能力以及在体内的生长能力,探讨其生物学特点与临床病理特点的关系。 方法将乳腺癌细胞接种于添加生长因子的无血清培养基,通过无血清非粘附性乳腺癌微球培养富集两个乳腺癌亚型的MSDCs;通过体外无血清培养并测定生长曲线,评估两种MSDCs的增殖能力;应用连续无血清克隆形成实验,计算乳腺癌微球形成效率(mammosphere forming efficiency, MSFE),比较两种MSDCs的自我更新能力;血清诱导分化并测定生长曲线,评估两种MSDCs的分化能力;构建裸鼠皮下移植瘤模型,比较移植瘤的生长情况和组织学特点。 结果基底样乳腺癌和管腔A乳腺癌均成功培养出MS,基底样乳腺癌的MS生长速度快,密度大,MS体积大,包含的细胞数量多;基底样乳腺癌MSDCs倍增时间短,生长曲线迅速上升,管腔A乳腺癌MSDCs倍增时间长,生长曲线则走行平缓,两者增殖活力有显著性差别(P0.05);基底样乳腺癌和管腔A乳腺癌的MSDCs均可在无血清培养基中连续传代形成MS,基底样乳腺癌比管腔A乳腺癌具有更高的原代细胞MSFE,但基底样乳腺癌传代过程中,细胞容易贴壁分化,MSFE持续下降,传代多不超过15代;而管腔A乳腺癌,虽然丧失克隆性成能力的悬浮单细胞明显增多,但贴壁分化细胞较少,MSFE下降较慢,均可传代20次以上;经血清诱导后,基底样乳腺癌MSDCs比管腔A乳腺癌的MSDCs分化早,增殖更快。基底样乳腺癌MSDCs在裸鼠体内形成的移植瘤生长速度比管腔A乳腺癌的MSDCs的移植瘤快,呈现低分化、血管丰富的恶性肿瘤病理特征。 结论基底样乳腺癌MSDCs有更强的增殖能力和自我更新能力、分化能力,但因容易分化导致传代形成克隆的能力下降。 第三部分基底样乳腺癌与管腔A乳腺癌干/祖细胞的表型特征比较 目的从人基底样乳腺癌和管腔A乳腺癌新鲜组织分离、培养具有干细胞样特性的肿瘤细胞,比较其体外分化前后的细胞表型变化,进一步探讨其细胞起源和异质性形成的机制。 方法制作细胞涂片,间接免疫荧光化学检测细胞角蛋白CK14、CK18和CK19在基底样乳腺癌和管腔A乳腺癌MSDCs分化前后的表达情况;流式细胞术检测CD44和CD24在基底样乳腺癌和管腔A乳腺癌MSDCs分化前后的表达情况及CD44+CD24-细胞的含量;分析原代细胞内CD44+CD24-细胞的含量与MSFE的关系。 结果基底样乳腺癌的MSDCs呈CK19+/CK14+CK18-,经血清诱导分化后,表达管腔上皮标志CK18和肌上皮标志CK14;管腔A乳腺癌的MSDCs表型呈CK18+/CK19+/CK14-,经诱导分化后表达管腔上皮标志CK18和CK19,不表达肌上皮细胞标志CK14; CD24在基底样乳腺癌表达极低或无表达,但在管腔A乳腺癌高表达。基底样乳腺癌原代细胞CD44-/CD24细胞的含量较高,含CD44+/CD24-/low细胞2.52%±0.58%,而管腔A乳腺癌含量最高的是CD44-/CD24+细胞,但不含CD44+/CD24-/low细胞或含量极低基底样乳腺癌和管腔A乳腺癌 基底样乳腺癌CD44-/CD24-细胞的含量较高,均含有CD44+/CD24"/low细胞,而管腔A乳腺癌含量最高的是CD44-/CD24+细胞,13例标本中只有3例检出CD44+/CD24-/low细胞,且含量均低于1%。 结论基底样乳腺癌和管腔A乳腺癌MSDCs有不同的细胞表型,两者的分化能力和分化方向也不同,可能有不同的细胞起源。
【学位授予单位】:重庆医科大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:R737.9

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【参考文献】
中国期刊全文数据库 前4条
1 陈健;陈增良;;乳腺癌干细胞的分选鉴定[J];癌症;2010年03期
2 王榕;蒋敬庭;杨伊林;吴昌平;;肿瘤干细胞的分离与纯化研究进展[J];中国组织工程研究与临床康复;2009年01期
3 李海志;易彤波;武正炎;;悬浮培养联合化疗药物筛选乳腺癌干细胞[J];中国癌症杂志;2008年03期
4 平轶芳;姚小红;卞修武;陈剑鸿;章容;易良;周志华;;人胶质瘤干细胞趋化因子受体CXCR4活化促进血管生成的作用[J];中华病理学杂志;2007年03期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 毕琳;李键;王中乾;;小鼠乳腺上皮细胞体外原代培养方法研究进展[J];安徽农业科学;2010年07期
2 苏媚;方向明;阚雪芹;王海玲;刘文倩;谈建中;;观赏植物“孩儿莲”及其近缘植物的RAPD分析[J];安徽农业科学;2010年10期
3 余时沧;易良;周志华;姚小红;平轶芳;卞修武;;应用长春新碱分离与鉴定U87细胞系中的胶质瘤干细胞[J];癌症;2007年12期
4 信吉伟;王晓洪;;RNAi技术与基因治疗[J];北京生物医学工程;2006年06期
5 王秀卿;王志玲;刘会敏;;人表皮干细胞的培养技术[J];白求恩军医学院学报;2009年05期
6 侯天勇,伍亚民,张玉波,龙在云;维甲酸对神经干细胞的增殖和分化效应[J];中华神经医学杂志;2005年09期
7 姜黔峰,商黔惠,巩亮,郭艳,刘志江,程晓明;成人肠系膜动脉平滑肌细胞培养的探讨[J];重庆医学;2005年05期
8 郭国宁,张正丰,周跃,张伟,曹国永;Cbfa1基因转移对原代培养的兔皮肤成纤维细胞的影响[J];重庆医学;2005年08期
9 王艳华;王东武;吴楠;刘东宁;王一;;视神经损伤后Rock在大鼠视网膜中的分布及表达研究[J];重庆医学;2006年24期
10 冯虎翼;吴忠均;朱宇;;联合转染PDGF和c-myc反义寡核苷酸抑制移植血管狭窄研究[J];重庆医学;2009年13期
中国重要会议论文全文数据库 前4条
1 周静;韦红梅;戎嵘;朱俊东;;大豆异黄酮对人乳腺癌MCF-7细胞侵袭转移能力的影响及其与PPARγ的关系研究[A];中国西部第六届营养与健康学术会议论文集[C];2011年
2 刘哲;常青;张正国;许增禄;;体视学组织结构定量分析软件的开发与应用[A];第十届中国科协年会论文集(三)[C];2008年
3 龚林;张西北;袁峰;;镀铅法在小肠整装铺片肠神经系统内的染色探讨及其效果分析[A];第三届全国解剖学技术会议论文集[C];2011年
4 周良学;徐建国;陈海峰;蔡博文;郭刚;仝爱平;游潮;;趋化因子SDF-1及其受体CXCR4在釉质上皮和鳞型乳头型颅咽管瘤中的差异表达与临床意义[A];中国抗癌协会神经肿瘤专业委员会第八届学术会议论文集[C];2011年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 赵菊花;圣愈汤传统煎剂和配方颗粒对骨髓抑制小鼠造血调控的实验研究[D];成都中医药大学;2011年
2 董华英;化疗后乳腺癌组织中的癌干细胞微球体分离培养与鉴定[D];重庆医科大学;2011年
3 冯健;齐墩果酸对大鼠血管平滑肌细胞中血红素氧合酶1表达的影响及其作用机制的研究[D];第三军医大学;2011年
4 施巧婷;北山羊体细胞异种克隆技术的研究[D];新疆农业大学;2004年
5 周苏宁;洛伐他汀对缺氧复氧心肌细胞保护作用的研究[D];山东大学;2004年
6 丁兴华;中枢神经系统血管母细胞瘤的临床和基础研究[D];复旦大学;2005年
7 车艳辞;高强度聚焦超声及声动力学效应对卵巢癌细胞的体外效应[D];山东大学;2005年
8 张志栋;用对虾血细胞单克隆抗体研究分析白斑症病毒的受体[D];中国海洋大学;2005年
9 孙逊;静脉注射用治疗基因靶向传递系统的研究[D];四川大学;2005年
10 饶朝龙;ras基因DNA损伤检测方法及环境化学物致癌分子机制研究[D];四川大学;2005年
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1 邢亚峰;填精补肾方预防三阴性乳腺癌术后复发转移的临床研究[D];成都中医药大学;2010年
2 甘云辉;携改良型HBVpre-S1基因表达载体的构建及相关研究[D];泸州医学院;2011年
3 张庆莲;米托蒽醌聚乳酸纳米粒的制备和细胞摄取研究[D];成都中医药大学;2011年
4 马晓雯;肺癌和胰腺癌干细胞靶向治疗的研究[D];北京协和医学院;2011年
5 李艳艳;非小细胞肺癌患者尿exosomes中差异蛋白质组研究[D];重庆医科大学;2011年
6 弓超;嗜热菌糖苷酶基因转染奶牛乳腺上皮细胞的研究[D];内蒙古农业大学;2011年
7 薛宏艳;转Fat-1基因蒙古绵羊胎儿成纤维细胞系的建立[D];内蒙古农业大学;2011年
8 李保松;细胞融合诱导上皮源性肿瘤发生的实验研究[D];天津医科大学;2011年
9 刘淑丹;慢性癫痫大鼠脑内髓鞘发育变化的实验研究[D];第三军医大学;2011年
10 左玉梅;AT2R基因转染表达对大鼠血管平滑肌细胞生物学特性的影响[D];第三军医大学;2011年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前6条
1 朱海英,张朵,谢东甫,王新民,周旭宇,Joseph T Lau,胡以平;人肝癌细胞系P2-HCC的建立及体外诱导分化特性的初步研究[J];第二军医大学学报;2005年03期
2 曹云新;千年松;杨安钢;胡金涛;;流式细胞分选术和Rho123在分离MHCC97肿瘤干细胞中的应用[J];中国组织工程研究与临床康复;2007年46期
3 温玉明;刘坤;华成舸;潘剑;李龙江;陈绍维;王昌美;高庆红;;腺样囊性癌细胞系中肿瘤干细胞的生物学特性初探[J];中国口腔颌面外科杂志;2006年04期
4 卞修武;;对肿瘤血管生成研究之肿瘤微血管构筑表型异质性的思考[J];中华病理学杂志;2006年03期
5 黄强;董军;朱玉德;张全斌;季晓燕;王爱东;兰青;;人脑胶质瘤组织中分离与培养肿瘤干细胞[J];中华肿瘤杂志;2006年05期
6 董强刚;姚明;耿沁;周瑾;闫明霞;;人肺腺癌干细胞的分离及鉴定[J];肿瘤;2008年01期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 杨孟选;可妮;;CTF联合化疗方案在乳腺癌新辅助化疗中的应用[J];中国肿瘤临床与康复;2011年05期
2 罗善山;陈俊强;;乳腺癌分子分型的研究进展[J];微创医学;2009年03期
3 杨斌;刘强;;乳腺癌的术前新辅助化疗36例治疗体会[J];中国社区医师(医学专业);2011年30期
4 汤晓锦;杨志芬;徐婷芳;;乳腺癌治疗期间的心理支持[J];内蒙古中医药;2011年22期
5 毕诗胜;苏加庆;;老年女性乳腺癌70例诊治体会[J];吉林医学;2011年33期
6 章静波;;乳腺癌患者的血清及肿瘤细胞胞液中αhCG的分布及特点[J];国际检验医学杂志;1981年04期
7 覃毅;;在乳腺癌中发现前列腺蛋白[J];国外医学情报;1995年17期
8 梁晓坤,陈永宁;乳腺癌患者的生活质量[J];国外医学.护理学分册;2001年06期
9 于庭,王春娥,单桂芬,金玉芬,张勇,王宝才;乳腺癌患者手术前后血清中IL-2及sIL-2R水平测定[J];中国实验诊断学;2003年05期
10 田晓霞;;乳腺癌手术患者的健康教育[J];黔南民族医专学报;2006年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 卢虹宇;;浅谈乳腺癌患者的心理护理[A];中华护理学会全国肿瘤护理学术交流暨专题讲座会议论文汇编[C];2009年
2 王龙;王健;岳峰;;三阴性乳腺癌钼靶X线特征[A];2010中华医学会影像技术分会第十八次全国学术大会论文集[C];2010年
3 吴茂林;任立英;田金生;张俊英;李红英;靳丽;;乳腺癌的高频声像特征与病理基础分析[A];新世纪 新机遇 新挑战——知识创新和高新技术产业发展(下册)[C];2001年
4 黄明光;段燕;张林浩;曹爱红;薛艳峰;董英俊;;乳腺癌患者化疗前后心率变异的变化[A];第十三次全国心血管病学术会议论文集[C];2011年
5 潘绪莉;;社会支持对乳腺癌患者术后心理状态的影响[A];中华护理学会第8届全国造口、伤口、失禁护理学术交流会议、全国外科护理学术交流会议、全国神经内、外科护理学术交流会议论文汇编[C];2011年
6 王蓓;傅健飞;陈英;;三阴乳腺癌的预后分析[A];2009年浙江省肿瘤学术年会暨肿瘤诊治新进展学习班论文汇编[C];2009年
7 徐艳君;张金玉;郑征;葛银林;;乳腺癌COMT、P21基因单核苷酸多态性的研究[A];华东六省一市生物化学与分子生物学会2009年学术交流会论文摘要汇编[C];2009年
8 龚建舟;蔡刚;陈兰飞;孟依然;陆宏芬;杨丽华;;运用影像引导对乳腺癌加速分割照射精度的研究[A];中华医学会放射肿瘤治疗学分会六届二次暨中国抗癌协会肿瘤放疗专业委员会二届二次学术会议论文集[C];2009年
9 李卉;王琼;黄源;李佳圆;李卉;陶苹;雷放鸣;;SULT1A1 Arg213His基因多态性、烟熏肉类摄入与乳腺癌关系的病例对照研究和Meta分析[A];全国肿瘤流行病学和肿瘤病因学学术会议论文集[C];2011年
10 孙喜文;马玉彦;杨艳梅;蔡会龙;;TOX3基因单核苷酸多态性与乳腺癌危险性[A];全国肿瘤流行病学和肿瘤病因学学术会议论文集[C];2011年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 记者 杨步月;专家:乳腺癌患者应避免过度治疗[N];新华每日电讯;2008年
2 记者 包颖;救助贫困乳腺癌患者[N];中国社会报;2008年
3 健康时报特约记者 吴志;乳腺癌患者多举重[N];健康时报;2009年
4 记者 姬薇;我国乳腺癌患者九成“一刀切”[N];工人日报;2010年
5 中国抗癌协会乳腺癌专业委员会副主任委员 徐兵河;三原则应对“中国特色”乳腺癌[N];光明日报;2010年
6 记者 顾泳;乳腺癌近十年发病率增47%[N];解放日报;2010年
7 张献怀;治疗乳腺癌局部溃烂有新招[N];健康报;2010年
8 中国医学科学院肿瘤医院副院长 石远凯;乳腺癌有“中国特色”[N];健康时报;2010年
9 刘沙沙;个体化管理是乳腺癌规范化治疗的最佳途径[N];中国医药报;2010年
10 本报记者 慕欣;治疗年轻乳腺癌,应考虑得更多[N];医药经济报;2011年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 陈元文;基底样乳腺癌与管腔A乳腺癌干/祖细胞的表型和功能研究[D];重庆医科大学;2010年
2 李慧慧;三阴性乳腺癌干细胞的分离、鉴定及生物学行为的初步研究[D];北京协和医学院;2012年
3 徐晓恩;以同一病人来源的系列乳腺细胞系研究乳腺癌致病的蛋白质基础[D];复旦大学;2011年
4 罗剑锋;尿茶多酚、谷胱甘肽转移酶基因多态性与乳腺癌发病风险的巢式病例对照研究[D];复旦大学;2010年
5 王永恒;中药复方消岩液对乳腺癌的抑制作用及其机制研究[D];中国海洋大学;2010年
6 王红;钙化型乳腺癌基于蛋白质组学技术的血清诊断模型的建立和钙化机制的研究[D];复旦大学;2009年
7 林燕;心理打击性事件与乳腺癌患病的相关性研究[D];北京协和医学院;2012年
8 喻林;乳腺癌分子分型及其与预后的相关研究[D];复旦大学;2010年
9 叶云;乳腺癌组织学分级特征基因提取及基因集富集分析[D];南方医科大学;2010年
10 聂刚;乳腺癌分子亚型的相关研究:临床特点,危险因素及生存分析[D];吉林大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 王明鑫;级联激活的免疫细胞治疗对乳腺癌患者生存质量改善的研究[D];昆明医学院;2010年
2 李曦洲;乳腺癌各分子亚型中骨桥蛋白的表达及其临床意义[D];第二军医大学;2010年
3 魏国峰;乳腺癌的彩超特征与病理分型分析[D];山西医科大学;2010年
4 丁晓燕;认知—行为干预对围手术期乳腺癌患者情绪及免疫功能的影响[D];南京中医药大学;2010年
5 刘加军;滋水清肝法治疗乳腺癌类围绝经期综合征的临床研究[D];北京中医药大学;2010年
6 姜勇;个体化治疗软件对乳腺癌术后辅助化疗有效性的验证研究[D];南京医科大学;2011年
7 谷明;骨桥蛋白及其相关因子在乳腺癌、癌旁组织中表达及意义[D];中国医科大学;2010年
8 邬江华;红花岗区5000例妇女乳腺普查结果分析[D];遵义医学院;2010年
9 张伟;三阴乳腺癌的临床病理特征和预后分析[D];安徽医科大学;2011年
10 魏丽娟;吲哚胺2,3-双加氧酶在乳腺癌中的表达及其与肿瘤血管形成关系的初步研究[D];天津医科大学;2010年
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