收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

高效液相色谱法测定血样中甲硫氨酸代谢产物的方法学研究与应用

唐秀芳  
【摘要】:目的: 1.建立一种同时测定小鼠红细胞内S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosylmethionine,SAM)和S-腺苷同型半胱氨酸(S-adenosylhomocysteine,SAH)的高效液相色谱(HPLC)-程序波长紫外检测方法。 2.用所建立的HPLC-程序波长紫外检测方法测定叶酸缺乏小鼠和正常小鼠红细胞中SAM与SAH的浓度,从而了解叶酸缺乏小鼠红细胞中SAM与SAH的代谢状态。 3.建立测定人血浆中总同型半胱氨酸(totalhomocysteine,tHcy)的柱前衍生高效液相色谱-荧光检测方法(HPLC-FD)。 4.用建立的HPLC-FD方法分别测定了高血压患者和正常人血浆中tHcy的浓度。探讨高血压患者tHcy代谢变化情况。 方法: 1.小鼠红细胞内SAM和SAH的同时测定:红细胞样品经净化处理后,采用AgilentZORBA×Eclipse×DB-C8柱(150mm×4.6mm,5μm)进行分离。流动相为含3mmol/L庚烷磺酸钠的40mmol/L的磷酸二氢钠缓冲液(pH3.72):甲醇95:5(v/v),流速为0.9ml/min;柱温为35℃;紫外程序检测波长设定为0~8.00min,450nm,8.01~16.00min,260nm。进样量为20μl,检测时间为16.00min。利用此方法测定10例正常饮食小鼠和19例叶酸缺乏小鼠红细胞中SAM和SAH的浓度。 2.人血浆中tHcy的测定:tris-(2-carboxylethyl)-phosphine(TCEP),N-(1-pyrenyl)maleimide(NPM)分别作为还原剂和衍生剂对血浆样品进行处理,采用AgilentHypersilODS柱(250.0mm×4.0mm,5μm)进行分离。采用梯度洗脱程序进行色谱分离,色谱流动相由15mmol/L醋酸钠溶液(A),乙腈(B),混合酸溶液(C)(300ml水中含1ml醋酸和1ml磷酸)组成,柱温设定为25℃,采用荧光检测的激发波长设定为330nm,荧光波长设定为380nm。用本方法分析测定了7例高血压患者和19例健康志愿者血浆tHcy的浓度。 结果: 1.SAH与SAM的保留时间分别为12.2min和13.6min,线性范围分别为0.25~3.0μg/ml和0.5~10μg/ml;检出限分别为0.15μg/ml和0.07μg/ml。SAH与SAM的日内变异系数与日间变异系数分别在1.0%~6.4%和1.3%~7.3%之间,两种分析物的平均回收率在80%~116%之间。 2.叶酸缺乏小鼠组红细胞中SAH浓度明显高于正常对照组小鼠组,两者间差异存在统计学意义(P0.01),而两组间SAM无显著差异。 3.tHcy的保留时间为5.8min,线性范围为0.500~100μmol/L,检出限为0.0160μmol/L,平均回收率为(102±4.9)%。日间与日内变异系数小于4%。高血压患者血浆tHcy高于健康对照组,两组间差异具有统计学意义(P0.05)。 结论: 1.本研究建立了同时测定小鼠红细胞中SAM和SAH浓度的HPLC-程序波长紫外检测方法。此方法操作简便,灵敏,准确度高,为小鼠SAM代谢研究提供实用可靠的方法。 2.本研究发现叶酸缺乏小鼠SAH的代谢发生了紊乱。 3.本研究建立了以NPM为衍生剂,TCEP为还原剂的tHcy柱前衍生荧光检测法。该方法采用了梯度洗脱缩短了分析时间。本方法简便,快捷,线性相关性好,准确度高,具有较高的实用价值,可用于血浆tHcy的科研和临床定量测定。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 申文增,徐月清,武变英,李立平,孙炜,季贞洁,张亚飞,曹志然,陈淑兰;红光照射对小鼠红细胞免疫的影响[J];河北职工医学院学报;1998年04期
2 杨秀珍,张英博,樊丽,崔立然;复方芦荟饮对小鼠红细胞及肝超氧化物歧化酶活性的影响[J];中国药业;2000年04期
3 朱梅菊,屈菊兰,李红;螺旋藻复方对运动小鼠红细胞相关指标的影响[J];湛江师范学院学报;2004年03期
4 YouinouPY;LydyardPM;杜卫东;张学军;;人类未成熟B淋巴细胞上小鼠红细胞受体——仍是免疫血液学有价值的工具[J];国外医学.输血及血液学分册;1988年02期
5 鲁重元,付敏庄,黎定疆,林峰,李家贤,赵祥文;静脉注射过氧化氢对小鼠红细胞膜的损伤[J];湖南医科大学学报;1989年01期
6 钟晓芝;绿豆对小鼠红细胞免疫粘附功能的影响[J];浙江中医杂志;2000年06期
7 游龙武,吴正治,李耀芳,张永峰,李雪梅;补肝养髓方对慢性铝中毒老年痴呆小鼠红细胞免疫及调控功能的影响[J];中国中医药科技;2003年04期
8 袁洪亮;;龙葵多糖对H_(22)荷瘤小鼠红细胞膜功能的影响[J];哈尔滨商业大学学报(自然科学版);2011年01期
9 张龙兴,邱云,王聚君;感染疟原虫小鼠红细胞膜的流动性[J];中国寄生虫学与寄生虫病杂志;1993年02期
10 韩景田,叶路;白酒长期灌胃对小鼠红细胞免疫粘附功能的影响[J];解放军预防医学杂志;1997年06期
11 韩景田,叶路;二甲苯对小鼠红细胞免疫粘附功能的影响[J];职业与健康;1998年06期
12 谢亚雄;小鼠红细胞中铅和硒的分布以及铅对硒的影响的研究[J];职业卫生与病伤;1999年03期
13 江键,王小平,叶广,宋诚荣,崔黎丽;静电场修复烫伤小鼠红细胞驻极态的机理研究[J];中原工学院学报;2003年S1期
14 朱梅菊,屈菊兰,李红;螺旋藻及其复方对运动小鼠红细胞形态及自由基代谢的影响[J];中国运动医学杂志;2003年05期
15 屈菊兰,朱梅菊,唐晓山,李红;螺旋藻及其复方对游泳训练小鼠红细胞形态、血红蛋白含量的影响[J];电子显微学报;2005年02期
16 章江洲;力竭性游泳对小鼠红细胞腺苷脱氨酶及超氧化物歧化酶活性的影响[J];中国运动医学杂志;1999年02期
17 王惠艳,刘伯阳,姚淑娟;益生菌和益生元对小鼠红细胞免疫功能的影响[J];中国微生态学杂志;2000年01期
18 刘华一,王蓉,胡利明;仙碧方对荷瘤小鼠红细胞粘附肿瘤细胞能力作用的实验研究[J];天津中医;2001年03期
19 韩小燕;刘春雨;于洋;;蜂胶对小鼠红细胞酶活性及血浆自由基代谢的影响[J];中国食物与营养;2009年05期
20 叶路,董小青,韩景田,邢杰,周景峰;热暴露对小鼠红细胞免疫粘附功能的影响[J];卫生毒理学杂志;1997年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 季宇彬;陈学军;汲晨锋;;高效毛细管电泳分析芦笋多糖对荷瘤小鼠红细胞的影响[A];第11届全国离子色谱学术报告会论文集[C];2006年
2 季宇彬;陈学军;汲晨锋;;高效毛细管电泳分析芦笋多糖对荷瘤小鼠红细胞的影响[A];中国生物医学工程进展——2007中国生物医学工程联合学术年会论文集(下册)[C];2007年
3 陈晓光;赵全成;邸琳;刘新宇;永井隆之;山田阳城;;鹿茸糖肽对血瘀证小鼠红细胞膜唾液酸酶活性的影响[A];中国药理学会第八次全国代表大会暨全国药理学术会议论文摘要汇编[C];2002年
4 江键;王小平;叶广;宋诚荣;崔黎丽;;静电场修复烫伤小鼠红细胞驻极态的机理研究[A];中国物理学会第十一届静电、电磁防护与电磁兼容学术年会论文集[C];2003年
5 汲晨锋;;青龙衣多糖对S_(180)小鼠红细胞膜组分及流动性的影响[A];第六届全国免疫学学术大会论文集[C];2008年
6 陈晓光;赵全成;邸琳;刘新宇;永井隆之;山田阳城;;鹿茸糖肽对血瘀证小鼠红细胞膜唾液酸酶活性的影响[A];中国药理学会第八次全国代表大会论文摘要集(第二部分)[C];2002年
7 陈晓光;赵全成;邸琳;刘新宇;永井隆之;山田阳城;;鹿茸糖肽对小鼠红细胞膜唾液酸酶的抑制作用[A];第八届全国生化药理学术讨论会暨第七届Servier奖颁奖大会会议摘要集[C];2003年
8 季宇彬;肖凤;汲晨锋;邹翔;;青龙衣多糖对S_(180)小鼠红细胞膜唾液酸及膜电位的影响[A];2007年全国生化与生物技术药物学术年会论文集[C];2007年
9 杨耀芳;彭名淑;杨翊雯;宁爱华;黄昌辉;;土鳖虫对血虚小鼠红细胞免疫功能的实验研究[A];中国药理学会第八次全国代表大会暨全国药理学术会议论文摘要汇编[C];2002年
10 汲晨锋;;青龙衣多糖对S_(180)小鼠红细胞Ca~(2+),Mg~(2+)-ATPase活性、细胞内[Ca~(2+)]含量影响[A];第六届全国免疫学学术大会论文集[C];2008年
中国博士学位论文全文数据库 前3条
1 王艳杰;五味子多糖对S_(180)荷瘤小鼠红细胞膜离子通道活性的影响[D];黑龙江中医药大学;2007年
2 章正琰;小鼠红细胞分化及去核相关因子(MEDDF)cDNA全序列的筛选、克隆、表达与鉴定[D];中国协和医科大学;1999年
3 汲晨锋;芦笋多糖、芦笋皂苷抗肿瘤作用及机制研究[D];北京中医药大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前2条
1 袁洪亮;龙葵多糖对S_(180)、H_(22)荷瘤小鼠红细胞膜功能影响研究[D];哈尔滨商业大学;2011年
2 唐秀芳;高效液相色谱法测定血样中甲硫氨酸代谢产物的方法学研究与应用[D];重庆医科大学;2012年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978